【摘要】：目的：探討microRNA-26a (miR-26a)在神經(jīng)元形態(tài)發(fā)育過程中發(fā)揮的作用及其分子機制研究。 方法：1.運用實時熒光定量PCR的方法，檢測miR-26a在神經(jīng)干細胞和神經(jīng)元細胞中的表達情況。2.用免疫熒光染色和激光共聚焦的方法檢測收集神經(jīng)元細胞圖像。3.利用Image-ProPlus軟件對神經(jīng)元細胞形態(tài)進行Sholl分析并統(tǒng)計神經(jīng)元突起的長度和分布。4.利用Targetscan軟件對miR-26a進行靶點預(yù)測分析。5.在神經(jīng)元細胞中通過轉(zhuǎn)染miR-26a mimic實現(xiàn)miR-26a的特異性過表達；轉(zhuǎn)染miR-26ainhibitor實現(xiàn)miR-26a的特異性抑制。通過慢病毒感染法實現(xiàn)phosphatase and tensin homolog (PTEN)的特異性過表達；利用PTENshRNA通過small interfering RNA(siRNA)技術(shù)實現(xiàn)對PTEN的特異性敲降。并通過蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)檢測PTEN蛋白的表達水平。 結(jié)果：1.miR-26a在神經(jīng)元細胞中的表達比在神經(jīng)干細胞中的表達量要豐富。2.過表達miR-26a組神經(jīng)元細胞突起的數(shù)量、長度和分布較對照組有著明顯升高；敲降miR-26a組神經(jīng)元細胞的突起的數(shù)量、長度和分布較對照組有著明顯下降（n100, P0.05）。3.PTEN信使RNA（mRNA）的3’端非編譯區(qū)(3’UTR)含有三個與miR-26a特異性結(jié)合的位點。4.在神經(jīng)元細胞中，過表達miR-26a，PTEN蛋白表達水平出現(xiàn)明顯下降。過表達PTEN，神經(jīng)元細胞突起的數(shù)量、長度和分布均出現(xiàn)顯著性下降；而敲降PTEN，神經(jīng)元細胞突起的數(shù)量、長度和分布均出現(xiàn)顯著性上升（n100, P0.05）。 結(jié)論：1.過表達miR-26a能夠促進神經(jīng)元細胞突起的生長，，增加神經(jīng)元細胞突起的數(shù)量、長度和分布，表明miR-26a在神經(jīng)元形態(tài)發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。2.在神經(jīng)元細胞中PTEN是miR-26a的一個關(guān)鍵性作用靶點。3.過表達PTEN基因能夠明顯抑制神經(jīng)元細胞的生長發(fā)育，降低神經(jīng)元細胞的可塑性。在神經(jīng)元細胞中PTEN是介導(dǎo)miR-26a發(fā)揮其相關(guān)調(diào)控作用的關(guān)鍵分子。這些發(fā)現(xiàn)讓人們對神經(jīng)元可塑性及其生長有了更進一步的認識，能夠為阿爾茨海默癥及其相關(guān)神經(jīng)退行性疾病提供一個新的解決思路。
[Abstract]:Aim: to investigate the role of microRNA-26a (miR-26a) in neuronal morphological development and its molecular mechanism. Methods: 1. Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of miR-26a in neural stem cells and neuron cells. Use immunofluorescence staining and laser confocal method to detect and collect image of neuron cells. 3. The morphology of neurons was analyzed by Sholl with Image-ProPlus software, and the length and distribution of neurite processes were calculated. 4. Targetscan software was used to predict the target of miR-26a. 5. The specific overexpression of miR-26a was achieved by transfection of miR-26a mimic in neuron cells, and the specific inhibition of miR-26a was achieved by transfection of miR-26ainhibitor. The specific over-expression of phosphatase and tensin homolog (PTEN) was achieved by lentivirus infection, and the specific knock-down of PTEN was achieved by small interfering RNA (siRNA) using PTENshRNA. The expression level of PTEN protein was detected by Western blot. Results: the expression of 1.miR-26a in neuron cells was more abundant than that in neural stem cells. The number, length and distribution of neurite processes in over-expressed miR-26a group were significantly higher than those in control group. The number, length and distribution of neurite processes in the knockdown miR-26a group were significantly lower than those in the control group (n 100, P < 0.01). 3. The 3 'uncompiled region (3'UTR) of PTEN messenger RNA (mRNA) contained three miR-26a-specific binding sites. 4. The overexpression of miR-26a,PTEN protein decreased significantly in neuron cells. The number, length and distribution of neurite processes of over-expressed PTEN, neurons decreased significantly, while those of knockdown PTEN, neurons increased significantly (n100, P0.05). Conclusion: 1. Overexpression of miR-26a can promote the growth of neurite processes, increase the number, length and distribution of neurite processes, indicating that miR-26a plays an important role in neuronal morphological development. 2. PTEN is a key target of miR-26a in neuron cells. 3. Overexpression of PTEN gene can significantly inhibit the growth and development of neuron cells and decrease the plasticity of neuron cells. In neuron cells, PTEN is the key molecule that mediates miR-26a to play a related regulatory role. These findings provide a further understanding of neuronal plasticity and its growth and provide a new solution for Alzheimer's disease and its related neurodegenerative diseases.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R749.16

【共引文獻】

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本文編號：2431366