【摘要】：目的 創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙( Posttraumatic Stress Disorder,PTSD)存在較多的易感因素,包括性別、年齡、種族、遺傳因素、父母PTSD病史及早期的不良經(jīng)歷等,生命早期不良應(yīng)激作為重要的易感因素之一,逐漸引起大家的關(guān)注。研究生命早期不良應(yīng)激這一環(huán)境因素導(dǎo)致基因表達(dá)的改變,為危險(xiǎn)兒童人群的預(yù)防及PTSD的治療尋找有效的藥物作用及心理干預(yù)靶點(diǎn),具有重要的意義。因此,本課題采用母嬰分離動(dòng)物模型及場景恐懼記憶動(dòng)物模型和抑制消減雜交的方法,研究生命早期不良應(yīng)激致成年后恐懼記憶易感性改變的相關(guān)差異表達(dá)基因,并分析差異表達(dá)基因在易感性機(jī)制中的可能作用,探索母嬰分離對成年后恐懼記憶的形成和保持的易感性的影響。 方法 第一部分: 1、母嬰分離動(dòng)物模型: 幼鼠出生后第1-21天,將所有幼鼠拎出放入另一籠中,6h后將新生幼鼠送回籠中與母鼠團(tuán)聚,出生后第21天每籠6只飼養(yǎng)。正常對照組大鼠出生后按正常飼養(yǎng),不與母鼠分離。21天后斷奶,每籠6只飼養(yǎng)。 2、場景恐懼記憶動(dòng)物模型: 訓(xùn)練:將大鼠輕輕放到大鼠測試籠中,讓其自由活動(dòng)180秒,然后給予大鼠足部電擊2秒(非條件刺激,US),0.8mA,共三次,每次間隔60秒。訓(xùn)練結(jié)束后,大鼠在訓(xùn)練箱中繼續(xù)停留60秒,然后將其送回飼養(yǎng)籠。訓(xùn)練結(jié)束后1小時(shí)和24小時(shí),分別進(jìn)行場景恐懼記憶保持能力的檢測。 3、空間學(xué)習(xí)記憶檢測: 前4天為訓(xùn)練階段,每天訓(xùn)練4次,把大鼠面向池壁隨機(jī)從任一象限放入池中,并記錄大鼠尋找暗藏的平臺(tái)時(shí)間(逃避潛伏期)以及上站臺(tái)前路程,找到平臺(tái)后允許動(dòng)物在平臺(tái)上停留30s;如果大鼠在90s內(nèi)未找到平臺(tái),記為90s。每日4次成績的平均值為當(dāng)日成績。第5天,轍除站臺(tái),記錄大鼠在90s內(nèi)的游泳軌跡,分別計(jì)算其跨越目標(biāo)象限內(nèi)的游泳時(shí)間和路程占整個(gè)游泳時(shí)間的百分率。 第二部分: 應(yīng)用抑制消減雜交技術(shù)(Suppression subtractive hybridization, SSH)篩選母嬰分離組和正常組成年大鼠場景性恐懼記憶之后差異表達(dá)基因,將獲得的序列進(jìn)行同源性比較。 結(jié)果 行為學(xué)結(jié)果:雌性大鼠在電擊之前母嬰分離組場景恐懼記憶的獲得強(qiáng)于正常組,電擊之后,母嬰分離組場景恐懼記憶的獲得弱于正常組。而雄性大鼠在電擊之前和電擊之后場景性恐懼記憶的獲得的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 場景恐懼記憶的保持,1h后短時(shí)記憶的檢測,雌性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間明顯低于正常組(P0.01);雄性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間與正常組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.673)。同時(shí)母嬰分離對成年后場景恐懼記憶的保持存在性別差異,母嬰分離組雌性大鼠僵直時(shí)間明顯低于雄性大鼠(P0.01) 24h長時(shí)記憶檢測,在恐懼記憶訓(xùn)練后,雌性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間明顯低于正常組(P0.01);雄性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間與正常組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.093)。同時(shí)母嬰分離對成年后場景性恐懼記憶的保持存在性別差異,母嬰分離組雌性大鼠僵直時(shí)間明顯低于雄性大鼠(P0.01) 空間學(xué)習(xí)記憶檢測結(jié)果:雌性和雄性大鼠母嬰分離組潛伏期、上臺(tái)前路程與對應(yīng)的對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在空間探索實(shí)驗(yàn)中,雌、雄性大鼠母嬰分離組目標(biāo)象限停留時(shí)間的百分比、目標(biāo)象限停留距離的百分比均與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、SSH結(jié)果: 獲得9個(gè)上調(diào)表達(dá)的基因,其中5個(gè)為已知基因的部分序列,1個(gè)為新EST序列,此基因表達(dá)均是在母嬰分離的基礎(chǔ)上獲得。 結(jié)論 母嬰分離可降低雌性大鼠的場景恐懼記憶的保持,可能原因是雌性大鼠在面對應(yīng)激時(shí)皮質(zhì)酮分泌較多,增強(qiáng)對HPA軸的反饋抑制。并且母嬰分離可影響某些基因的表達(dá),而這些基因表達(dá)水平的變化很可能與雌性大鼠成年后場景性恐懼記憶易感性降低有關(guān)。
【圖文】：

1）場景性恐懼記憶檢測在仔鼠出生后第90天進(jìn)行，場景性恐懼記憶實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)設(shè)備為美國coulbourh Instrument公司產(chǎn)品。電擊箱（圖1-1）：箱壁為透明有機(jī)玻璃，長36cm、寬23cm、高18cm。底部由14根直徑0.5cm、間距1.2cm的不銹鋼棒組成，不銹鋼棒與電擊發(fā)生器相連。計(jì)算機(jī)和軟件：由電擊箱底部的紅外線監(jiān)測大鼠活動(dòng)情況，并通過計(jì)算機(jī)記錄。電刺激由程序控制的電擊發(fā)生器產(chǎn)生。訓(xùn)練（圖1-2）：將大鼠輕輕放到大鼠測試籠中，讓其自由活動(dòng)180秒，，然后給予大鼠足部電擊2秒(非條件刺激，US)，0.8mA

汕頭大學(xué)碩士研究生論文圖1-2 母嬰分離對大鼠場景性恐懼記憶獲得的影響Fig 1-2. Effects of MS on contextual fear conditioning acquisition in female and male rats( Mean percentage of freezing (±SEM) )長時(shí)記憶檢測，在恐懼記憶訓(xùn)練后24h檢測，雌性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間明顯低于正常組（P＜0.01，t=3.413）；雄性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間低于正常組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.093，t=1.826）。同時(shí)母嬰分離對成年后場景性恐懼記憶的保持存在性別差異，母嬰分離組雌性大鼠僵直時(shí)間明顯低于雄性大鼠（P<0.01，t=3
【學(xué)位授予單位】：汕頭大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R749.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳燕;黃澤玉;王蘇平;王雅杰;康熙雄;;顱內(nèi)腫瘤診斷中血清和腦脊液β_2-微球蛋白測定的臨床意義[J];中華神經(jīng)外科雜志;2007年06期

本文編號：2667355