【摘要】：目的:血管性癡呆(vascular dementia, VD)是指由各種腦血管疾病引起腦功能障礙而導(dǎo)致的獲得性認知功能障礙綜合征。近年來,隨著人口老齡化的發(fā)展和腦卒中治愈率的不斷提高,VD的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的上升趨勢,嚴(yán)重的威脅著老年人的身心健康,也給社會造成了沉重的精神和經(jīng)濟負擔(dān)。據(jù)資料報道,VD是老年期癡呆中可以預(yù)防并有希望治療的癡呆疾病之一,如果早期治療會延緩、甚至可逆轉(zhuǎn)疾病的發(fā)展。因此,探討和闡明VD的發(fā)病機理,對于臨床制定更加合理的治療方案具有重要的價值和理論意義。 學(xué)習(xí)和記憶是腦的高級活動。學(xué)習(xí)是經(jīng)驗及技能的獲得,而記憶是經(jīng)驗及技能的保存及再現(xiàn),它們是兩個不同而又密切聯(lián)系的神經(jīng)生物過程。目前認為,海馬與學(xué)習(xí)和記憶等高級認知功能密切相關(guān),其神經(jīng)元形態(tài)正常與否對學(xué)習(xí)和記憶的形成和維持具有重要的意義。 穹窿下器( subfornical organ, SFO )位于側(cè)腦室和第三腦室之間,是感受性室周器官( senory circumventricular organs, SCVOs )之一,因其所在部位的血腦屏障不完整,所以是腦內(nèi)化學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要位點,對免疫分子具有重要的監(jiān)控作用。另外,它還是血液與中樞神經(jīng)系統(tǒng)之間信息交換的有效界面,與神經(jīng)內(nèi)分泌、神經(jīng)免疫及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種生理功能關(guān)系密切,在體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定機制中起著重要的調(diào)節(jié)作用。 本實驗建立反復(fù)缺血-再灌注VD小鼠模型,觀察VD時小鼠海馬組織CA1區(qū)神經(jīng)元病理改變及SFO掃描電鏡下的特征,從細胞生物學(xué)角的度探討VD的發(fā)病機理。 方法:本研究分為三部分。 第一部分以昆明小鼠作為研究對象,采用雙側(cè)頸總動脈絲線結(jié)扎方法,經(jīng)三次反復(fù)缺血-再灌注,制備VD模型,并設(shè)立假手術(shù)組;造模術(shù)后第29、30天,利用跳臺實驗和水迷宮試驗對兩組小鼠分別進行學(xué)習(xí)和記憶成績測試,觀察兩組小鼠行為學(xué)差異。并運用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析,采用t檢驗進行比較,以P0.05或者P0.01表示有統(tǒng)計學(xué)意義。 第二部分和第三部分采用3%多聚甲醛+1%戊二醛溶液固定的小鼠腦組織為研究對象,分別利用透射電鏡和掃描電鏡技術(shù)觀察小鼠大腦海馬CA1區(qū)神經(jīng)元及SFO的超微結(jié)構(gòu),比較兩組的差異。 結(jié)果: 1兩組小鼠模型的行為學(xué)評價 1.1學(xué)習(xí)成績 術(shù)后第29天,分別進行跳臺試驗和水迷宮試驗,測試跳臺試驗的反應(yīng)時間(sec)和錯誤次數(shù)(number/5min)作為學(xué)習(xí)成績,水迷宮試驗游完全程的時間(sec)和錯誤次數(shù)(number/3min)作為學(xué)習(xí)成績。 跳臺試驗結(jié)果顯示:(1)與假手術(shù)組的反應(yīng)時間(21.79±14.94)s比較,VD模型組小鼠學(xué)習(xí)階段的反應(yīng)時間(54.68±26.20)s明顯延長(P0.01);(2)與假手術(shù)組的錯誤次數(shù)(2.79±1.22)比較,VD模型組小鼠學(xué)習(xí)階段的錯誤次數(shù)(4.05±1.99)明顯增加(P0.05)。 