【摘要】： 目的 本課題通過應用重復經(jīng)顱磁刺激,從行為學、形態(tài)學和分子生物學等不同層面綜合研究重復經(jīng)顱磁刺激對血管性癡呆大鼠學習記憶的影響,探討其作用的分子機制,為血管性癡呆的臨床治療提供有價值的實驗依據(jù)和方法。 方法 將Wistar大鼠隨機分為以下四組:①正常對照組、②癡呆模型組、③重復經(jīng)顱磁刺激低頻治療組(簡稱低頻刺激組)、④重復經(jīng)顱磁刺激高頻治療組(簡稱高頻刺激組)。癡呆模型組、低頻刺激組和高頻刺激組均采用兩血管阻斷法(2VO)制備血管性癡呆模型。 造模前、造模后和重復經(jīng)顱磁刺激治療后均進行Morris水迷宮行為學測試,包括定位航行試驗和空間探索試驗,計算全時程平均逃避潛伏期和游泳路程,計算在原平臺象限的游泳時間和在原平臺象限游泳路程占總游泳路程的百分比。低頻刺激組大鼠接受頻率0.5Hz重復經(jīng)顱磁刺激(六個療程,每療程持續(xù)5天),高頻刺激組大鼠接受頻率5Hz重復經(jīng)顱磁刺激(六個療程,每療程持續(xù)5天)。各組大鼠斷頭取腦,應用免疫組織化學方法檢測海馬CA1區(qū)BDNF、NMDAR1、SYN蛋白表達情況。應用HE染色,光鏡觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)細胞形態(tài)。應用透射電鏡觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)突觸形態(tài)、數(shù)量等超微結構。 結果 1.Morris水迷宮測試結果 大鼠造模后2天進行水迷宮定位航行試驗,癡呆模型組、低頻刺激組、高頻刺激組大鼠的全時程平均逃避潛伏期和游泳路程比正常對照組延長(p＜0.05),空間探索試驗中在原平臺象限的游泳時間和在原平臺象限的游泳路程占總路程百分比比正常對照組縮短(p＜0.05)。重復經(jīng)顱磁刺激治療6個療程后,低頻刺激組和高頻刺激組大鼠全時程平均逃避潛伏期和游泳路程比癡呆模型組縮短(p＜0.05),低頻刺激組與高頻刺激組差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05),空間探索試驗中在原平臺象限的游泳時間和在原平臺象限的游泳路程占總路程百分比比癡呆模型組延長(p＜0.05),低頻刺激組與高頻刺激組差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。 2.免疫組化染色結果:癡呆模型組大鼠BDNF、NMDAR1、SYN蛋白表達量比正常對照組大鼠減低(p＜0.05),低頻刺激組和高頻刺激組BDNF、NMDAR1、SYN蛋白表達量比癡呆模型組增高(p＜0.05),低頻刺激組與高頻刺激組差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。 3.光鏡觀察顯示,癡呆模型組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞層次數(shù)量明顯減少,排列松散,細胞受損嚴重,大量萎縮,輪廓不清,細胞深染,出現(xiàn)核固縮,細胞器結構不清。低頻刺激組和高頻刺激組多數(shù)細胞排列較整齊,細胞形態(tài)較完好,僅見少量核固縮。 4.電鏡下觀察,癡呆模型組突觸數(shù)量雖多于正常組,但突觸體積明顯減小,形態(tài)改變,為長形或不規(guī)則形;高倍觀,突觸前區(qū)變形,突觸小泡減少并聚集,線粒體凝聚,突觸后區(qū)體積減小,突觸前后膜增厚,融合,突觸間隙消失,失去其正常形態(tài)。低頻刺激組和高頻刺激組的部分突觸結構近于正常,部分突觸前后膜略見增厚,但突觸間隙可辨認。 結論 1.本研究從行為學、形態(tài)學及分子生物學等不同水平,研究了血管性癡呆的特點,通過對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)BDNF、NMDAR1、SYN等幾個蛋白的表達情況綜合分析,結果表明BDNF、NMDAR、SYN蛋白表達的增加有利于學習記憶功能的恢復。 2.重復經(jīng)顱磁刺激對血管性癡呆認知功能障礙有恢復治療作用,主要表現(xiàn)為影響了突觸可塑性,其可能的機制為: (1)rTMS對突觸后可塑性的影響:rTMS促進BDNF等神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達,進而可通過增加NMDA受體通道的開放頻率,特異性地增強突觸后致密物上NMDA亞單位的磷酸化。NMDA受體被激活時,使鈣離子通透性增加,進入細胞內。鈣離子可進一步激活細胞內鈣離子依賴的酶,從而引起一系列生化過程,并且促進了NMDA受體依賴的長時程增強的產生,改變突觸的傳遞效能,促使學習記憶功能的增強。 (2)rTMS對突觸前可塑性的影響:rTMS使突觸前區(qū)內的SYN表達增加,具有促進突觸再建和增強,提高突觸效能的作用,促進神經(jīng)損傷修復和功能重塑,對于血管性癡呆大鼠的學習記憶有恢復作用。 3.本研究為血管性癡呆的臨床治療提供了新的線索,為臨床應用重復經(jīng)顱磁刺激治療血管性癡呆提供了有價值的理論依據(jù),同時為血管性癡呆的藥物治療提供了可能的新的作用靶點。
【圖文】：

各組大鼠逃避潛伏期進一步下降，但下降趨勢偏緩，并且逐漸趨于穩(wěn)定。各組大鼠全時程平均逃避潛伏期和尋找水下平臺的游泳路程無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。見表l及圖5，6。表1造模前定位航行鋇l試中各組大鼠連續(xù)3天的全時得彩敏蜘魏琳期及游泳路程(x北)組別全時程平均逃避潛伏期(s)游泳路程(cm)正常對照組癡呆模型組低頻刺激組高頻刺激組27.54士5.6126.52士5.15*25.98士5.74*27.3肚5.31*675.82土54.19642.28士51.28*640.77士49.25*673.53士53.33*與正常對照組卜以友，*孫0.05，

本文編號：2661310