【摘要】：目的眾所周知,來源于促黑素細(xì)胞皮質(zhì)素原(proopiomelanocortin,POMC)的黑皮質(zhì)素受體興奮劑α-黑素細(xì)胞刺激激素(α-melanocyte-stimulating hormone,α-MSH)以及拮抗劑刺鼠相關(guān)蛋白(agouti-related protein,AgRP),對(duì)代謝應(yīng)激非常敏感,比如饑餓、低血糖。然而,這些神經(jīng)元對(duì)情緒及生理應(yīng)激的機(jī)制尚不明確。據(jù)報(bào)道,黑皮質(zhì)素信號(hào)通路對(duì)急性情緒應(yīng)激快速反應(yīng),并導(dǎo)致厭食以及焦慮樣行為發(fā)生,誘發(fā)弓狀核(arcuate nucleus,ARC)中POMC和AgRP神經(jīng)元c-fos表達(dá)。與此同時(shí),研究證實(shí)慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激(chronic unpredictable stress,CUS)誘導(dǎo)大鼠認(rèn)知功能缺陷和焦慮樣行為發(fā)生,可以通過慢性抗焦慮藥物治療來阻止。因此,我們想要明確是否黑皮質(zhì)素信號(hào)通路與慢性應(yīng)激導(dǎo)致的認(rèn)知和情緒障礙的潛在神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制相關(guān)聯(lián)。如果真的存在,弓狀核中POMC和AgRP神經(jīng)元又是如何對(duì)慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激做出應(yīng)答的是我們研究的關(guān)鍵。方法利用基因型為AgRP-Ires-cre純合小鼠和基因型為C57BL的小鼠進(jìn)行交配,得到基因型為AgRP-Ires-cre的雜合小鼠,AgRP-Ires-cre的雜合小鼠與AgRP-Ires-cre的雜合小鼠再進(jìn)行交配,得到AgRP-Ires-cre純合小鼠和AgRP-Ires-cre雜合小鼠。使用基因型為POMC cre(Lowell B)雜合小鼠和基因型為C57BL的小鼠進(jìn)行交配,得到基因型為POMC cre(Lowell B)雜合小鼠。使用特異性的受體激活劑(DREADD)激活設(shè)計(jì)的受體的技術(shù)來特異性調(diào)節(jié)神經(jīng)元活性,我們激活A(yù)gRP-Ires-cre 小鼠 cre-dependent DREADD-hM3Dq AAV 表達(dá),進(jìn)而激活 AgRP 神經(jīng)元;激活 POMC cre(Lowell B)小鼠 cre-dependent DREADD-hM4Di AAV 表達(dá),進(jìn)而激活POMC神經(jīng)元。首先將6周左右雄性轉(zhuǎn)基因小鼠在病毒注射前進(jìn)行了雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)(Female Urine Sniffing test,FUST),平均分為 2 組(mcherry、hm3d-mcherry組或mcherry、hm4d-mcherry組)。病毒注射后2周左右表達(dá)。病毒注射2周后,小鼠接受10天的慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激(CUS)。在第11天,重復(fù)雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)(FUST)判斷造模是否成功。接下來,在第12天,腹腔注射clozapine-N-oxide(CNO)重復(fù)雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)(FUST)。在第13天,腹腔注射 clozapine-N-oxide(CNO)我們進(jìn)行了糖水偏好實(shí)驗(yàn)(sucrose preference test,SPT)。在第14天,腹腔注射clozapine-N-oxide(CNO)我們進(jìn)行了強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(forced swim test,FST)。在第 15 天,腹腔注射 clozapine-N-oxide(CNO)我們進(jìn)行了自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果抑郁樣行為的實(shí)驗(yàn)評(píng)估中,我們發(fā)現(xiàn)在慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激后雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)中hm3d-mcherry組小鼠雌鼠尿液嗅探時(shí)間低于mcherry組但沒有顯著性,而在執(zhí)行慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激后雌鼠尿液嗅探時(shí)間較病毒注射前明顯下降(P0.05),結(jié)果說明造模是成功的。hm3d-mcherry組小鼠在CNO注射后雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)中雌鼠尿液嗅探時(shí)間高于mcherry組但沒有顯著性,但是在CNO注射后雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)中雌鼠尿液嗅探時(shí)間較慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激后有所升高。使用成對(duì)t檢驗(yàn),在mcherry組,在CNO注射后雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)中雌鼠尿液嗅探時(shí)間較慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激后有升高趨勢(shì),而在hm3d-mcherry組在CNO注射后雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)中雌鼠尿液嗅探時(shí)間較慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激后顯著升高(P0.05)。類似的結(jié)果也出現(xiàn)在hm4d-mcherry組和mcherry組。在CNO注射后的糖水偏好實(shí)驗(yàn)中,hm3d-mcherry組與mcherry組在12小時(shí)以及14小時(shí)的糖水偏好百分比沒有顯著性差別(P0.05)。在CNO注射后的強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中,hm3d-mcherry組與mcherry組在前2分鐘的潛伏期以及后4分鐘的不動(dòng)時(shí)間上沒有顯著差異(P0.05)。在CNO注射后的自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)中,hm3d-mcherry組與mcherry組在沒有顯著差異(P0.05)。hm4d-mcherry組與mcherry組在CNO注射后的糖水偏好實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)以及自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)中沒有顯著差異(P0.05)。結(jié)論由此得出,在弓狀核中激活A(yù)GRP神經(jīng)元或抑制POMC神經(jīng)元翻轉(zhuǎn)慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠抑郁樣行為。
【圖文】：

AGRP小鼠在病毒注射前進(jìn)行雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)

=Po}c小鼠在病毒注射前進(jìn)行雌鼠尿液嗅覺實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R749

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本文編號(hào)：2610942