水迷宮試驗結(jié)果顯示:(1)與假手術(shù)組的游完全程時間(73.67±19.65)s比較,VD模型組小鼠學(xué)習(xí)階段游完全程時間(111.36±26.04)s明顯延長(P0.01);(2)與假手術(shù)組的錯誤次數(shù)(4.08±1.28)比較,VD模型組小鼠學(xué)習(xí)階段的錯誤次數(shù)(7.18±3.22)明顯增加(P0.01)。 以上結(jié)果提示VD模型組小鼠的學(xué)習(xí)成績較假手術(shù)組降低。 1.2記憶成績 術(shù)后第30天,分別進行跳臺試驗和水迷宮試驗,測試跳臺試驗的潛伏時間(sec)和錯誤次數(shù)(number/5min)作為記憶成績,水迷宮試驗游完全程時間(sec)和錯誤次數(shù)(number/3min)作為記憶成績。 跳臺試驗結(jié)果顯示:(1)與假手術(shù)組的潛伏時間(174.50±49.91)s比較,VD模型組小鼠記憶階段的潛伏時間(79.45±7.96)s明顯縮短(P0.01);(2)與假手術(shù)組的錯誤次數(shù)(2.75±1.26)比較,VD模型組小鼠記憶階段的錯誤次數(shù)(4.27±2.21)明顯增加(P0.01)。 水迷宮試驗結(jié)果顯示:(1)與假手術(shù)組的游完全程時間(65.17±13.27)s比較,VD模型組小鼠記憶階段游完全程時間(104.09±28.38)s明顯延長(P0.01);(2)與假手術(shù)組的錯誤次數(shù)(3.42±1.44)比較,VD模型組小鼠記憶階段的錯誤次數(shù)(5.23±2.56)明顯增加(P0.01)。 以上結(jié)果提示VD模型組小鼠的記憶成績較假手術(shù)組降低。 2電鏡觀察: 2.1透射電鏡觀察結(jié)果: (1)假手術(shù)組:小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)正常,染色質(zhì)分布均勻,胞質(zhì)中細胞器豐富。 (2)模型組:小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元變性,核膜凹凸不平,邊緣模糊,胞核腫大;細胞器減少,線粒體變性,其大部分嵴和部分膜融合、模糊不清;粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可見顆粒融合或脫顆�，F(xiàn)象,游離核糖體輕度減少。結(jié)果提示VD模型小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元重度損傷。 2.2掃描電鏡觀察結(jié)果: (1)假手術(shù)組:SFO表面纖毛稀少,大部分區(qū)域沒有或有稀疏的單根纖毛,而周圍腦區(qū)均有較多的纖毛,與腦室面界限清楚。其室管膜細胞清晰可見,每個室管膜細胞呈鵝卵石樣隆起,胞體大小不一,直徑約為3-10um,細胞間界限清晰;室管膜細胞有的表面平滑,有的表面可見密集的微絨毛結(jié)構(gòu);室管膜上結(jié)構(gòu)較豐富,可見少數(shù)室管膜上神經(jīng)元樣細胞,有的表面含有2-3個突起,還可見到分泌顆粒,數(shù)量較少,大小不一。 (2)模型組:SFO表面凹凸不平,室管膜細胞表面凹陷,細胞形狀變得不規(guī)則,形態(tài)各異,細胞間界限不清,室管膜細胞上微絨毛明顯減少甚至消失,細胞間分泌顆粒相對較多,纖毛結(jié)構(gòu)減少。結(jié)果提示VD模型小鼠SFO室管膜出現(xiàn)明顯的病理變化。 結(jié)論: 1本實驗成功地建立了小鼠VD模型,經(jīng)過跳臺試驗、水迷宮試驗證實了VD小鼠存在學(xué)習(xí)和記憶功能的障礙,能夠模擬臨床上VD的智能障礙,是比較可靠的VD動物模型,對深入研究VD是可行的。 2透射電鏡下觀察到VD模型小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元重度損傷及掃描電鏡下觀察到SFO室管膜病變,推測這些病理變化參與了VD的發(fā)病機制。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R749.16

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