發(fā)布時(shí)間：2019-04-09 10:14

【摘要】：目的:阿爾茨海默病(AD)是一種起病隱匿的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性變性疾病。自噬作為一種真核細(xì)胞內(nèi)重要的蛋白質(zhì)降解途徑,與AD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。自噬體大量堆積在軸突末端不能與溶酶體結(jié)合不僅影響了Aβ的代謝,更容易引起自噬應(yīng)激導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡。Rab7是一種小GTP酶,在自噬體的成熟以及自噬體與溶酶體的融合中都發(fā)揮著重要作用。研究表明,curcumin(姜黃素)作為一種多酚類植物化合物,在AD中起神經(jīng)保護(hù)作用,但其作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。本研究擬通過體外研究的方法,首先驗(yàn)證curcumin減少Aβ的沉積以及對(duì)AD的神經(jīng)保護(hù)作用;再觀察curcumin對(duì)自噬及自噬流的影響;緊接著進(jìn)一步研究其對(duì)自噬體軸突運(yùn)輸?shù)淖饔?最后探討其作用機(jī)制是否與Rab7的表達(dá)有關(guān)。本研究選擇一個(gè)新的視角探討curcumin對(duì)AD的作用機(jī)制,為AD的治療提供新的靶點(diǎn)、新的思路。方法:首先將細(xì)胞分為4組:WT組(N2a/WT細(xì)胞)、Control組(N2a/APP695swe細(xì)胞)、Sham組(經(jīng)5μM DMSO溶液處理24h的N2a/APP695swe細(xì)胞)、Curcumin組(經(jīng)5μM curcumin溶液處理24h的N2a/APP695swe細(xì)胞)。流式細(xì)胞術(shù)用于檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率和線粒體膜電位的變化。ELISA實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中Aβ的表達(dá)。通過透射電鏡和激光共聚焦顯微鏡進(jìn)一步觀察各組細(xì)胞中自噬體及自噬溶酶體數(shù)量的變化,并運(yùn)用Western Blot檢測(cè)LC3II、SQSTM1、Beclin1、Atg7、Atg16L1、Dynein、KIF3B以及Rab7的表達(dá)。q RT-PCR用于檢測(cè)Rab7在分子水平的表達(dá)。然后進(jìn)一步在N2a/APP695swe細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pc DNA3.1、pc DNA3.1-Rab7、NC-si RNA、Rab7-si RNA后,將細(xì)胞分為5組:Control組、pc DNA3.1組、pc DNA3.1-Rab7組、NC-si RNA組、Rab7-si RNA組,再次用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組中細(xì)胞凋亡率和線粒體膜電位的變化,ELISA檢測(cè)各組中Aβ的表達(dá),透射電鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察各組細(xì)胞中自噬體及自噬溶酶體數(shù)量的變化,Western Blot檢測(cè)LC3II、SQSTM1、Dynein、KIF3B蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:與Control組相比,經(jīng)curcumin處理細(xì)胞24h后,細(xì)胞凋亡率明顯降低(P=0.000),線粒體膜電位升高(P=0.000),細(xì)胞上清液中Aβ的含量減少(P=0.000);透射電鏡和激光共聚焦顯微鏡均顯示自噬體增加,且自噬溶酶體數(shù)量也增加;Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LC3II、Beclin1、Atg7、Atg16L1、Dynein以及Rab7的表達(dá)均增多(P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.003;P=0.000;P=0.000),而SQSTM1和KIF3B的表達(dá)降低(P=0.000;P=0.000);q RT-PCR結(jié)果顯示Rab7在m RNA水平表達(dá)也有所增加(P=0.000)。在N2a/APP695swe細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Rab7過表達(dá)載體后,與Control組相比,細(xì)胞凋亡率降低(P=0.000),線粒體膜電位增加(P=0.000),細(xì)胞上清液中Aβ的含量減少(P=0.000);透射電鏡和激光共聚焦顯微鏡結(jié)果顯示自噬體和自噬溶酶體數(shù)量也增加;Western Blot結(jié)果表明雖然LC3II的表達(dá)無明顯差異(P=0.865),但SQSTM1表達(dá)明顯減少(P=0.000),Dynein和KIF3B的表達(dá)有所增加(P=0.000;P=0.000)。在N2a/APP695swe細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Rab7干擾RNA后,其結(jié)果與轉(zhuǎn)染Rab7過表達(dá)載體相反。結(jié)論:Curcumin可以降低N2a/APP695swe細(xì)胞凋亡率、升高線粒體膜電位、減少Aβ的產(chǎn)生、并增強(qiáng)自噬體的軸突運(yùn)輸從而促進(jìn)自噬及自噬流,其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)Rab7的表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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1 Madhuri Venigalla;Erika Gyengesi;Gerald Münch;;Curcumin and Apigenin  novel and promising therapeutics against chronic neuroinflammation in Alzheimer's disease[J];Neural Regeneration Research;2015年08期

2 許可;向月;孫潔蕓;張雄;李昱;;姜黃素影響N2a/APP695swe細(xì)胞中ABCA1表達(dá)的機(jī)制研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年05期

3 王春艷;郭景森;田晶;崔萬麗;;β淀粉樣蛋白與阿爾茨海默病[J];吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào);2009年02期

4 高玲煥;鄒莉波;遲天燕;;β淀粉樣蛋白在阿爾茨海默病病因?qū)W中作用研究進(jìn)展[J];沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年S1期

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本文編號(hào)：2455089