【摘要】：[背景]EphB2是受體酪氨酸激酶家族中的一個(gè)亞型,在海馬中表達(dá)豐富,對(duì)突觸的發(fā)育和信號(hào)傳導(dǎo)起重要作用。研究證實(shí),在阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)患者和AD轉(zhuǎn)基因模型小鼠海馬中的EphB2表達(dá)下降,而且海馬齒狀回表達(dá)EphB2慢病毒質(zhì)�？梢阅孓D(zhuǎn)AD模型小鼠(hAPP J20)的NMDA受體依賴的長(zhǎng)時(shí)程降低,改善學(xué)習(xí)記憶障礙。我們以前的研究證實(shí)細(xì)胞水平激活EphB2受體可以降低tau磷酸化。但是整體水平EphB2是否調(diào)節(jié)tau磷酸化及其機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。糖尿病和AD有著極其密切的關(guān)系,糖尿病小鼠海馬中tau磷酸化程度明顯升高,EphB2是否參與了糖尿病誘導(dǎo)的AD樣病理改變尚未見(jiàn)報(bào)道。 [目的]在體水平探討EphB2對(duì)tau磷酸化的作用及其機(jī)制及EphB2對(duì)高糖引起的tau磷酸化的作用。 [方法]用立體定位注射的方法在hTau小鼠海馬CA3區(qū)給予ephrinB1/Fc,對(duì)照組給予Fc。免疫組化和western-blot檢測(cè)EphB2在海馬中的表達(dá),EphB2活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)EphB2的活性變化。免疫熒光和western-blot檢測(cè)tau磷酸化的相關(guān)位點(diǎn)。Western-blot檢測(cè)GSK3β,Akt, PI3K的表達(dá)，。 用尾靜脈注射的方式構(gòu)建Ⅰ型糖尿病小鼠模型,按血糖濃度的高低分為輕度高血糖組(7-10mmol/L)、中度高血糖組(10-20mmol/L)、高度高血糖組(20-30mmol/L)。 Western-blot檢測(cè)EphB2及tau磷酸化位點(diǎn)Ser396, Thr231在不同血糖濃度的糖尿病小鼠海馬中的表達(dá)。Western-blot檢測(cè)Ser396, Thr231在給予不同濃度葡萄糖含量的培養(yǎng)基的HEK293細(xì)胞中的表達(dá)及過(guò)表達(dá)并激活EphB2后,Ser396, Thr231的表達(dá)變化。 [結(jié)果]在擬AD轉(zhuǎn)基因小鼠(hTau)模型中,EphB2的表達(dá)量及活性均未見(jiàn)明顯變化。CA3區(qū)給予ephrinB1/Fc激活EphB2受體后,我們觀察到hTau小鼠的tau磷酸化水平明顯降低,同時(shí)激活磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B, PKB或Akt),抑制糖原激酶合酶-3β(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3p)。 在四氧嘧啶構(gòu)建的Ⅰ型糖尿病模型小鼠中,中(10-20mmol/L)、高(20-30mmol/L)血糖組小鼠海馬中EphB2表達(dá)明顯下降,tau磷酸化明顯增高。在HEK293/tau細(xì)胞中高血糖組tau磷酸化程度明顯增高,而過(guò)表達(dá)EphB2受體后,tau磷酸化表達(dá)水平下降。 [結(jié)論]EphB2在hTau小鼠海馬中表達(dá)量及活性都未見(jiàn)明顯改變。激活hTau小鼠海馬中的EphB2受體可以通過(guò)PI3K-Akt-GSK3β信號(hào)通路降低tau磷酸化水平。EphB2在中、高血糖組糖尿病小鼠中表達(dá)下降,在HEK293/tau細(xì)胞中過(guò)表達(dá)并激活EphB2受體可以逆轉(zhuǎn)高糖引起的tau磷酸化。
[Abstract]:[background] EphB2 is a subtype of receptor tyrosine kinase family, which is highly expressed in the hippocampus and plays an important role in synaptic development and signal transduction. The study confirmed that the expression of EphB2 decreased in hippocampus of (Alzheimer's disease, AD) patients with Alzheimer's disease and AD transgenic mice. Moreover, the expression of EphB2 lentivirus plasmid in dentate gyrus of sea horse could reverse the long term decrease of NMDA receptor dependence in AD model mice (hAPP J20) and improve learning and memory impairment. Our previous studies have shown that activation of EphB2 receptors at cell level can reduce tau phosphorylation. However, whether the overall level of EphB2 regulates tau phosphorylation and its mechanism has not been reported. There is an extremely close relationship between diabetes mellitus and AD. The degree of tau phosphorylation in hippocampus of diabetic mice is significantly increased. Whether EphB2 is involved in the AD like pathological changes induced by diabetes has not been reported. [objective] to investigate the effect of EphB2 on tau phosphorylation and its mechanism at in vivo, and the effect of EphB2 on tau phosphorylation induced by high glucose. [methods] ephrinB1/Fc, control group was given Fc. in CA3 area of hippocampus of hTau mice by stereotactic injection. Immunohistochemistry and western-blot were used to detect the expression of EphB2 in hippocampus, and EphB2 activity assay kit was used to detect the change of EphB2 activity. Immunofluorescence and western-blot were used to detect the phosphorylation of tau. Western-blot was used to detect the expression of GSK3 尾 and Akt, PI3K. The model of type 1 diabetic mice was established by tail vein injection. According to the level of blood glucose, the mice were divided into mild hyperglycemia group (7-10mmol/L), moderate hyperglycemia group (10-20mmol/L) and hyperglycemia group (20-30mmol/L). Western-blot was used to detect the expression of EphB2 and tau phosphorylation site Ser396, Thr231 in the hippocampus of diabetic mice with different blood glucose concentrations. Western-blot was used to detect Ser396,. Expression and overexpression of Thr231 in HEK293 cells with different concentration of glucose and activation of EphB2 the expression of Ser396, Thr231 changed. [results] there was no significant change in the expression and activity of EphB2 in (hTau) model of AD transgenic mice. After ephrinB1/Fc activated EphB2 receptor in CA3 region, we observed that tau phosphorylation level in hTau mice was significantly decreased. Both phosphatidylinositol 3-kinase (phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K) and protein kinase B (protein kinase B, PKB or Akt), inhibited glycokinase synthase 3 尾 (glycogen synthase kinase-3 尾 (GSK-3p). In the model mice of type I diabetes induced by alloxan, the expression of EphB2 and the phosphorylation of tau in hippocampus of 10-20mmol/L and 20-30mmol/L groups decreased significantly. In HEK293/tau cells, tau phosphorylation was significantly increased in hyperglycemia group, but tau phosphorylation level decreased after overexpression of EphB2 receptor. [conclusion] the expression and activity of EphB2 in hippocampus of hTau mice did not change significantly. Activation of EphB2 receptor in hippocampus of hTau mice can reduce the level of tau phosphorylation through PI3K-Akt-GSK3 尾 signaling pathway. The expression of EphB2 in hyperglycemic diabetic mice is decreased. Overexpression and activation of EphB2 receptors in HEK293/tau cells can reverse high glucose-induced tau phosphorylation.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16;R587.1

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本文編號(hào)：2304187