【摘要】：研究目的以慢性不可預(yù)見性溫和刺激(Chronic Unpredictable Mild Stress,CUMS)誘導(dǎo)抑郁小鼠為基礎(chǔ),結(jié)合選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(Selective Serotonin Reuptake Inhibitor,SSRI)類經(jīng)典藥物——鹽酸氟西汀(Fluoxetine Hydrochloride,FLX)及抑郁樣行為評估手段的使用,篩選出對氟西汀不敏感的小鼠以模擬臨床難治性抑郁(Treatment-Resistant Depression,TRD)患者的癥狀表現(xiàn)。在此模型基礎(chǔ)上,觀察小鼠抑郁樣行為表現(xiàn)和腦內(nèi)白介素-1β(Interleukin-1 beta,IL-1β)、白細(xì)胞介素1受體拮抗劑(Interleukin-1 Receptor Antagonist,IL-1RA)以及核因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)的表達(dá)水平,并對其抑郁樣行為與IL-1β表達(dá)水平之間做出統(tǒng)計學(xué)相關(guān)分析。以初步探討IL-1β與難治性抑郁之間的關(guān)系,為難治性抑郁的發(fā)病機制研究及臨床治療方向提供新思路與理論基礎(chǔ)。研究方法本研究中實驗分為兩部分,均為基礎(chǔ)實驗:第1部分:50只成年雄性BALB/c小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,隨機分為對照組(CONTROL)、模型組(CUMS)和模型+治療(CUMS+Treatment)組。對照組接受常規(guī)飼養(yǎng)9周,模型組接受CUMS處理9周,而模型+治療組接受8周CUMS處理和1周鹽酸氟西汀10mg/kg/day干預(yù)。分別于第8、9周末,對各組小鼠進(jìn)行體質(zhì)量(Body Weight Test,BWT)、強迫游泳(Forced Swim Test,FST)、糖水偏好(Sucrose Preference Test,SPT)及曠場測試(Open Field Test,OFT),獲取并對比兩次評估結(jié)果差異。以治療后小鼠在糖水偏好實驗中測得糖水偏好系數(shù)的增加量為標(biāo)準(zhǔn),定義出抑郁樣行為減輕小鼠為“治療有效/一般抑郁小鼠(Depressed Mice,DM)”和“氟西汀不敏感/治療抵抗小鼠(Anti-Fluoxetine Mice,FRM/Anti-depressant Resistant Mice,ATRM)”。在此分組基礎(chǔ)上,利用SPSS19.0軟件分析第9周結(jié)束時對照組、模型組、一般抑郁小鼠以及氟西汀不敏感組小鼠在上述行為學(xué)測試中的測試結(jié)果,比較組間差異。第2部分:在第9周結(jié)束時,處死各組小鼠,提取腦組織,借助免疫蛋白印跡檢測(Western Blot,WB)與酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)技術(shù)對組織中IL-1β、IL-1RA以及NF-κB的表達(dá)水平進(jìn)行分析,并使用統(tǒng)計軟件對比分析組間差異。結(jié)果第1部分:(1)體質(zhì)量檢測:第9周結(jié)束時,對照組小鼠體質(zhì)量為(24.56±5.45)g,模型組為(19.03±8.58)g,癥狀改善組小鼠體質(zhì)量為(20.12±9.17)g,治療抵抗組小鼠為(18.56±7.56)g。其中,治療抵抗組小鼠體質(zhì)量較對照組、治療有效組小鼠體重下降明顯,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)糖水偏好實驗:在第8周末,對照組小鼠的糖水偏好值為74%,模型組小鼠糖水偏好58%,治療有效組為52%,治療抵抗組為50%。而第9周末,對照組小鼠糖水偏好值為76%,模型組為48%,治療有效組為64%,治療抵抗組為53%。氟西汀干預(yù)后,治療抵抗組小鼠糖水偏好值上升幅度較小,仍低于對照組與治療有效組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)第9周末,曠場試驗中各組小鼠水平運動距離的組間比較結(jié)果中,對照組小鼠為(1471.61±1573.65)mm,模型組小鼠為(819.71±874.15)mm,治療有效組小鼠為(1017.82±910.98)mm,治療抵抗組小鼠為(1049.07±620.02)mm。進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析后發(fā)現(xiàn),組間差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。在強迫游泳行為學(xué)評估中,對照組小鼠不動時間為(208.25±13.20)s,模型組為(238.50±13.38)s,治療有效組小鼠為(156.00±25.47)s,治療抵抗組小鼠不動時間為(241.50±36.55)s。其中,模型組與治療抵抗組小鼠的強迫游泳不動時間較對照組明顯延長。進(jìn)行組間比較發(fā)現(xiàn),治療抵抗組小鼠強迫游泳不動時間分別與對照組、治療有效組小鼠不動時間存在差異,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。第2部分:(1)Western Blot:IL-1β——模型組、治療有效組及治療抵抗組小鼠蛋白表達(dá)水平均較對照組表達(dá)水平較高,其中模型組與治療抵抗組升高較為明顯,但各組間IL-1β/β-actin的表達(dá)差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.643,P=0.719);IL-1RA——模型組、治療有效組及治療抵抗組小鼠IL-1RA蛋白表達(dá)水平均有所升高。將各組IL-1RA/β-actin進(jìn)行組間比較后發(fā)現(xiàn),治療抵抗組分別高于模型組、治療有效組IL-1RA的表達(dá)水平,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=38.246,P0.001;F=32.459,P0.001)。NF-κB——模型組、治療有效組及治療抵抗組小鼠腦內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)水平均較對照組表達(dá)水平較高。其中模型組與治療抵抗組升高較為明顯,但表現(xiàn)為趨勢,將各組小鼠NF-κB/β-actin進(jìn)行兩兩比較后,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.726,P=0.851)。模型組、治療有效組及治療抵抗組小鼠腦內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)水平均較對照組表達(dá)水平較高。其中模型組與治療抵抗組升高較為明顯,但表現(xiàn)為趨勢,將各組小鼠NF-κB/β-actin進(jìn)行兩兩比較后,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.726,P=0.851)。(2)ELISA檢測:對照組小鼠腦內(nèi)IL-1β含量為(72.94±1.44)pg/mg,模型組為(177.978±1.952)pg/mg,治療有效組為(93.09±4.65)pg/mg,治療抵抗組為(164.90±46.70)pg/mg。其中,治療抵抗組小鼠腦內(nèi)IL-1β水平升高明顯,與對照組、治療有效組進(jìn)行比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。(3)治療抵抗組小鼠腦內(nèi)IL-1β水平與強迫游泳不動時間間的相關(guān)分析:IL-1β的升高與強迫游泳不動時間呈顯著正相關(guān)(r2=0.459,P=0.006)。結(jié)論8周的慢性不可預(yù)見性溫和刺激模型可以誘導(dǎo)小鼠出現(xiàn)明顯抑郁樣行為改變,使用鹽酸氟西汀以及抑郁樣行為評估實驗可以幫助篩選出對氟西汀治療不敏感的抑郁小鼠,在一定程度上模擬臨床難治性抑郁癥發(fā)作時癥狀難以改善的特點。治療抵抗小鼠表現(xiàn)出異常增高的IL-1β、IL-1RA及NF-κB水平,其中IL-1β水平與強迫游泳中不動時間呈正相關(guān)關(guān)系。提示IL-1β在難治性抑郁的發(fā)病過程中可能與抑郁癥狀嚴(yán)重程度有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.4

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本文編號：2484435