【摘要】：目的:分析中重度牙周炎伴阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者牙周臨床指標(biāo)及認(rèn)知評(píng)分的差異性,運(yùn)用Illumina高通量測(cè)序(High-throughput sequencing,HTS)技術(shù)對(duì)患者齦下菌斑菌群的結(jié)構(gòu)特征及多樣性、代謝功能等進(jìn)行比較分析。基于微生物群落水平探討不同疾病狀態(tài)下齦下菌斑菌群特征,初步探討慢性牙周炎與AD的相關(guān)性。方法:根據(jù)診斷與納入標(biāo)準(zhǔn),收集2017年12月至2018年12月在遵義市三級(jí)以上綜合性醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科、遵義醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院牙周科和遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院體檢中心就診的45歲以上中重度牙周炎伴與不伴AD患者和健康人群共44例。將研究對(duì)象分為3組:中重度牙周炎伴AD組(n=14)、中重度牙周炎組(n=15)、正常對(duì)照組(n=15),分別標(biāo)記為:AP組、P組、N組。記錄受檢者基本信息情況、剩余牙數(shù)、牙周臨床指標(biāo)及認(rèn)知評(píng)分等;采集受檢人群(n=44)齦下菌斑,-80℃凍存,送往武漢華大基因提取齦下菌斑樣品DNA,擴(kuò)增16S r DNA V4區(qū)并使用Illumina Hi Seq2500平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序,采用QIIME、Mothur、SPSS等軟件對(duì)齦下菌斑菌群結(jié)構(gòu)特征及多樣性、代謝功能等進(jìn)行分析。結(jié)果:1.在性別、文化程度、血壓(收縮壓/舒張壓)、空腹血糖上,三組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);AP組在年齡上均顯著大于N組和P組(P0.05);而在MMSE量表評(píng)分中,AP組顯著低于N組、P組(P0.05)。2.三組研究對(duì)象剩余牙數(shù)、探診出血率(BOP%)、探診深度(probing depth,PD)和臨床附著喪失(clinical attachment loss,CAL)比較,結(jié)果顯示:AP組剩余牙數(shù)顯著少于N組、P組(P0.05);AP組BOP(%)、PD、CAL均顯著大于N組、P組(P0.05);而P組BOP(%)、PD、CAL也顯著大于N組(P0.05)。3.通過(guò)測(cè)序共獲得拼接有效序列(Clean Tags)2711831條,平均每個(gè)樣品61632條,Tags平均長(zhǎng)度為252 bp;所有樣品在97%的相似度下聚類(lèi)共產(chǎn)生1130個(gè)OTU,平均每個(gè)樣品259個(gè);與RDP數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)與物種注釋,共獲得24個(gè)門(mén)、41個(gè)綱、58個(gè)目、134個(gè)科、289個(gè)屬、379個(gè)種水平物種。4.通過(guò)比較三組間Beta多樣性指數(shù),得出AP組與P組菌群相似度更高;Alpha多樣性指數(shù)比較結(jié)果顯示AP組齦下菌斑菌群物種豐富度和均勻度顯著大于P組、N組(P0.05);P組菌群物種豐富度和均勻度均低于N組,盡管差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.PICRUST分析結(jié)果顯示:AP-P組、AP-N組、P-N組中,具有顯著性差異(P0.05)的細(xì)菌代謝活動(dòng)種數(shù)分別為:15/9、17/14、31/29,表明AP組齦下菌斑菌群代謝活動(dòng)較P組更活躍。6.