【摘要】：【研究背景和目的】c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)是促分裂原活化蛋白激酶MAPK(mitogen-activated protein kinase)的超家族成員之一,JNK信號通路可被細胞因子、生長因子、氧化應激等因素激活,參與體內(nèi)多種疾病的發(fā)生和發(fā)展過程。近年來的研究表明,AD的病理變化與一些細胞信號轉(zhuǎn)導分子密切相關(guān),其中JNK信號通路尤為重要。前期研究結(jié)果表明活化的JNK在APP/PS1小鼠腦內(nèi)顯著增高并與老年斑、膠質(zhì)細胞、磷酸化Tau蛋白等共存,提示JNK的激活可能在AD的多個病理損害中具有重要的作用。然而,JNK激活在阿爾茨海默病病理進展中的關(guān)鍵性作用及分子機制,目前尚未完全闡明;JNK特異性抑制劑SP600125能否防止AD的病理過程進展仍不可知。本研究在前期的基礎上深入探討闡述JNK特異性抑制劑SP600125在阿爾茨海默病中的保護作用及其分子機制,有望為研發(fā)防治AD的新藥物提供新的靶點�！狙芯糠椒ā勘狙芯恳�9月齡雌性APPswe/PS1d E9雙轉(zhuǎn)基因(APP/PS1)AD小鼠和與其年齡相匹配的野生型(WT)C57BL/6小鼠為實驗對象,隨機分為PBS溶媒-WT對照組、SP600125-WT對照組、PBS溶媒-APP/PS1治療組和SP600125-APP/PS1治療組。分別給予SP600125或PBS溶媒腹腔內(nèi)注射12周。通過行為學被動回避實驗檢測各處理組小鼠學習記憶功能的變化情況;應用Western Blot蛋白印跡法檢測各處理組小鼠腦內(nèi)JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、突觸素(SYP)、突觸后密度蛋白95(PSD-95)等蛋白的表達情況;通過免疫組織化學方法檢測各處理組小鼠腦內(nèi)活化星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞的變化情況;通過ELISA方法檢測各處理組小鼠腦內(nèi)炎性反應因子白細胞介素1β(IL-1β)、白細胞介素6(IL-6)以及腫瘤壞死因子α(TNFα)的表達變化情況�！狙芯拷Y(jié)果】1、行為學研究發(fā)現(xiàn),在被動回避實驗的單次電擊測試中,各處理組小鼠的獲得潛伏期(即電擊刺激前由明箱進入暗箱時間)沒有顯著差異;在記憶保持測試中,與PBS溶媒-WT對照組和SP600125-WT對照組相比,PBS溶媒-APP/PS1治療組小鼠的保持滯留期(電擊刺激1d后由明箱進入暗箱時間)明顯縮短,表現(xiàn)出嚴重的情境式記憶受損;而與PBS溶媒-APP/PS1治療組相比,SP600125-APP/PS1治療組小鼠的保持滯留期則顯著延長,其情境式記憶功能損害得到有效改善。2、突觸相關(guān)蛋白研究發(fā)現(xiàn),各處理組小鼠皮層和海馬組織中JNK表達水平并無顯著差異;與PBS溶媒-WT對照組和SP600125-WT對照組相比,PBS溶媒-APP/PS1治療組小鼠皮層和海馬組織中p-JNK表達水平顯著升高,而SYP和PSD-95的表達水平顯著降低;與PBS溶媒-APP/PS1治療組相比,SP600125-APP/PS1治療組小鼠皮層和海馬組織中p-JNK表達水平明顯降低,而SYP和PSD-95的表達水平則明顯升高。3、神經(jīng)炎性反應研究發(fā)現(xiàn),與PBS溶媒-WT對照組和SP600125-WT對照組相比,PBS溶媒-APP/PS1治療組小鼠皮層和海馬組織中活化的星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞數(shù)量顯著增加,促炎性因子IL-1β、IL-6和TNFα的含量明顯升高;與PBS溶媒-APP/PS1治療組相比,SP600125-APP/PS1治療組小鼠皮層和海馬組織中活化的星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞數(shù)量顯著減少,促炎性因子IL-1β、IL-6和TNFα的含量明顯降低。【研究結(jié)論】我們的研究表明,使用JNK特異性抑制劑SP600125治療APP/PS1轉(zhuǎn)基因AD小鼠,可以通過抑制JNK活性顯著增加皮層和海馬組織中突觸相關(guān)蛋白SYP和PSD-95的表達水平,抑制星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞等炎性反應細胞的活化,降低IL-1β、IL-6和TNFα等炎性反應介質(zhì)的含量,顯著改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因AD小鼠的記憶功能損害。提示JNK特異性抑制劑SP600125可以通過減少AD腦內(nèi)突觸損害及炎性反應過程改善AD相關(guān)認知功能障礙,可能是一種潛在的具有治療AD作用的新型藥物。
【圖文】：

