發(fā)布時(shí)間：2020-04-20 21:23

【摘要】： 研究背景阿爾茨海默病(Alzheimer disease, AD)和血管性癡呆(vascular dementia, VaD)是臨床最常見的兩型癡呆,占老年期癡呆的70 %～80 %。隨著世界人口的老齡化,AD、VaD的發(fā)生率將繼續(xù)升高,已成為全球性的重點(diǎn)公共衛(wèi)生問題。新近研究發(fā)現(xiàn),隨著機(jī)體衰老或伴血糖升高,腦內(nèi)部分長(zhǎng)壽命蛋白物質(zhì)易被糖基化(glycation)修飾,從而產(chǎn)生毒性作用,造成神經(jīng)細(xì)胞的損傷。在AD、VaD患者腦內(nèi)存在高濃度的晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products, AGEs),AGEs的增多造成神經(jīng)細(xì)胞的損傷機(jī)理可能與β-淀粉樣肽(β-amyloid peptide ,Aβ)和AGE受體(receptor for advanced glycation end products,RAGE)有關(guān),體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Aβ與AGEs可形成核心,吸引可溶性的Aβ進(jìn)一步聚集,產(chǎn)生神經(jīng)毒性;伴隨神經(jīng)元細(xì)胞氧化應(yīng)激過程RAGE表達(dá)選擇性上調(diào),尤其在Aβ沉積的部位。因此對(duì)其作用機(jī)制的研究可望為尋找癡呆的預(yù)防及治療靶點(diǎn)提供一些理論依據(jù);臨床患者血清中AGEs、Aβ的檢測(cè)可望為臨床早期篩選、診斷提供依據(jù)。 目的1.實(shí)驗(yàn)研究AGEs、Aβ在AD發(fā)病機(jī)制中的作用及關(guān)系,是否與氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡有關(guān),阻斷RAGE活性能否作為預(yù)防和治療AD的潛在靶點(diǎn)。 2.臨床檢測(cè)AD、VaD患者血清中AGEs、Aβ含量變化,探討檢測(cè)血清中AGEs、Aβ含量能否作為AD和VaD篩選、診斷的依據(jù)之一。 方法1.實(shí)驗(yàn)分組 (1)AGEs處理組:①實(shí)驗(yàn)對(duì)照:30%的牛血清白蛋白(BSA)12.5μL;②低濃度AGEs處理組:加AGEs-BSA 12.5μL;③中濃度AGEs處理組:AGEs-BSA 25μL ;④高濃度AGEs處理組:加AGEs-BSA 50μL。⑤Aβ25—3525μmol/L組⑥Aβ加低濃度AGE處理組:Aβ25—35 25μmol/L加AGEs-BSA 12.5μL;⑦Aβ加中濃度AGEs處理組:Aβ25—35 25μmol/L加AGEs-BSA 25μL;⑧Aβ加高濃度AGEs處理組: Aβ25—35 25μmol/L加AGEs-BSA 50μL。 (2)胰蛋白酶處理組:因胰蛋白酶可阻斷RAGE的活性,①胰蛋白酶處理組:pc12細(xì)胞中加胰蛋白酶,PBS洗脫,加入Aβ25-35 25μmol/L,37℃孵育24小時(shí)后加AGEs - BSA 50μL。②未經(jīng)胰酶處理組:PC12細(xì)胞加入濃度為25μmol/ L Aβ25—35片段37℃孵育24小時(shí)加AGEs - BSA 50μL。以上各組行MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,RT-PCR法測(cè)定RAGE、NF-κB的表達(dá),流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡。 2.選取臨床診斷為AD患者7例、VaD患者35例、急性腦血管病(Acute cerebrovascular disease,ACVD)患者47例、健康對(duì)照組30例,采用放射免疫分析法檢測(cè)血清Aβ水平,免疫競(jìng)爭(zhēng)飽和法測(cè)定血清AGEs的水平,采血同時(shí)進(jìn)行簡(jiǎn)易智力狀態(tài)篩查量表(Mini mental status examination , MMSE)評(píng)定。 結(jié)果1.MTT法顯示隨AGEs濃度升高,細(xì)胞活力下降;胰蛋白酶處理組細(xì)胞活力較胰蛋白酶未處理組升高。RT-PCR法半定量分析顯示RAGE、NF-κB mRNA表達(dá)隨AGEs濃度升高而增高;胰蛋白酶處理組無RAGE、NF-κB mRNA表達(dá)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示隨AGEs濃度增加,細(xì)胞凋亡率增加。 2.AD、VaD患者Aβ、AGEs水平明顯高于ACVD組和正常對(duì)照組,均具顯著性差異。ACVD組患者血清Aβ、AGEs水平亦明顯高于正常對(duì)照組,具顯著性差異。Aβ與AGEs具有明顯的正相關(guān)。AD與VaD患者2項(xiàng)測(cè)定指標(biāo)與MMSE量表評(píng)定之間具有明顯的負(fù)相關(guān)。 結(jié)論1.AGEs與Aβ對(duì)PC12細(xì)胞均有濃度依賴性的神經(jīng)毒作用,且具協(xié)同、放大效應(yīng)。 2.AGEs對(duì)Aβ誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞神經(jīng)毒性損害由RAGE介導(dǎo),阻斷RAGE可望作為治療的潛在作用靶點(diǎn)。 3.AGEs對(duì)Aβ誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞神經(jīng)毒性損害與RAGE介導(dǎo)NF-κB表達(dá)有關(guān)。 4.AGEs對(duì)Aβ誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞神經(jīng)毒性損害可能與細(xì)胞凋亡有關(guān)。 5.AGEs、Aβ在AD、VaD患者血清中明顯增高,且與MMSE量表評(píng)定之間具有明顯的負(fù)相關(guān),可作為AD和VaD早期篩選、診斷的依據(jù)之一。
【圖文】：

