【摘要】：目的:β-淀粉樣蛋白引起的氧化應(yīng)激在神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。Aβ_(25 35)可導(dǎo)致活性氧(ROS)的產(chǎn)生和誘導(dǎo)胞內(nèi)鈣超載。從鹿茸草中提出的單體成分savatiside A(SA)、torenoside B(TB)在心肌細(xì)胞上已被證實(shí)具有抗氧化應(yīng)激活性。本實(shí)驗(yàn)主要探討其在體內(nèi)外對Aβ_(25 35)引起的阿爾茨海默癥(AD)的保護(hù)作用,并初步進(jìn)行機(jī)制探討,為SA和TB防治神經(jīng)退行性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:采用MTT比色法確定Aβ_(25 35)誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的最佳造模劑量和SA、TB的有效保護(hù)劑量;倒置熒光顯微鏡觀察神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)變化;流式細(xì)胞儀檢測神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)ROS的水平;各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)氧化指標(biāo)GSH-PX、SOD、MDA的測定;DNA ladder檢測細(xì)胞DNA損傷;流式細(xì)胞儀測定神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度;Western Blot法檢測Calnexin、P-AMPK1、P-AMPK2以及COX-2蛋白的表達(dá);在體內(nèi),采用單側(cè)海馬注射Aβ_(25 35)誘導(dǎo)小鼠AD模型,探討SA和TB的神經(jīng)保護(hù)作用。結(jié)果:Aβ_(25 35)誘導(dǎo)PC12和SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞凋亡,SA和TB兩個(gè)化合物均能提高細(xì)胞存活率;倒置顯微鏡下可觀察到細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,在Aβ_(25 35)組,PC12和SH-SY5Y細(xì)胞生長明顯受到抑制,細(xì)胞集聚、貼壁功能減弱,部分細(xì)胞碎裂、死亡,給予SA、TB后,均能有效對抗Aβ_(25 35)引起的細(xì)胞形態(tài)變化;Aβ_(25 35)可引起SH-SY5Y、PC12細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著升高,SA,TB(25-100uM)均可抑制Aβ_(25 35)引起的細(xì)胞內(nèi)ROS水平的升高,當(dāng)同時(shí)給予活性氧抑制劑NAC處理后,細(xì)胞內(nèi)ROS水平會進(jìn)一步降低,表明SA,TB(25-100uM)發(fā)揮著抗氧化應(yīng)激的作用;損傷組細(xì)胞內(nèi)的MDA含量均較之正常組細(xì)胞有所升高,SOD和GSH-PX活性降低,而給予受試藥物處理后各實(shí)驗(yàn)組胞內(nèi)MDA含量降低,SOD和GSH-PX活性有所提高,進(jìn)一步表明SA、TB發(fā)揮著抗氧化作用;DNA ladder檢測結(jié)果表明Aβ_(25 35)處理細(xì)胞24h后,核小體間DNA斷裂,形成質(zhì)量不同的片段,DNA出現(xiàn)梯形條帶,而SA、TB(100μM)處理后能明顯減弱Aβ_(25 35)引起的DNA梯形條帶;流式細(xì)胞儀檢測顯示Aβ_(25 35)(30uM)可引起SH-SY5Y、PC12細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度顯著升高;而SA、TB(50-100uM)可抑制細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的升高;Western blotting結(jié)果表明,Aβ_(25 35)顯著增強(qiáng)PC12、SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)蛋白Calnexin的表達(dá),增強(qiáng)腺苷酸活化蛋白激酶P-AMPK1的表達(dá),但不影響P-AMPK2的表達(dá),同時(shí)顯著增強(qiáng)小鼠海馬組織中蛋白COX-2的表達(dá)。SA(50-100uM)可降低鈣調(diào)蛋白Calnexin和腺苷酸活化蛋白激酶P-AMPK1的活化,進(jìn)而抑制PC12、SH-SY5Y細(xì)胞的氧化應(yīng)激;在水迷宮實(shí)驗(yàn)中,Aβ_(25 35)(10.3ug)組小鼠逃避潛伏期明顯延長,穿越次數(shù)明顯減少,SA和TB(50-100mg/kg)可顯著降低小鼠的逃避潛伏期,增加小鼠的平臺穿越次數(shù);同時(shí),在Y迷宮實(shí)驗(yàn)中也得到了相似結(jié)果,Aβ_(25 35)組小鼠錯誤次數(shù)明顯增多,SA和TB(50-100mg/kg)可顯著降低小鼠的錯誤次數(shù);HE和尼氏染色結(jié)果表明,SA和TB可改善海馬CA1區(qū)的神經(jīng)椎體細(xì)胞的結(jié)構(gòu)損傷;電鏡檢測結(jié)果表明,SA和TB可減弱海馬CA1區(qū)的神經(jīng)元以及突觸的損傷。小鼠海馬組織蛋白檢測表明,單體化合物SA能夠顯著減少由Aβ_(25 35)誘導(dǎo)引起的小鼠海馬組織中蛋白COX-2的異常高表達(dá)。結(jié)論:SA、TB可改善Aβ_(25 35)引起的AD,其機(jī)制可能是通過抗氧化機(jī)制,調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣平衡,降低鈣調(diào)蛋白Calnexin和腺苷酸活化蛋白激酶家族中P-AMPK1表達(dá),以及抑制受損神經(jīng)組織中COX-2的活化而起作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Dena Shenk;林敏霞;;阿爾茨海默癥患者認(rèn)同維持的敘事研究[J];廣西民族大學(xué)學(xué)報(bào)(哲學(xué)社會科學(xué)版);2008年01期

