【摘要】： 目的:慢性腦低灌注是血管性癡呆(vascular dementia, VD)、阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease, AD)和Binswanger病等多種疾病發(fā)展過程中的一個(gè)共同病理過程。是指由高血壓、腦動(dòng)脈硬化引起的腦動(dòng)脈狹窄所致的腦組織灌注長期低于生理閾值而出現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)損害的一種病理狀態(tài)。慢性腦低灌注作為神經(jīng)系統(tǒng)的一種常見病理狀態(tài),存在于腦動(dòng)脈硬化、血管性癡呆、AD、Binswanger病及動(dòng)靜脈畸形等多種疾病的病理過程中,發(fā)病早期以認(rèn)知功能損害為主要表現(xiàn),最終可導(dǎo)致持久或進(jìn)展性的認(rèn)知與神經(jīng)功能障礙。在我國,VD是老年期癡呆的主要組成部分。VD不僅嚴(yán)重?fù)p害患者的健康及生存質(zhì)量,也給社會(huì)和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。目前,VD的發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚,也無特殊有效的治療方法,因此探討VD的發(fā)病機(jī)理,制定合理的治療方案,是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重要課題。 目前認(rèn)為慢性腦低灌注是VD的主要原因。有研究表明,在低灌注狀態(tài)及低代謝狀態(tài)下認(rèn)知功能可發(fā)生減退,而腦部氧化活性的改變可能是低灌注時(shí)產(chǎn)生腦實(shí)質(zhì)和腦微血管系統(tǒng)損害的重要機(jī)制。大量研究表明,氧化損傷在腦缺血后神經(jīng)元損傷中起到了關(guān)鍵作用。自由基增多,其清除劑超氧化物岐化酶(SOD)下降,脂質(zhì)過氧化物增多,其毒性代謝產(chǎn)物丙二醛(MDA)也相應(yīng)升高,氧自由基的產(chǎn)生導(dǎo)致DNA鏈斷裂,從而激活PARP的活性,活化的PARP在缺血性腦損傷中起重要作用作用。它刺激NAD+耗竭,從而導(dǎo)致ATP耗竭和細(xì)胞死亡。學(xué)者認(rèn)為過氧化反應(yīng)及自由基介導(dǎo)的DNA損傷是由于PARP被激活所致。越來越多的證據(jù)表明PARP過度激活在細(xì)胞氧化性損傷中起關(guān)鍵作用。 丁苯酞注射液是從芹菜種子中分離出的化學(xué)成分,具有較強(qiáng)的抗腦缺血作用,可阻斷缺血性腦血管病所致腦損傷的多個(gè)病理環(huán)節(jié),本品可通過降低花生四烯酸含量,提高腦血管內(nèi)皮NO和PGI2的水平,抑制谷氨酸的釋放,降低細(xì)胞內(nèi)鈣濃度,抑制自由基和提高抗氧化酶活性等機(jī)制而產(chǎn)生藥效作用。但國內(nèi)有關(guān)丁苯酞注射液神經(jīng)保護(hù)作用的大部分研究都集中在急性腦缺血模型,有關(guān)丁苯酞注射液作用于慢性腦缺血模型的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道尚缺乏 方法:用雄性SD大鼠80只,鼠齡為10周,體重200～250g,隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組(n=20),生理鹽水組(n=20),丁苯酞注射液大劑量組(n=20)(劑量6mg/kg),丁苯酞注射液小劑量組(n=20)(劑量2mg/kg)。每組大鼠行雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎術(shù),假手術(shù)組大鼠除不結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈外,余處理同生理鹽水組和丁苯酞注射液組。丁苯酞注射液大劑量組手術(shù)第4周后腹腔注射丁苯酞注射液,小劑量組手術(shù)第4周后腹腔注射丁苯酞注射液,均為每日二次,生理鹽水組腹腔注射等劑量生理鹽水,假手術(shù)組不給藥,連續(xù)給予四周。各組大鼠術(shù)后分別在各時(shí)間點(diǎn)水迷宮測試后斷頭,在冰盤上快速取腦,去除腦干及小腦,置0~4oC生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干。視交叉后1mm及4mm冠狀切開腦組織,取中間切塊為海馬組織,系列固定、脫水、浸蠟、包埋制成石蠟切片,行HE染色和免疫組化染色觀察海馬病理變化和海馬PARP蛋白表達(dá)變化。取視交叉前腦組織分別檢測SOD活力和MDA含量。運(yùn)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行各組間的兩兩比較,P0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果:(1)各組大鼠存活情況:假手術(shù)組死亡9只,生理鹽水組死亡12只,死亡率分別為45%和60%。丁苯酞注射液大、小劑量組各死亡11只,死亡率為55%。各組存活大鼠作為研究對(duì)象。