AGEs 對(duì) Aβ 誘導(dǎo) PC12 細(xì)胞毒性作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究圖1-4：倒置顯微鏡細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)果：圖1 正常對(duì)照組PC12細(xì)胞（×100倍）接種24小時(shí)后，細(xì)胞均貼壁生長(zhǎng)，呈蝌蚪狀，胞漿均勻、透亮,細(xì)胞表面無明顯斑點(diǎn)及沉積物，排列整齊。圖2 正常對(duì)照組PC12細(xì)胞（×100倍）培養(yǎng)第3天，細(xì)胞緊貼瓶底,細(xì)胞密集,細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞表面無明顯斑點(diǎn)及沉積物，排列整齊。圖3 Aβ25 —3525μmol/ L組（×100倍）細(xì)胞數(shù)目明顯減少, 胞漿較暗淡, 有活力的細(xì)胞數(shù)目明顯減少。圖4 Aβ加高濃度AGE 處理組（×100倍）細(xì)胞連接較松,上清液中有較多的浮起變圓細(xì)胞

漿均勻、透亮,細(xì)胞表面無明顯斑點(diǎn)及沉積物，，排列整齊。圖2 正常對(duì)照組PC12細(xì)胞（×100倍）培養(yǎng)第3天，細(xì)胞緊貼瓶底,細(xì)胞密集,細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞表面無明顯斑點(diǎn)及沉積物，排列整齊。圖3 Aβ25 —3525μmol/ L組（×100倍）細(xì)胞數(shù)目明顯減少, 胞漿較暗淡, 有活力的細(xì)胞數(shù)目明顯減少。圖4 Aβ加高濃度AGE 處理組（×100倍）細(xì)胞連接較松,上清液中有較多的浮起變圓細(xì)胞,細(xì)胞碎片也較多,貼壁細(xì)胞欠透明
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R749.1

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王萌;我國(guó)城鎮(zhèn)阿爾茨海默病老年群體護(hù)理模式探究[D];沈陽(yáng)師范大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2634978