【摘要】：研究背景： 酒精中毒和抑郁癥均是神經(jīng)退行性疾病,其共同特征均是在特定腦區(qū)出現(xiàn)大量神經(jīng)元凋亡,并伴隨神經(jīng)再生減少。并且,酒精中毒和抑郁癥表現(xiàn)出很高的共病率。臨床證據(jù)表明,抑郁癥狀常出現(xiàn)在慢性酒精中毒的戒斷過程中,并且對戒斷后復飲有很大的影響。雖然沒有一種單一的神經(jīng)生物學機制可以解釋這2種對大腦均有巨大破壞性疾病的發(fā)生,但不斷有證據(jù)提示該2種疾病均與神經(jīng)再生減少有關。 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)能夠影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)神經(jīng)元的發(fā)育和存活。許多研究提示酒精中毒和抑郁癥均是成年期海馬的神經(jīng)再生發(fā)生了改變引起的。由此,我們提出這樣一個設想：神經(jīng)元再生的改變是否就是這2種神經(jīng)精神疾病——酒精中毒和抑郁癥共同的神經(jīng)生物學機制。因此,本實驗的主要內(nèi)容包括：BDNF和proBDNF及其受體分別在抑郁癥和酒精中毒中表達的變化,并探討在酒精戒斷過程中出現(xiàn)抑郁癥狀時這些因子的變化及2種疾病的相互作用。 方法： 1. proBDNF及其受體在人類抑郁癥及酒精中毒中表達的研究： 抽取2010年至2011年在云南省精神病醫(yī)院住院的滿足ICD-10對抑郁癥(40例)及慢性酒中毒(30例)診斷標準的病人血樣以及與其相匹配的正常人血樣男女各50例。從中分離血清,并提取RNA和蛋白質(zhì),通過western blotting、 RT-qPCR和ELISA等技術,觀察proBDNF、 BDNF、 p75NTR、 sotilin及TrkB這5個因子與這2種疾病的關系。同時,在酒精中毒實驗中,我們在酒精戒斷后采用PANSS量表對酒精中毒患者的陽性和陰性癥狀做出評價,利用其中的抑郁因子得分比較酒精戒斷后的抑郁癥狀,探討當酒精戒斷伴隨抑郁癥狀出現(xiàn)時proBDNF及其受體的變化。 2. proBDNF及其受體在慢性酒中毒小鼠中表達的研究： 以50例小鼠為研究對象,建立慢性酒中毒小鼠模型,分為正常對照組、慢性酒中毒組、酒精戒斷1天組(簡稱戒斷1天組),酒精戒斷3天組(簡稱戒斷3天組)和慢性酒中毒側(cè)腦室注射anti-proBDNF組(簡稱側(cè)腦室注射anti-proBDNF組)。觀察BDNF. proBDNF因子及其受體和慢性酒中毒的關系。并且觀察連續(xù)酒精戒斷3天內(nèi)小鼠的抑郁行為,探討當酒精戒斷過程中出現(xiàn)抑郁癥狀時proBDNF及其受體的變化。 結(jié)果： 1.重癥抑郁患者及慢性酒精中毒患者與正常對照組比較,proBDNF, sortilin和p75NTR的蛋白水平較高,而TrkB的蛋白質(zhì)水平降低。proBDNF,p75NTR,sortilin和TrkB表達的血.清蛋白水平與淋巴細胞蛋白水平的趨勢是一致的。 2.在重癥抑郁患者中,BDNF,TrkB和p75NTR在mRNA水平的改變與其在蛋白水平的改變一致。重癥抑郁癥患者中,血清中mBDNF濃度明顯低于正常對照組的水平(P0.05)。且在重癥抑郁癥患者中,血清中proBNDF的表達水平與血清mBDNF的水平呈反比。 3. proBDNF、 p75NTR及sortilin在淋巴細胞蛋白及血清中的表達與重癥抑郁程度(HRSD-21項評分)呈正相關：而mBDNF及TrkB與HRDS-21項的得分呈負相關。 4.在人類血液樣本中,慢性酒中毒患者酒精戒斷前無論是淋巴細胞蛋白還是血清中的proBDNF, sortilin和p75NTR的表達水平均高于正常對照組,而nBDNF和TrkB的水平較低。在進行了一周的戒斷治療后,proBDNF,sortilin和p75NTR的表達水平較戒斷前明顯降低了,而mBDNF和TrkB的水平則明顯升高。通過ELISA檢測時發(fā)現(xiàn)血清中mBDNF的水平在酒精戒斷前較正常對照組低,而戒斷一周后其水平就明顯增加了。比較戒斷前proBDNF和mBDNF的表達比例時發(fā)現(xiàn),在慢性酒中毒患者中proBDNF/mBDNF的平衡被打破了。 5.