(2)水迷宮試驗(yàn):生理鹽水組大鼠學(xué)習(xí)、記憶成績顯著下降,表現(xiàn)為尋找平臺(tái)潛伏期時(shí)間延長,明顯高于假手術(shù)組(P0.05),丁苯酞注射液大、小劑量組分別與生理鹽水組比較,學(xué)習(xí)、記憶成績均顯著改善(P 0.05),與假手術(shù)組相比,丁苯酞注射液組仍有所下降(P0.05),丁苯酞注射液大劑量組與丁苯酞注射液小劑量組比較,學(xué)習(xí)、記憶成績均顯著改善(P 0.05)。(3)海馬HE染色:假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列較致密整齊,胞漿內(nèi)尼氏體豐富,核大而圓,核仁明顯,偶有神經(jīng)元細(xì)胞變性和壞死;相比之下,生理鹽水組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列松散,層次不清,有細(xì)胞缺失現(xiàn)象,出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤,胞體變小,核固縮,胞質(zhì)濃染,丁苯酞大、小劑量組神經(jīng)元變性、死亡較生理鹽水組減輕,正常神經(jīng)元數(shù)目較生理鹽水組多;丁苯酞小劑量組較大劑量組神經(jīng)元細(xì)胞缺失、核固縮現(xiàn)象更明顯。(4)海馬CA1區(qū)PARP蛋白表達(dá)變化:假手術(shù)組海馬CA1區(qū)僅見極少量陽性神經(jīng)元;生理鹽水組可見大量陽性神經(jīng)元意義,排列松散,胞體變小,核固縮,陽性細(xì)胞累計(jì)光密度(IOD)值高于假手術(shù)組(P 0.05),丁苯酞注射液大、小劑量組海馬CA1區(qū)均可見有大量PARP陽性神經(jīng)元分布,陽性物質(zhì)主要位于胞漿內(nèi),胞核也有少量表達(dá),細(xì)胞排列較整齊緊密,呈棕黃色,胞體較大,圓形或橢圓形,有的可見突起;與假手術(shù)組相比,丁苯酞注射液大、小劑量組陽性神經(jīng)元IOD值增高(P 0.05);與生理鹽水組相比陽性神經(jīng)元IOD值降低(P 0.05)。丁苯酞注射液大劑量組海馬CA1區(qū)陽性神經(jīng)元IOD值與丁苯酞注射液小劑量組相比降低(P 0.05)。(5)SOD、MDA測定結(jié)果情況:與假手術(shù)組相比,生理鹽水組前腦組織SOD活力下降,MDA含量增加(P0.05)。與生理鹽水組相比,丁苯酞注射液大、小劑量組SOD活力有所增加,MDA含量有所下降(P 0.05)。與丁苯酞注射液小劑量組相比,丁苯酞注射液大劑量組組SOD活力明顯增加,MDA含量明顯下降(P 0.05)。 結(jié)論:(1)本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型采用較為常用的雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎,保證鼠腦不完全性缺血,與人類慢性腦低灌注相似。通過水迷宮試驗(yàn)證實(shí)了模型大鼠存在學(xué)習(xí)和記憶功能障礙,丁苯酞注射液可減輕大鼠的學(xué)校記憶障礙。(2)采用免疫組織化學(xué)方法,證實(shí)了在慢性腦低灌注狀態(tài)下大鼠海馬組織PARP表達(dá)增加,可能參與了慢性腦低灌注的代償與適應(yīng)機(jī)制。分別采用黃嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸顯色法測定2-VO大鼠前腦組織SOD活性及MDA含量,證實(shí)了2-VO后腦組織SOD活性下降,MDA含量增加。丁苯酞注射液治療后大鼠海馬組織PARP表達(dá)明顯減少,前腦組織SOD活性明顯增強(qiáng),MDA含量明顯下降,表明丁苯酞注射液可能通過抑制PARP蛋白表達(dá),抑制黃嘌呤氧化酶和次黃嘌呤氧化酶活性,發(fā)揮清除自由基抗氧化作用,影響PARP介導(dǎo)的DNA損傷與修復(fù)機(jī)制,在大鼠慢性腦低灌注所引起的氧化應(yīng)激中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。從而改善血管性認(rèn)知障礙。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R749.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王守春,吳江,孫莉,張昱;慢性腦缺血大鼠海馬區(qū)和齒狀回突觸素表達(dá)變化與其認(rèn)知功能關(guān)系的研究[J];現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志;2003年03期

2 馮亦璞，胡盾，張麗英;丁基苯酞對(duì)小鼠全腦缺血的保護(hù)作用[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);1995年10期

3 種兆忠,馮亦璞;丁基苯酞對(duì)缺血腦組織中及低糖低氧刺激后培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞中膽堿乙�；富钚缘挠绊慬J];中國藥學(xué)雜志;1999年08期

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本文編號(hào)：2669042