【摘要】：第一部分人TNFAIP1基因啟動(dòng)子分析 TNFAIP1基因最開始是在內(nèi)皮細(xì)胞中用TNFα誘導(dǎo)時(shí)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)即刻反應(yīng)基因,后來發(fā)現(xiàn)它能夠被IL6,LPS,EGF,ceramide,Amyloidbeta等等誘導(dǎo)表達(dá),說明該基因在轉(zhuǎn)錄水平上受到了嚴(yán)格的調(diào)控,但是對它的表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究很少。為了進(jìn)一步了解該基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,我們克隆了它5'端側(cè)翼序列的啟動(dòng)子區(qū)。利用構(gòu)建一系列的缺失突變載體和熒光素酶活性分析試驗(yàn)我們鑒定出該基因的基本啟動(dòng)子區(qū),并利用生物信息學(xué)軟件分析以及定點(diǎn)突變等方法鑒定出SP1轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)對于該基因啟動(dòng)子的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄很重要,接下來我們進(jìn)一步通過電泳遷移率變動(dòng)實(shí)驗(yàn),染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)和過表達(dá)實(shí)驗(yàn)等在體內(nèi)和體外都證實(shí)SP1蛋白能夠和TNFAIP1基因啟動(dòng)子區(qū)的SP1結(jié)合位點(diǎn)直接結(jié)合,并在過表達(dá)SP1蛋白的情況下能夠增強(qiáng)TNFAIP1的啟動(dòng)子活性。這樣,我們成功的克隆了TNFAIP1的啟動(dòng)子并鑒定出它的基本啟動(dòng)子區(qū),并且通過多種實(shí)驗(yàn)證明了它的SP1結(jié)合位點(diǎn)對于TNFAIP1啟動(dòng)子的基礎(chǔ)表達(dá)的重要性,為進(jìn)一步研究TNFAIP1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和功能研究打下了基礎(chǔ)。 第二部分人TNFAIP1基因在阿爾茨海默病中的作用 最近Link等人報(bào)道在轉(zhuǎn)基因線蟲阿爾茨海默病模型中TNFAIP1同源基因顯著上調(diào),并且發(fā)現(xiàn)TNFAIP1基因在尸檢的病人腦部病變最輕的部位高表達(dá),猜測TNFAIP1基因有可能起神經(jīng)保護(hù)的作用。在小鼠胚胎中我們用原位雜交和免疫組化的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TNFAIP1在小鼠胚胎整個(gè)大腦都有表達(dá),并且在原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)細(xì)胞的胞體,軸突和樹突都有表達(dá)。因?yàn)門NFAIP1相互作用蛋白RIN3,ITSN2,RhoB和mDia等都和細(xì)胞受體內(nèi)吞相關(guān),因此檢測了TNFAIP1和NMDA受體各個(gè)亞基在細(xì)胞內(nèi)的共定位情況,發(fā)現(xiàn)TNFAIP1和NMDA受體NR2B亞基在Hela細(xì)胞中存在部分共定位。轉(zhuǎn)錄因子CREB是形成新的神經(jīng)突觸所必需的,對于長期記憶的形成非常重要。我們利用熒光素酶活性分析實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)在HEK293細(xì)胞中過表達(dá)TNFAIP1可以增強(qiáng)CREB的轉(zhuǎn)錄活性。另外我們在用高K+處理HEK293細(xì)胞時(shí),發(fā)現(xiàn)過表達(dá)TNFAIP1能夠增強(qiáng)CREB133位點(diǎn)的磷酸化,提示TNFAIP1可能是通過增強(qiáng)CREB133位點(diǎn)的磷酸化調(diào)控CREB的轉(zhuǎn)錄活性的。綜合以上結(jié)果我們猜測TNFAIP1可能在AD的發(fā)病過程中起著一定的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 孫振華;賀瓊芝;顏峰;周暢;;TNFAIP1基因通過抑制Bcl-2的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[J];湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào);2009年01期

2 楊利平;周愛冬;李紅;張文峰;吳艷陽;張健;韓梅;;人TNFAIP1基因在常見細(xì)胞系中的表達(dá)[J];遺傳;2006年08期

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本文編號：2594045