圖 1APP 代謝示意圖2.2 Tau 蛋白過磷酸化形成的神經(jīng)原纖維纏結(jié)（NFTs）微管系統(tǒng)是神經(jīng)細胞骨架成分，參與多種細胞功能。Tau 是正常的軸突蛋白，，與微管相結(jié)合提高細胞中微管的穩(wěn)定性。同時 Tau 也是促進微管蛋白聚合的高效啟動子。但是，Tau 蛋白同大多數(shù)微管相關(guān)蛋白一樣也會發(fā)生磷酸化。激酶和磷酸酶活性之間的平衡決定了 Tau 蛋白磷酸化狀態(tài)。在神經(jīng)元纖維纏結(jié)中，Tau 蛋白過度磷酸化聚合并且不能結(jié)合到微管。去磷酸化后，又會恢復結(jié)合微管的能力。NFTs 是由過度磷酸化的 Tau 蛋白形成的成對的螺旋結(jié)構(gòu)。這些不溶性結(jié)構(gòu)會損壞細胞質(zhì)功能和軸突運輸，并導致細胞死亡。正常生理情況下， Tau 蛋白處于磷酸化/去磷酸化的平衡狀態(tài)，但在 AD 中，這種平衡狀態(tài)遭到破壞導致 Tau 蛋白過度磷酸化[24]。過度磷酸化的 Tau 不斷形成 NFTs 干擾細胞內(nèi)信息傳遞，細胞骨架的異常改變，導致神經(jīng)元變性壞死。2.3 免疫炎性反應

并進一步形成淀粉樣蛋白斑塊，促進阿爾茨海默病病情發(fā)展（圖 1）。圖 1APP 代謝示意圖2.2 Tau 蛋白過磷酸化形成的神經(jīng)原纖維纏結(jié)（NFTs）微管系統(tǒng)是神經(jīng)細胞骨架成分，參與多種細胞功能。Tau 是正常的軸突蛋白，與微管相結(jié)合提高細胞中微管的穩(wěn)定性。同時 Tau 也是促進微管蛋白聚合的高效啟動子。但是，Tau 蛋白同大多數(shù)微管相關(guān)蛋白一樣也會發(fā)生磷酸化。激酶和磷酸酶活性之間的平衡決定了 Tau 蛋白磷酸化狀態(tài)。在神經(jīng)元纖維纏結(jié)中，Tau 蛋白過度磷酸化聚合并且不能結(jié)合到微管。去磷酸化后，又會恢復結(jié)合微管的能力。NFTs 是由過度磷酸化的 Tau 蛋白形成的成對的螺旋結(jié)構(gòu)。這些不溶性結(jié)構(gòu)會損壞細胞質(zhì)功能和軸突運輸，并導致細胞死亡。正常生理情況下， Tau 蛋白處于磷酸化/去磷酸化的平衡狀態(tài)，但在 AD 中
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉樂;李建民;趙雅寧;常學優(yōu);;高血壓對全腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能的影響及SP600125的干預作用[J];中華高血壓雜志;2012年11期

本文編號：2545438