人類血液樣本中,mBDNF和TrkB的表達水平與慢性酒中毒患者平均每天酒精消耗量呈負相關,proBDNF,p75NTR和sortilin的表達水平與慢性酒中毒患者平均每天酒精消耗量呈正相關。 6.酒精戒斷1周后,酒精中毒患者的抑郁癥狀較戒斷前及正常對照組明顯,但未達到統(tǒng)計學意義。 7.通過行為學檢查發(fā)現(xiàn),經(jīng)過56天的慢性酒精溶液灌胃后實驗組小鼠的體重、毛色、精神狀態(tài)、水平動機活動、探究行為及認知功能都有明顯改變,可以說明慢性酒精中毒小鼠造模成功。 8.戒斷的行為學實驗發(fā)現(xiàn),隨著戒斷時間的延長,戒斷組小鼠水平動機活動、探究行為及認知功能都逐漸恢復,有的已經(jīng)接近或超過正常對照組。但戒斷1天時,強迫游泳實驗中戒斷組小鼠的絕對不動時間最長,與慢性酒中毒組和正常對照組均有統(tǒng)計學差異。隨著戒斷時間的延長,戒斷組小鼠的絕對不動時間有所減少,但仍比正常對照組小鼠長。 9.側(cè)腦室注射anti-proBDNF實驗中,側(cè)腦室注射anti-proBDNF組小鼠的認知功能較慢性酒中毒組明顯改善,但仍未達到正常水平。10.慢性酒中毒組小鼠中proBDNF、 sortilin和p75NTR的腦蛋白水平高于戒斷組及正常對照組,而mBDNF和TrkB水平較低。且隨著戒斷時間的延長,戒斷組小鼠proBDNF、 sortilin、 p75NTR和TrkB水平都逐漸恢復,有的已經(jīng)接近或超過正常對照組。側(cè)腦室注射anti-proBDNF實驗中,側(cè)腦室注射anti-proBDNF組小鼠腦蛋白proBDNF、 sortilin、 p75NTR和TrkB的表達水平都有所恢復,但仍未達到正常水平。 11.實時熒光定量PCR的結(jié)果發(fā)現(xiàn),鼠腦BDNF、 sortilin、 p75NTR和TrkB的mRNA表達水平與其蛋白表達水平一致。即戒斷后小鼠BDNF和TrkB的mRNA表達較慢性酒中毒組有所升高,但未恢復到正常水平；sortilin和p75NTR的mRNA表達較慢性酒中毒組有所降低,但未恢復到正常水平。 結(jié)論： 1.我們的初步研究結(jié)果顯示,在重癥抑郁患者和慢性酒精中毒患者中proBDNF及其受體p75NTR和sortilin的表達上調(diào),而TrkB和BDNF的水平下調(diào)了。也就是,在proBDNF/p75NTR/sortilin和mBDNF/TrkB信號途徑之間的平衡被破壞了。盡管我們的研究存在許多局限性,但其研究結(jié)果表明,在重癥抑郁和慢性酒中毒中proBDNF/p75NTR/sortilin信號途徑發(fā)揮著潛在的作用。也表明,抑郁癥和酒精中毒的發(fā)病存在共同的分子機制,這可能也是2種疾病共病的分子基礎。但這僅僅只是一個研究的開始,關于BDNF在抑郁癥和慢性酒中毒中的作用還需要進一步的深入研究,以便更多地認識抑郁癥和酒中毒這2種神經(jīng)精神疾病,為其治療提供新的方向及靶點。2.無論在人類慢性酒中毒樣本還是小鼠慢性酒精中毒模型中我們均發(fā)現(xiàn)proBDNF/p75NTR/soritlin信號通路的表達增強了,由此引發(fā)了慢性酒中毒小鼠的海馬及前額葉皮層等腦區(qū)的功能障礙。而通過對他們進行干預(戒斷或側(cè)腦室注射anti-proBDNF)后,減弱了proBDNF/p75NTR/soritlin信號通路對神經(jīng)元發(fā)生的抑制作用,且mBDNF和TrkB的表達水平卻能夠明顯回升,促進了大腦中神經(jīng)元的再生,也改善慢性酒中毒引起的認知功能及行為能力障礙。 3.無論在人類慢性酒中毒樣本還是小鼠慢性酒精中毒模型中,在酒精戒斷后均出現(xiàn)了抑郁樣癥狀或行為。這可能是由于在慢性酒精中毒的發(fā)展過程中,proBDNF/mBDNF的平衡失調(diào),超過了機體的可調(diào)節(jié)范圍,使得腦內(nèi)神經(jīng)發(fā)生被明顯抑制。但隨著酒精戒斷的時間逐漸延長,機體的代償功能逐漸恢復,神經(jīng)元再生也開始增多,抑郁癥狀才逐步減輕。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R749

【共引文獻】

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本文編號：2410244