【摘要】：目的：糖尿病認(rèn)知功能障礙為血糖異常引起的學(xué)習(xí)、記憶、計(jì)算等認(rèn)知能力的損害，其中糖尿病導(dǎo)致的氧化應(yīng)激與抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)之間的失衡參與了疾病的發(fā)生、發(fā)展過程。酶類抗氧化系統(tǒng)中NAD(P)H:醌氧化物還原酶1（NQO1）為黃素類蛋白酶，亦為保護(hù)性還原酶,當(dāng)機(jī)體受到氧化應(yīng)激刺激時(shí)，NQO1表達(dá)增多，從而增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)觀察糖尿病大鼠出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙時(shí)海馬中NQO1的變化以及具有抗氧化作用的中藥曲克蘆丁對(duì)糖尿病認(rèn)知功能障礙的影響。 方法：雄性Sprague Dawley（SD）大鼠70只，體重150~(-1)70g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（NC組，n=10），糖尿病組（DM組，n=60）,普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，禁食12小時(shí)后，DM組大鼠腹腔內(nèi)一次性注射1%鏈脲佐菌素（STZ）60mg/kg，NC組大鼠腹腔內(nèi)一次性注射等體積檸檬酸緩沖液，72小時(shí)尾靜脈取血測(cè)定血糖，≥16.7mmol/L為造模成功，后每周測(cè)血糖，若＜16.7mmol/L則剔除。造模成功后分別于第1周、12周時(shí)對(duì)NC組、DM組大鼠進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試，第12周水迷宮測(cè)試結(jié)束后將DM組大鼠隨機(jī)分為糖尿病對(duì)照組（DC組，n=15）、糖尿病鹽水組（DN組，n=15）、曲克蘆丁干預(yù)組（DT組,n=15）、α-硫辛酸干預(yù)組（DL組,n=15），第13周時(shí)DT組大鼠給予腹腔注射曲克蘆丁60mg.kg~(-1).day~(-1)，DL組大鼠給予腹腔注射α-硫辛酸注射液60mg.kg~(-1).day~(-1)，DN組、NC組各給予等體積生理鹽水，干預(yù)6周，第18周時(shí)各組行Morris水迷宮測(cè)試后，處死大鼠取海馬，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)法（Real-time PCR）及蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western-blot）分別檢測(cè)海馬中NQO1mRNA和蛋白的表達(dá)水平，同時(shí)采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定海馬中超氧化物歧化酶（SOD）活力，硫代巴比妥法測(cè)定海馬中丙二醛（MDA）含量。 所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，應(yīng)用重復(fù)測(cè)量方差分析、多元方差分析及完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示統(tǒng)計(jì)結(jié)果，p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.一般觀察 糖尿病組大鼠于造模成功后出現(xiàn)明顯的多尿、多飲、多食、體重下降，隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，糖尿病大鼠血糖波動(dòng)于較高水平（＞20.0mmol/L），同時(shí)出現(xiàn)毛色枯黃、皮膚變薄、精神萎靡、易激惹現(xiàn)象。干預(yù)過程中DT組大鼠一般情況優(yōu)于DL組。正常對(duì)照組大鼠生長(zhǎng)狀態(tài)及營(yíng)養(yǎng)情況良好，無上述糖尿病癥狀。 2.血糖及體重的變化 造模前DM組與NC組相比,大鼠的血糖及體重均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05），干預(yù)結(jié)束時(shí)（第18周），DC組（28.29±2.79）、DN組(29.25±3.18)、DT組（27.77±2.66）、DL組（30.54±3.31）大鼠血糖均明顯高于NC組（7.63±0.77，p＜0.01），但體重均明顯低于NC組大鼠同期體重（p＜0.01）。干預(yù)結(jié)束時(shí)，糖尿病組各亞組間(DC、DN、DT、DL)大鼠血糖及體重均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。 3. Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果 第1周時(shí)Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果顯示：與NC組相比，DM組大鼠逃避潛伏期無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05），說明兩組大鼠認(rèn)知功能無差異。 第12周干預(yù)結(jié)束時(shí)Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果顯示：與NC組相比，，DM組大鼠逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)（p＜0.05），在相同時(shí)間點(diǎn)兩組逃避潛伏期有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＜0.05），證明第12周時(shí)糖尿病大鼠出現(xiàn)了認(rèn)知功能障礙。 第18周干預(yù)結(jié)束后水迷宮測(cè)試結(jié)果顯示：與NC組相比，DC、DN、DT、DL組大鼠逃避潛伏期均延長(zhǎng)（p＜0.05）；與DC/DN組相比，DT、DL組大鼠逃避潛伏期均顯著縮短（p＜0.05）；DT組與DL組相比，DC組與DN組相比，大鼠逃避潛伏期均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。 4.海馬中NQO1mRNA的表達(dá) Real-time PCR顯示：與NC組(1.00±0.00)相比，DC組（0.70±0.04）DN組（0.72±0.08）大鼠海馬中NQO1mRNA表達(dá)量明顯減少（p＜0.05）；與DC/DN組相比，DT組（1.18±0.09）、DL組（1.13±0.05）大鼠海馬中NQO1mRNA表達(dá)量均明顯增加（p＜0.05）；DT組與DL組相比，DN組與DC組相比，海馬中NQO1mRNA表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。 5.海馬中NQO1蛋白的表達(dá) Western-blot顯示：與NC組(1.00±0.00)相比，DC組(0.44±0.05)、DN組(0.44±0.04)大鼠海馬中NQO1蛋白表達(dá)量明顯減少（p＜0.01）；與DC/DN組相比，DT組(1.14±0.05)、DL組(1.19±0.05)大鼠海馬中NQO1蛋白表達(dá)量明顯增加（p＜0.01）；DT組與DL組相比，DN組與DC組相比，大鼠海馬中NQO1蛋白表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。 6.海馬中SOD活力及MDA含量的測(cè)定 與NC組(SOD:115.98±7.57MDA:2.74±0.21)相比， DC組(SOD:61.81±3.94MDA:3.83±0.11)、 DN組（SOD:68.24±7.62MDA:3.71±0.20）大鼠海馬中SOD活力明顯降低（p＜0.01）,MDA含量明顯增多（p＜0.01）；與DC/DN組相比，DT組(SOD:191.99±11.41MDA:2.53±0.20)、DL組(SOD:200.32±6.17MDA:2.02±0.23)大鼠海馬中SOD活力均增強(qiáng)（p＜0.01），MDA含量均明顯減少（p＜0.01）；DT組與DL組相比，大鼠海馬中SOD活力無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05），但DT組中MDA含量比DL組增多（p＜0.05）；DN組與DC組相比，大鼠SOD活力及MDA含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05） 結(jié)論： 1.糖尿病可導(dǎo)致大鼠認(rèn)知功能障礙，減少海馬中具有抗氧化能力的NQO1的表達(dá)，降低SOD活性，增加氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生。 2. α-硫辛酸可改善糖尿病認(rèn)知功能障礙，增加海馬中NQO1的表達(dá)，增強(qiáng)SOD活性，減少M(fèi)DA的產(chǎn)生。 3.曲克蘆丁具有抗氧化應(yīng)激作用，在改善糖尿病認(rèn)知功能障礙上可發(fā)揮與α-硫辛酸類似的功效，但其抗氧化作用可能弱于α-硫辛酸。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R587.1;R749.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 孫增榮;王建華;;2型糖尿病認(rèn)知功能損害研究進(jìn)展[J];國(guó)際內(nèi)分泌代謝雜志;2006年01期

本文編號(hào)：2531704