【摘要】： 阿爾茲海默病(AD)是引起老年性癡呆的最常見(jiàn)原因,病理改變主要是大腦局部包括老年斑在內(nèi)的神經(jīng)元退行性病變。老年斑主要由細(xì)胞外β淀粉樣蛋白(Aβ)沉積和營(yíng)養(yǎng)不良性神經(jīng)突所組成。目前,腦內(nèi)Aβ沉積物的起源和斑塊的形成過(guò)程仍然不是很清楚。β-分泌酶-1BACE1)是淀粉樣前體蛋白(APP)降解形成Aβ過(guò)程中的關(guān)鍵酶和限速酶。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)BACE1在AD病人和轉(zhuǎn)基因小鼠的腦內(nèi)表達(dá)增加。細(xì)胞外Aβ來(lái)源及其與局部神經(jīng)突之間的關(guān)系是很有爭(zhēng)議的問(wèn)題,有人認(rèn)為營(yíng)養(yǎng)不良性神經(jīng)突是Aβ沉積的結(jié)果,也有人認(rèn)為Aβ在軸突末梢產(chǎn)生并釋放,推斷軸突病變可能出現(xiàn)于Aβ沉積之前。在本研究中,我們利用5XFAD和2xFAD轉(zhuǎn)基因小鼠,在不同的時(shí)間點(diǎn),采用免疫組化評(píng)估BACE1與Aβ及軸突的關(guān)系、并觀(guān)察不同時(shí)間點(diǎn)腦內(nèi)斑塊的形成情況；分別采用Western Blot及ELISA等方法對(duì)BACE1蛋白水平、β-位APP裂解酶活性和可溶性Aβ水平進(jìn)行分析；采用相關(guān)光密度法觀(guān)察BACE1/Aβ、營(yíng)養(yǎng)不良性軸突與斑塊形成之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)BACE1蛋白水平、β-位APP裂解酶活性和可溶性Ap水平在轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)均以年齡依賴(lài)的方式增加,且BACE1表達(dá)與Aβ免疫反應(yīng)性增加相并行BACE1可出現(xiàn)于不同能性神經(jīng)元表型(γ-氨基丁酸能,谷氨酸能,膽堿能,兒茶酚胺能)的營(yíng)養(yǎng)不良性軸突內(nèi)；當(dāng)神經(jīng)突簇體積增加時(shí),Aβ免疫反應(yīng)性出現(xiàn)局部增強(qiáng),隨著神經(jīng)突簇?cái)U(kuò)大呈先快后慢；在斑塊出現(xiàn)前,BACE1/Aβ表達(dá)即出現(xiàn)于腫脹的突觸前末梢和輕微病變的軸突,并隨著年齡增長(zhǎng)呈現(xiàn)時(shí)間與空間的演變過(guò)程。因此,我們總結(jié)出斑塊發(fā)生、發(fā)展模式如下：突觸小結(jié)／軸突突起腫脹、芽殖→末梢產(chǎn)生并釋放Aβ→Aβ聚集、沉積→微小斑塊形成→初級(jí)斑塊→核心斑塊。本研究創(chuàng)新點(diǎn)主要是得出老年斑形成的新假說(shuō)即以軸突營(yíng)養(yǎng)不良為起始,Aβ聚集并沉積,逐漸形成老年斑。
【圖文】：

第3幸營(yíng)養(yǎng)不良性抽突在AD轉(zhuǎn)基因小氛老年斑形成過(guò)程中的作用2結(jié)果2.1BACEI免疫反應(yīng)性在非轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)的正常分布所有年齡BACE(+什)小鼠和C57BL/6L對(duì)照小鼠腦內(nèi)BACE免疫反應(yīng)性的分布基本上是相同的。大量的BACEI免疫反應(yīng)性出現(xiàn)在嗅小球和苔醉纖維(mossyfiber，末梢，并伴少量弱而彌散的BACEI標(biāo)記出現(xiàn)神經(jīng)氈內(nèi)(圖3.IA上，B，E);中等的信號(hào)出現(xiàn)于蒼白球腹側(cè)和黑質(zhì)下網(wǎng)狀部分(圖3.IA上，C);而在整個(gè)皮質(zhì)、杏和海馬的細(xì)胞層，BACEI免疫反應(yīng)性則局限于神經(jīng)氈(圖3.IB，D)。BACEI一腦切片內(nèi)卻沒(méi)有BACEI的表達(dá)(圖3.IA下)。

內(nèi)BACEI蛋白質(zhì)水平比C57BL/6B小鼠明顯升高，且變化與年齡呈正相關(guān)(每個(gè)年齡3只，六0.0001，介87，咫=0.961one一w盯ANOvAtest)。Bonferroni，s多重比較實(shí)驗(yàn)示小8個(gè)月sxFAD組與1、6或12個(gè)月非轉(zhuǎn)基因組之間差異有顯著性意義。同樣，月(P=0.013)和12個(gè)月(尸匕0.001)ZxFAD小鼠皮質(zhì)內(nèi)BACEI蛋白質(zhì)水平也比非轉(zhuǎn)因小鼠增加，另外，ZxFAD小鼠12個(gè)月與6個(gè)月相比也是增加的(尸匕0.04)(配對(duì)tudent一t檢驗(yàn))(圖3.2B)。1一8個(gè)月sxFAD小鼠腦皮質(zhì)提取物中BACEI酶活性比對(duì)照組顯著升高，并與年齡呈正相關(guān)(P<o.oool，F(xiàn)=59，R2=0.95，，one一ayANOVAtest)(圖3.2C，D)。ELISA方法檢測(cè)總Ap的結(jié)果發(fā)現(xiàn)在sxFAD大腦內(nèi)可溶性Ap水平也隨年齡增長(zhǎng)而升高(尸<0.0001，F(xiàn)=75，R2=0.93)，并且在同一份大腦樣品中與BACEI酶活性增加呈正相關(guān)(尸<0.002，廠(chǎng)0.91)(圖3.2D)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2677338