【摘要】：背景：基于小兒多發(fā)性抽動癥(Multiple tics,MT)與多巴胺(DA)系統(tǒng)病理生理的密切聯(lián)系,及近年來在MT研究中神經(jīng)解剖學(xué)及神經(jīng)生化學(xué)方面的發(fā)現(xiàn),多巴胺系統(tǒng)功能異常被廣泛認為是導(dǎo)致MT發(fā)病的主要病理學(xué)基礎(chǔ),但目前MT的確切發(fā)病機制從分子及細胞水平均不明確。 目的：力求通過以下實驗初步揭示小兒多發(fā)性抽動癥多巴胺系統(tǒng)多位點功能紊亂的分子機制,分析靜安口服液對該系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)、代謝轉(zhuǎn)運過程、突觸后受體表達及信號傳導(dǎo)蛋白表達等多靶點的調(diào)節(jié)作用。 方法：本研究回顧及總結(jié)了小兒多發(fā)性抽動癥的中西醫(yī)研究進展；在前期研究成果的基礎(chǔ)上,采用了DOI[1-(2,5-dimethoxy-4-iodophenyl)-2-aminopropane,選擇性5-HT(2A/2C)受體激動劑]致抽動大鼠病理模型,40只SD雄性大鼠隨機分為空白組、模型組、靜安組及硫必利組,每組10只。60例患兒隨機分為靜安組及硫必利組,每組30例,并選取30名健康兒童(健康組)作為對照。用高效液相色譜法(HPLC)測定了60例MT患兒治療前后血漿DA、高草香酸(HVA)等神經(jīng)遞質(zhì)及代謝產(chǎn)物的含量,并與30例健康兒童比較；同時測定了模型動物腦組織及外周血DA、HVA等神經(jīng)遞質(zhì)及代謝產(chǎn)物的含量。用RT-PCR法測定了模型動物腦組織幾茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)的基因農(nóng)達水平,用放射免疫方法觀察了模型動物多巴胺轉(zhuǎn)運體(DAT)的腦內(nèi)分布情況,此二者足DA在突觸間隙轉(zhuǎn)運、降解等代謝過程的重要物質(zhì)；分別用RT、PCR法及激光共聚焦顯微鏡測試了模型動物腦組織多巴胺D1、D2受體的表達水平；分別用免疫組化染色和Western Blot檢測了模型動物腦組織紋狀體DARPP-32總蛋白表達及Phosphor-Thr-34-DARPP-32磷胺化水平。結(jié)果：1.與健康組(16.22±4.95ng/ml)比較,治療前患兒組血漿HVA[靜安組(21.27±11.41ng/ml)和硫必利組(19.94±9.29ng/ml)]含量明顯增加(P0.05)：模型組大鼠腦組織DA(1108.98±241.18ng/g)、HVA(96.29±23.88ng/g)均較空白組(547.66±207.84ng/g,65.53±17.93ng/g)顯著升高(P0.01)。與本組治療前比較,治療后靜安組HVA含量(13.65±10.81ng/ml)顯著降低(P0.05),硫必利組DA(12.33±11.12ng/ml)含量顯著降低(P0.05)。治療組大鼠腦組織DA[靜安組(669.67±167.59ng/g)和硫必利組(759.17±144.42ng/g)]、HVA[靜安組(77.92±8.76ng/g)和硫必利組(68.99±11.42ng/g)]較模型組明顯減低。 2.模型組大鼠腦內(nèi)紋狀體(5.43±1.39)、大腦皮層(4.61±1.58)、海馬(4.06±1.34)中DAT的腦內(nèi)放射性攝取比值均較空白組(3.03±0.83,2.490.72,1.98±0.75)明顯增高(P0.05)。治療組(靜安組與硫必利組)腦內(nèi)紋狀體(3.16±1.28,3.21±0.97)、大腦皮層(2.58±1.44,2.40±0.97)、海馬(2.42±1.08,2.18±1.30)放射性攝取比值均較模型組明顯降低(P0.05)。 3.與空白組(0.62±0.25)相比,模型組紋狀體中COMTmRNA(0.22±0.17)表達明顯降低(P0.05)。靜安口報液對COMT mRNA的表達無影響。 4.模型組大鼠大腦皮層中DRD1(0.22±0.76)較空白組(0.13：±0.51)表達明顯增高。靜安組(0.11±0.61)及硫必利組(0.05±0.03)DRD1較模型組明顯降低(P0.05)：硫必利組與空白組比明顯降低(P0.05)。 