【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一種發(fā)生于老年或老年前期的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變疾病,以進(jìn)行性的記憶認(rèn)知障礙、人格改變?yōu)橹饕卣?其典型的病理變化包括p-淀粉樣蛋白(Aβ)沉積、Tau蛋白異常過度磷酸化、皮層與海馬組織廣泛神經(jīng)元丟失。隨著全球老齡化的進(jìn)程,其發(fā)病率日益增加,給家庭和社會帶來了沉重的負(fù)擔(dān),AD已成為當(dāng)今神經(jīng)科學(xué)及老年醫(yī)學(xué)備受關(guān)注的研究課題,開發(fā)AD治療藥物、探討分子作用機(jī)制迫在眉睫。 目的： (1)檢測銀杏內(nèi)酯A對N2a細(xì)胞的毒性以及對岡田酸(OA)誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。 (2)探討銀杏內(nèi)酯A對OA誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞Tau蛋白磷酸化水平和PI3K-Akt通路的影響。 (3)研究銀杏內(nèi)酯A對Ap誘導(dǎo)的擬AD小鼠腦神經(jīng)元損傷及Tau蛋白異常磷酸化的影響。 方法： (1)以鼠成神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(N2a)為對象,MTT法檢測不同劑量的銀杏內(nèi)酯A對N2a細(xì)胞的毒性以及對岡田酸(OA)誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞死亡的保護(hù)作用；吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙染熒光顯微鏡法觀察銀杏內(nèi)酯A對OA作用下的N2a細(xì)胞的保護(hù)作用;Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測銀杏內(nèi)酯A對OA誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞凋亡的影響。 (2)使用OA干預(yù)N2a細(xì)胞生長,誘導(dǎo)細(xì)胞Tau蛋白過度磷酸化,銀杏內(nèi)酯A藥物處理后,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測N2a細(xì)胞裂解物中總P-Tau的含量,蛋白免疫印跡法(western blot)檢測p-Tau、p-GSK3β、p-PI3K及p-Akt的表達(dá)。 (3)Aβ1-40腦內(nèi)海馬單側(cè)注射建立擬阿爾茨海默病(AD)動物模型,觀察擬AD小鼠行為學(xué)改變；ELISA和western blot檢測小鼠海馬組織中Tau蛋白磷酸化水平,HE染色法觀察小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞病理形態(tài)變化。 結(jié)果： (1)不同濃度的銀杏內(nèi)酯A(10-4-10-7M)處理細(xì)胞24小時后,濃度依賴性地阻止了OA誘導(dǎo)的細(xì)胞活力下降；與正常對照相比,OA模型組細(xì)胞凋亡及壞死數(shù)量明顯升高,不同濃度銀杏內(nèi)酯A作用后的細(xì)胞凋亡和壞死狀況有所改善,且銀杏內(nèi)酯A高劑量組(10-4M)細(xì)胞幾乎恢復(fù)至正常狀態(tài),表明銀杏內(nèi)酯A對OA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有保護(hù)及改善作用。 (2)低劑量銀杏內(nèi)酯A(10-7M)效果不明顯,但隨著銀杏內(nèi)酯A濃度的增加,Tau蛋白異常磷酸化顯著改善,GSK-3β Ser9位點(diǎn)的絲氨酸殘基磷酸化也得到抑制,同時PI3K和Akt的Tyr508和Ser473位點(diǎn)被磷酸化。 (3)與模型組相比,銀杏內(nèi)酯A處理的擬AD小鼠Tau蛋白磷酸化水平有所下降,神經(jīng)元的數(shù)量顯著增多,形態(tài)也比較完整,銀杏內(nèi)酯A可以對抗由Ap誘導(dǎo)引起的毒性作用。 結(jié)論： 神經(jīng)細(xì)胞凋亡是AD發(fā)生過程中的一個重要機(jī)制,研究發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯A對OA誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞凋亡具有一定程度的保護(hù)作用；NFTs是AD患者腦內(nèi)典型的病理特征之一,異常磷酸化Tau蛋白是其主要組成成分,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示銀杏內(nèi)酯A能夠劑量依賴性的改善Tau蛋白異常磷酸化,其機(jī)制可能是PI3K-Akt信號通路的激活；另外,擬AD小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明銀杏內(nèi)酯A對Aβ造成的神經(jīng)毒性和Tau蛋白磷酸化有顯著的抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R749.16

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9 郭U，

本文編號：2520513