2 于曉剛;徐凌忠;;阿爾茨海默癥研究進(jìn)展[J];社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志;2009年15期

3 ;科研人員發(fā)現(xiàn)3個(gè)與阿爾茨海默癥有關(guān)的基因[J];中國當(dāng)代醫(yī)藥;2009年19期

4 張玉勤;;通過嗅覺試驗(yàn)?zāi)芊裨缙谠\斷阿爾茨海默癥[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);1993年19期

5 張玉勤;;阿爾茨海默癥的新診斷方法[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);1995年06期

6 ;美曲膦酯治療阿爾茨海默癥的認(rèn)知缺陷[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊);1999年03期

7 船舷;;鋁過量是阿爾茨海默癥的重要誘因[J];長壽;2014年01期

8 林曉文;從里根去世看“阿爾茨海默癥”[J];家庭中醫(yī)藥;2005年11期

9 戎輝;;阿爾茨海默癥青睞哪些人[J];金秋;2012年24期

10 卓然;;預(yù)防阿爾茨海默癥有良方[J];長壽;2013年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉玲玲;龔鍇;盛柏楊;閆玉芳;鄭輝;張秀芳;趙南明;公衍道;;不同年齡和基因型阿爾茨海默癥小鼠海馬新生神經(jīng)元數(shù)量的差異[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

2 熊曉云;鄒永;吳玉梅;朱杰;梅其炳;;三種阿爾茨海默癥治療藥物促體外培養(yǎng)小鼠皮層神經(jīng)元活性的比較[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會論文摘要集（第二部分）[C];2002年

3 段迪;凌迎春;周月琴;;血管性癡呆及阿爾茨海默癥患者血清甘油三酯和總膽固醇變化的臨床研究[A];2009年浙江省醫(yī)學(xué)會精神病學(xué)分會老年精神障礙學(xué)組學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

4 韓鐵鋼;張競;韓軼星;茹炳根;;應(yīng)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究神經(jīng)生長抑制因子與阿爾茨海默癥的關(guān)系[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第三屆學(xué)術(shù)大會論文摘要[C];2005年

5 段迪;凌迎春;周月琴;;血管性癡呆及阿爾茨海默癥患者血清甘油三酯和總膽固醇變化的臨床研究[A];2007年浙江省精神病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

6 謝盈瑞;;阿爾茨海默癥所引發(fā)的抑郁癥及護(hù)理[A];2007河南省精神衛(wèi)生學(xué)術(shù)研討會資料匯編[C];2007年

7 朱靜靜;竇非;;熱休克蛋白90抑制劑降低阿爾茨海默癥β淀粉樣肽的作用機(jī)制初步研究[A];中國遺傳學(xué)會“發(fā)育、遺傳和疾病”研討會論文匯編集[C];2007年

8 熊曉云;鄒永;吳玉梅;朱杰;梅其炳;;三種阿爾茨海默癥治療藥物促體外培養(yǎng)小鼠皮層神經(jīng)元活性的比較[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

9 賈衛(wèi)平;焦勇;楊頻;;金屬離子與Aβ肽競爭取代理作用的論研究[A];第五屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2007年

10 焦勇;賈衛(wèi)平;韓大雄;楊頻;;分子模擬研究銅離子對Aβ肽聚集行為的調(diào)控機(jī)理[A];第五屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本報(bào)記者 賈巖;阿爾茨海默癥藥研盯上創(chuàng)新中藥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2013年

2 記者 李穎;中國需改進(jìn)阿爾茨海默癥診斷照護(hù)體系[N];科技日報(bào);2014年

3 劉海英;瑞典發(fā)現(xiàn)阿爾茨海默癥生物新標(biāo)志[N];科技日報(bào);2009年

4 重慶萬州 王祖遠(yuǎn);多吃魚蔬少吃紅肉可預(yù)防阿爾茨海默癥[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2012年

5 記者 鄧暉;施一公研究組揭示阿爾茨海默癥致病蛋白結(jié)構(gòu)[N];光明日報(bào);2014年

6 趙婀娜 章正;阿爾茨海默癥研究獲突破[N];人民日報(bào);2014年

7 ;阿爾茨海默癥：防勝于治[N];文匯報(bào);2011年

8 本報(bào)記者 王瀟;被擦去的記憶[N];解放日報(bào);2013年

9 ;學(xué)外語有助延緩智衰[N];新華每日電訊;2011年

10 ;新型醫(yī)用染料可用于阿爾茨海默癥診斷[N];中國紡織報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 朱e，

本文編號：2266887