5.免疫組化染色顯示模型組大鼠紋狀體DARPP-32總蛋白陽性細胞數(shù)(490.47士186.77)和陽性顆粒光密度(52.62士25.22)均較空白組(325.73±137.57,24.36±10.69)明顯升高(P0.05)；Western blot顯示模型組DARPP-32總蛋白表達(1.44±0.24)較空白組(1.00±0.32)顯著增高(P0.05)；Phosphor-Thr-34-DARPP-32蛋白表達達各組無顯著性差異(P0.05)。 靜安組(374.33±160.79)與硫必利組(24.76±10.65)的陽性顆粒光密度均較模型組顯著降低(P0.05)；與靜安組相比較,硫必利(13.19±4.02)作用更強(P0.05)。硫必利組DARPP-32總蛋白表達(1.06±0.29)較摸型組顯著降低(P0.05)。 結(jié)論：1.中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)DA系統(tǒng)功能亢進參與了MT發(fā)病的病理生理機制,表現(xiàn)在DA活動過度(指DA及HVA含量增高、DAT及DRD1活動亢進)及介導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)和電活動的信號傳導(dǎo)分子DARPP-32總蛋白表達增高：可推測其導(dǎo)致MT發(fā)生的分r機制具體現(xiàn)為：DA小體從囊泡釋出后,突觸前膜上表達亢進的DAT促使其中吸收增加,使DA累積增加；突觸后膜DRD1超敏感,使DA神經(jīng)元與之相結(jié)合增強,引起效應(yīng)細胞的反應(yīng)活動過度;DARPP-32總蛋白表達增高(除DAKPP-32的Thr34位點之外的其他位點磷酸化所致)可促進DA突觸信息傳遞效率上調(diào)DA能神經(jīng)元生物活性增高,即可導(dǎo)致DA系統(tǒng)功能亢進。COMTmRNA表達降低,或許參與了MT發(fā)主見的病理生理機制。 2.關(guān)于靜安口服液的作和機制及效應(yīng)位點：①通過減少DA、HVA的含量,降低DA神經(jīng)元的興奮性,使模型動物減少抽動;②通過降低紋狀體、大腦皮層、海馬DAT腦內(nèi)分布密度,減少突觸間隙中DA的回收及再利用,從而降低突觸前DA神經(jīng)元的過度支配和靶器官活動亢進,使模型動物減少抽動；③通過抑制大腦皮層DRD1基因表達水平,降低了突觸后DRD1的超敏感性,減少DA神經(jīng)元之相結(jié)合而引起的活動亢進,從而使模型動物減少抽動。④通過降低DARPP-32總蛋白表達水平，，降低DA突觸信息傳遞效率,抑制DA神經(jīng)元的興奮性,從而使模型動物減少抽動�？傊�,靜安口服液通過對DA及HVA的含量、突觸間隙DA的代謝轉(zhuǎn)運和突觸后受體的敏感性及信號傳導(dǎo)分子表達水平的調(diào)節(jié),使它們之間相互影響,相互調(diào)節(jié),共同維持了DA系統(tǒng)對運動調(diào)節(jié)的穩(wěn)定狀態(tài),使機體的運動正常,體現(xiàn)出其作用結(jié)果的整體性。 本課題初步揭示了小兒多發(fā)性抽動癥DA系統(tǒng)的某些分子機制,闡釋了靜安口服液的作用機理及靶點,同時這一機制的探討也為MT專病新藥的開發(fā)研究提供了新的靶點和思路。
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【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R749.94

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 任思洋;靜心止動方治療中重度TD及對神經(jīng)遞質(zhì)影響的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

2 郭嘉成;菖蒲郁金湯對TS模型小鼠外周血中神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的影響[D];甘肅中醫(yī)學(xué)院;2014年

本文編號：2332093