【摘要】：背景慢性酒精暴露后NMDA受體尤其NR2B亞基表達上調(diào),有研究提示NMDA受體尤其NR2B亞基與酒精依賴相關(guān)的各種臨床表征關(guān)系密切,其中NMDA受體拮抗劑AP-5可抑制酒精條件性位置偏愛(conditioned place preference,CPP)的形成,但酒精誘導(dǎo)NR2B基因表達的機制目前尚不清楚。表觀遺傳修飾是一種介導(dǎo)環(huán)境因素和基因組調(diào)控基因表達的機制,這種機制參與了包括酒精依賴在內(nèi)的人類疾病的病理過程。有研究提示,組蛋白修飾參與了酒精誘導(dǎo)NR2B基因表達的調(diào)控作用,但NR2B基因表達的組蛋白調(diào)控研究結(jié)果不一,仍需進一步明確。本研究我們通過建立酒精CPP及組蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制劑丁酸鈉干預(yù)大鼠模型,觀察丁酸鈉對酒精誘導(dǎo)的大鼠覓藥行為及海馬NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙�；磉_影響,探討酒精依賴形成即酒精覓藥行為的組蛋白修飾機制。目的1.建立酒精CPP及丁酸鈉干預(yù)大鼠模型,探討丁酸鈉對大鼠酒精依賴形成的影響。2.檢測各組大鼠海馬NR2B蛋白、NR2BmRNA及NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙�；磉_水平,探討酒精誘導(dǎo)NR2B基因表達的組蛋白乙酰化修飾機制。3.探討酒精依賴形成的組蛋白乙酰化修飾機制。方法1.雄性Wistar大鼠80只經(jīng)CPP測試篩選出自然偏愛黑箱且無明顯差異的大鼠48只,運用隨機數(shù)字表法分為4組(生理鹽水+生理鹽水組即生理鹽水組、丁酸鈉+生理鹽水組即丁酸鈉組、生理鹽水+酒精組即酒精組、丁酸鈉+酒精組),每組12只,分別給予生理鹽水、丁酸鈉(200mg/kg)、酒精(10%v/v,0.5g/kg/d)、丁酸鈉(200mg/kg)+酒精(10%v/v,0.5g/kg/d)腹腔注射處理建立酒精CPP及丁酸鈉干預(yù)模型。2.造模后,各組大鼠斷頭分離出海馬組織。采用蛋白印跡(Western-blot)、實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)技術(shù)分別檢測各組大鼠海馬NR2B蛋白、NR2B mRNA、NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙�；谋磉_水平。結(jié)果1.CPP測試結(jié)果:各組大鼠CPP測試值、CPP分值組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=25.731、20.065,均P0.05);每組大鼠CPP測試值與CPP基值經(jīng)配對t檢驗顯示,酒精組、丁酸鈉+酒精組測試值顯著高于基值(t=5.749、12.621,均p0.05);生理鹽水組、丁酸鈉組測試值較基值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.776、0.346,均P0.05)。酒精組、丁酸鈉+酒精組CPP測試值、分值較生理鹽水組顯著增高(均P0.05);丁酸鈉組CPP測試值、分值較生理鹽水組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05);丁酸鈉+酒精組CPP測試值較酒精組顯著增高(P0.05);丁酸鈉+酒精組CPP分值較酒精組一定程度上增高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.Western blot結(jié)果:各組大鼠海馬NR2B蛋白表達水平組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=12.384,P0.05);酒精組、丁酸鈉+酒精組海馬NR2B蛋白表達水平均顯著高于生理鹽水組(均P0.05);丁酸鈉組海馬NR2B蛋白表達水平較生理鹽水組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);丁酸鈉+酒精組海馬NR2B蛋白表達水平顯著高于酒精組(P0.05)。3.RT-PCR結(jié)果:各組大鼠海馬NR2B mRNA表達水平組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=18.524,P0.05);酒精組、丁酸鈉+酒精組海馬NR2B mRNA表達水平均顯著高于生理鹽水組(均P0.05);丁酸鈉組海馬NR2B mRNA表達水平較生理鹽水組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);丁酸鈉+酒精組海馬NR2B mRNA表達水平顯著高于酒精組(P0.05)。4.ChIP結(jié)果:各組大鼠海馬NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙酰化表達水平組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=22.754,P0.05);酒精組、丁酸鈉+酒精組海馬NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙酰化表達水平均顯著高于生理鹽水組(均P0.05);丁酸鈉組海馬NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙酰化表達水平較生理鹽水組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);丁酸鈉+酒精組海馬NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙�；磉_水平顯著高于酒精組(P0.05)。5.相關(guān)性分析結(jié)果:CPP分值與NR2B蛋白表達水平(r=0.474,P0.05)、NR2B蛋白表達水平與NR2BmRNA表達水平(r=0.468,P0.05)、NR2BmRNA表達水平與NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙�；磉_水平(r=0.596,P0.05)、CPP分值與NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙酰化表達水平(r=0.542,P0.05)均呈正相關(guān)。結(jié)論1.HDAC抑制劑丁酸鈉能在一定程度上增強酒精CPP效應(yīng)及增加海馬NR2B基因的表達。2.慢性酒精暴露后上調(diào)海馬NR2B基因表達,且NR2BmRNA表達水平與NR2B蛋白表達水平呈正相關(guān),NR2B蛋白表達水平與CPP分值呈正相關(guān),提示海馬NR2B基因表達上調(diào)可能是酒精依賴大鼠覓藥行為形成的機制之一。3.慢性酒精暴露后大鼠海馬NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙酰化程度升高;且NR2BmRNA與NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙�；磉_水平呈正相關(guān),CPP分值與NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙�；磉_水平呈正相關(guān),提示海馬NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙�；赡苁荖R2B基因表達的機制之一,海馬NR2B基因啟動子區(qū)H3K9乙酰化可能參與了酒精依賴大鼠覓藥行為形成的表觀遺傳學(xué)機制。
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【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R749.62

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

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3 杜愛林;徐春陽;姜洪波;邵坤;陳璐;侯福佳;張瑞嶺;;丁苯酞對酒精依賴大鼠海馬硫化氫含量及NMDA受體2B亞基表達的影響[J];中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志;2011年06期

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本文編號：2467877