發(fā)布時(shí)間：2020-05-23 23:37

【摘要】： 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是癡呆中最常見(jiàn)的一種,其發(fā)病機(jī)制及病理過(guò)程國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過(guò)人腦組織、動(dòng)物模型、細(xì)胞模型等已經(jīng)做了大量的研究,但其確切病因尚不明確。目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)AD相關(guān)的人腦蛋白質(zhì)組學(xué)研究,本次實(shí)驗(yàn)利用中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)研究所組織庫(kù)收集的寶貴尸檢病例標(biāo)本進(jìn)行研究。 本次實(shí)驗(yàn)主要包括三個(gè)部分:1)利用HE、免疫組織化學(xué)方法對(duì)病例進(jìn)行篩選,根據(jù)病理診斷標(biāo)準(zhǔn)確診后,結(jié)合臨床診斷分組;2)通過(guò)熒光雙向差異凝膠電泳技術(shù)分離蛋白點(diǎn),并利用質(zhì)譜進(jìn)行蛋白點(diǎn)鑒定,搜庫(kù)并分析蛋白點(diǎn)在AD發(fā)病機(jī)制中的意義。3)選擇部分蛋白點(diǎn)進(jìn)行western blotting驗(yàn)證,證明雙向電泳的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。 論文的第一部分是對(duì)AD的病理學(xué)篩查,利用國(guó)際公認(rèn)的,發(fā)生特征性病理變化的抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,我們總共選擇了anti-β-Amyloid/AT8/Synuclin/Ubiquitin四種抗體,根據(jù)淀粉樣沉積、纖維纏結(jié)、神經(jīng)氈等染色情況以及HE染色顯示的神經(jīng)元丟失等判斷選擇出AD病例,并利用Synuclin染色結(jié)果鑒別出同樣具有癡呆表現(xiàn)的路易癡呆或帕金森病性癡呆。結(jié)合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)最終選擇出6例AD和6例正常對(duì)照,進(jìn)行下一步的蛋白質(zhì)組學(xué)研究。 論文的第二部分主要是:根據(jù)第一部分結(jié)論分成兩組的病例,提取對(duì)應(yīng)部位的新鮮腦組織蛋白,并進(jìn)行熒光雙向差異凝膠電泳,將獲得的6副三通道熒光圖輸入配套的圖像分析軟件Image Master 2D Platinum、Image Quant、DeCyder(Version6.5)進(jìn)行分析,分析得到的差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,明確差異蛋白點(diǎn)性質(zhì),搜庫(kù)分析其與AD的關(guān)系。在本次實(shí)驗(yàn)中共發(fā)現(xiàn)18個(gè)差異蛋白點(diǎn),鑒定了其中17個(gè),得到14個(gè)蛋白質(zhì),其中有兩種蛋白質(zhì)是由不同的蛋白點(diǎn)鑒定所得。經(jīng)查閱大量文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)獲得的蛋白質(zhì)多為氧化應(yīng)激相關(guān)、骨架蛋白、分子伴侶蛋白等,有4種蛋白質(zhì)未在以往的研究中報(bào)道,而另外的蛋白質(zhì)的含量變化也與國(guó)外研究報(bào)道的不盡相同。 第三部分主要利用western blotting方法驗(yàn)證了熱休克蛋白90α的含量變化,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與雙向電泳的結(jié)果一致,驗(yàn)證了雙向電泳的穩(wěn)定性和可靠性。 本研究為以后的AD發(fā)病機(jī)制的研究,為AD的診斷及治療提供了新思路。
【圖文】：

圖7-8額葉皮層那染色xZ(X)(左圖未見(jiàn)SPs沉積，，神經(jīng)細(xì)胞形狀、數(shù)t尚可，左下角小靜脈血管壁有著色，認(rèn)為其發(fā)生了淀粉樣變;右圖可見(jiàn)血管壁邸著色及皮層內(nèi)SPs沉積)

圖7-8額葉皮層那染色xZ(X)(左圖未見(jiàn)SPs沉積，神經(jīng)細(xì)胞形狀、數(shù)t尚可，左下角小靜脈血管壁有著色，認(rèn)為其發(fā)生了淀粉樣變;右圖可見(jiàn)血管壁邸著色及皮層內(nèi)SPs沉積)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張崗;參龍健腦膠囊對(duì)慢性腦缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶能力保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

本文編號(hào)：2678123