【摘要】：目的構(gòu)建靶向糖原合成激酶3β(GSK-3β)基因的RNA干擾慢病毒載體,建立其對GSK-3β基因沉默表達的人神經(jīng)母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)的細胞系模型。方法根據(jù)GSK-3βmRNA序列設(shè)計合成靶向目的基因的短發(fā)夾狀RNA(shRNA)序列并構(gòu)建慢病毒表達載體,經(jīng)酶切和測序鑒定,將慢病毒重組載體與包裝載體共轉(zhuǎn)染293T細胞,獲得純化濃縮病毒液,侵染SH-SY5Y細胞,采用綠色熒光示蹤觀察細胞的轉(zhuǎn)染情況,設(shè)為慢病毒干擾組(實驗組)、陰性對照組(Lenti-NC組)、空白對照組(Blank組),利用qRT-PCR和Western blot法檢測GSK-3βmRNA和蛋白表達水平。結(jié)果成功構(gòu)建了靶向GSK-3β的shRNA慢病毒,重組慢病毒轉(zhuǎn)染人SH-SY5Y細胞,72 h后觀察轉(zhuǎn)染效率達90%以上,與對照組比較,靶基因變化結(jié)果顯示,實驗組中GSK-3βmRNA和蛋白的表達均顯著降低(均P0.01)。結(jié)論有效建立慢病毒介導的GSK-3β基因穩(wěn)定沉默表達的SH-SY5Y細胞模型,為體外評價研究GSK-3β沉默后藥物或行為治療AD提供試驗工具細胞模型。
[Abstract]:Aim to construct RNA interference lentivirus vector targeting glycogen synthesis kinase 3 尾 (GSK-3 尾) gene and establish a cell line model of human neuroblastoma cell line (SH-SY5Y) whose expression of GSK-3 尾 gene is silenced. Methods according to the GSK-3 尾 mRNA sequence, the short hairpin RNA (shRNA) sequence of the target gene was designed and synthesized, and the lentivirus expression vector was constructed. The recombinant lentiviral vector was co-transfected with the packaging vector to 293T cells by restriction endonuclease digestion and sequencing. SH-SY5Y cells were infected with purified and concentrated virion. The transfected cells were divided into lentivirus interference group (experimental group), negative control group (Lenti-NC group) and blank control group (Blank group) by green fluorescence tracer. The expression levels of GSK-3 尾 mRNA and protein were detected by qRT-PCR and Western blot methods. Results shRNA lentivirus targeting GSK-3 尾 was successfully constructed. Recombinant lentivirus was transfected into human SH-SY5Y cells. After 72 hours, the transfection efficiency was more than 90%. Compared with the control group, the target gene changes showed that the recombinant lentivirus was transfected into SH-SY5Y cells. The expression of GSK-3 尾 mRNA and protein in the experimental group was significantly lower than that in the control group (P0.01). Conclusion the lentivirus-mediated stable silencing expression of GSK-3 尾 gene in SH-SY5Y cell model can be established effectively, which provides an experimental tool for evaluating the drug or behavioral therapy of AD after GSK-3 尾 silencing in vitro.
【作者單位】： 山東大學附屬濟南市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;濟南市第四人民醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No:30970989)
【分類號】：R749.16

【共引文獻】

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3 汪華僑,范海虹,徐杰,李光武,袁群芳,謝瑤,姚志彬;抗氧化劑TA99系列治療阿爾茨海默病的實驗依據(jù)(英文)[J];中國臨床康復;2005年13期

4 錢云;張志s，

本文編號：2459164