通過(guò)Venn及Core-Pan分析發(fā)現(xiàn):各組組內(nèi)核心微生物數(shù)目:APPN,分別有23、36、42種;AP組獨(dú)有的核心微生物只有齦炎普雷沃菌、解糖普雷沃菌、Lachnoanaerobaculum saburreum 3種,其中齦炎普雷沃菌的增多可能與AD相關(guān);另外,對(duì)三組核心微生物中出現(xiàn)的6種經(jīng)典牙周致病菌(具核梭桿菌、牙齦卟啉單胞菌、福賽坦納菌、齒垢密螺旋體、中間普雷沃菌、直腸彎曲桿菌)平均相對(duì)豐度大小進(jìn)行排序發(fā)現(xiàn),均是PAPN,且進(jìn)行三組間差異性比較發(fā)現(xiàn):AP組、N組中牙齦卟啉單胞菌、齒垢密螺旋體顯著低于P組(P0.05)。7.在門(mén)水平上,AP組、N組中的放線(xiàn)菌門(mén)、厚壁菌門(mén)顯著大于P組(P0.05);P組中螺旋體、互養(yǎng)菌門(mén)則均顯著大于AP組、N組(P0.05);AP組、P組擬桿菌門(mén)顯著大于N組(P0.01);N組中變形桿菌門(mén)顯著大于P組、AP組(P0.01);梭桿菌門(mén)在各組中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用冗余分析進(jìn)行各菌門(mén)與MMSE評(píng)分和牙周臨床指標(biāo)相關(guān)性分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):螺旋體、互養(yǎng)菌門(mén)、變形桿菌門(mén)與MMSE評(píng)分呈正相關(guān);而在門(mén)水平上的梭桿菌、擬桿菌、厚壁菌及放線(xiàn)菌則呈負(fù)相關(guān);另一方面,螺旋體、互養(yǎng)菌門(mén)、梭桿菌門(mén)、擬桿菌門(mén)與BOP(%)、PD、CAL呈正相關(guān),而放線(xiàn)菌門(mén)、變形桿菌門(mén)則呈負(fù)相關(guān)。8.(1)在屬水平上,1種優(yōu)勢(shì)菌屬(纖毛菌屬)和3種非優(yōu)勢(shì)菌屬(Delftia、真桿菌屬、Saccharibacteria_genera_incertae_sedis)的增加可能與AD相關(guān);1種優(yōu)勢(shì)菌屬(坦納菌屬)和2種非優(yōu)勢(shì)菌屬(脫硫葉菌屬、Schwartzia)的增加,以及5種優(yōu)勢(shì)菌屬(棒狀桿菌屬、羅氏菌屬、奈瑟菌屬、聚集桿菌屬、口動(dòng)菌屬)和10種非優(yōu)勢(shì)菌屬(不動(dòng)菌屬、短波單胞菌屬、水棲菌屬等)的減少可能與中重度牙周炎相關(guān)。(2)在種水平上,3種優(yōu)勢(shì)菌種(纖細(xì)彎曲菌、變黑普雷沃菌、Prevotella maculosa)的增加可能與AD相關(guān);4種優(yōu)勢(shì)菌種(具核梭桿菌、中間密螺旋體、索氏密螺旋體、中間普雷沃菌)的增加和10種優(yōu)勢(shì)菌種(馬氏棒狀桿菌、牙齦二氧化碳噬纖維菌、微黃奈瑟菌、奇異口動(dòng)菌等)的減少可能與中重度牙周炎相關(guān)。結(jié)論:1.伴有AD的牙周炎患者具有更差的牙周健康狀況;2.中重度牙周炎伴AD患者齦下菌斑菌群是由23種核心微生物及相對(duì)豐度普遍更低的6種經(jīng)典牙周致病菌構(gòu)成的獨(dú)特微生物群;3.初步提示中重度牙周炎患者齦下菌斑微生物群落中4菌屬(纖毛菌屬、Delftia、真桿菌屬、Saccharibacteria_genera_incertae_sedis)和4菌種(齦炎普雷沃菌、纖細(xì)彎曲菌、變黑普雷沃菌、Prevotella maculosa)的增加可能與AD的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。
【圖文】：

實(shí)驗(yàn)總技術(shù)路線(xiàn)圖

析方法圖ndAnalysis Map釋LEFSE 分析PICRUST 分析冗余分析Beta多樣性Alpha多樣性onxSimpsonIndex物種聚類(lèi)分析物種多樣性取weightedunweightedUnifracIndex
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R781.42;R749.16

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本文編號(hào)：2686372