【摘要】：目的 觀察多奈哌齊對PC12細(xì)胞淀粉樣前體蛋白（APP）非淀粉樣物質(zhì)代謝途徑（α途徑）的影響以及可能的細(xì)胞信號機(jī)制。 方法 以體外培養(yǎng)的PC12細(xì)胞為觀察對象,分為空白對照組、多奈哌齊（20μmol/L）組、多奈哌齊（20μmol/L）+PI3-K抑制劑LY294002組(LY組)、多奈哌齊（20μmol/L）+P38抑制劑SB203580組(SB組)、多奈哌齊（20μmol/L）+JNK抑制劑SP600125組(SP組)。各抑制劑組在加入多奈哌齊前30分鐘分別給予相應(yīng)的抑制劑。培養(yǎng)24h后，用Western blot檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的APP、ADAM10和ADAM17蛋白水平；ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的sAPPα和sAPP/β水平。 結(jié)果 1. APP蛋白表達(dá)：空白對照組、多奈哌齊組、LY組、SB組和SP組的APP蛋白表達(dá)水平，各組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 2. ADAM10和ADAM17蛋白：用Western blot檢測ADAM10和ADAM17蛋白。與對照組相比較,多奈哌齊組、LY組、SB組和SP各組ADAM10和ADAM17均有增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）。各抑制劑組與多奈哌齊組比較，LY組ADAM10和ADAM17表達(dá)無明顯差異（P＞0.05），SB及SP組ADAM10和ADAM17表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 3. sAPPα和sAPPβ表達(dá)：用ELISA檢測sAPPα及sAPPβ蛋白。與對照組比較，多奈哌齊組、LY組、SB組和SP各組sAPPα表達(dá)均有增加，sAPPβ表達(dá)均有減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。各抑制劑組與多奈哌齊組比較，LY組sAPPα和sAPPβ表達(dá)無明顯差異（P＞0.05），SB及SP組sAPPα表達(dá)明顯降低，sAPPβ表達(dá)明顯增加，，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（（P＜0.01）。 結(jié)論 多奈哌齊能使APP的代謝向非淀粉樣途徑（α代謝途徑）轉(zhuǎn)變，其機(jī)制可能涉及JNK或P38信號通路，而與PI3-K通路無關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of Donepezil on non-amyloid metabolic pathway (偽 pathway) of amyloid precursor protein (APP) in PC12 cells and its possible signal mechanism. Methods PC12 cells cultured in vitro were divided into blank control group, Donepezil (20 渭 mol/L) group and LY294002 group (20 渭 mol/L) PI3-K inhibitor (LY group). Donepezil (20 渭 mol/L) P 38 inhibitor SB203580 group (SB group), Donepezil (20 渭 mol/L) JNK inhibitor SP600125 group (SP group). Each inhibitor group was given corresponding inhibitors 30 minutes before the addition of Donepezil. After 24 hours of culture, the levels of APP,ADAM10 and ADAM17 protein in the supernatant of cell culture were detected by Western blot and sAPP 偽 and sAPP/ 尾 in the supernatant were detected by ELISA method. Result 1. APP protein expression: there was no significant difference in the expression of APP protein between control group, Donepezil group, LY group, SB group and SP group (P > 0. 05). 2. ADAM10 and ADAM17 proteins: ADAM10 and ADAM17 proteins were detected by Western blot. Compared with the control group, the ADAM10 and ADAM17 of Donepezil group, LY group, SB group and SP group were increased significantly (P < 0. 05). The expression of ADAM10 and ADAM17 in LY group was not significantly different from that in Donepezil group (P > 0. 05), SB and SP group, P < 0. 05). 3. Expression of sAPP 偽 and sAPP 尾: sAPP 偽 and sAPP 尾 protein were detected by ELISA. Compared with the control group, the expression of sAPP 偽 in Donepezil group, LY group, SB group and SP group were all increased, and the expression of sAPP 尾 was decreased (P < 0. 01). The expression of sAPP 偽 and sAPP 尾 in LY group was not significantly different from that in Donepezil group (P > 0. 05), SB and SP group, sAPP 偽 expression was significantly decreased, sAPP 尾 expression was significantly increased (P < 0. 01). Conclusion Donepezil can change the metabolism of APP to non-amyloid pathway (偽 metabolic pathway), and its mechanism may be related to JNK or P38 signaling pathway, but not to PI3-K pathway.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2300024