【摘要】：阿爾茨海默癥(Alzheimer’s disease,AD)是一種慢性致死性的神經(jīng)退行性疾病,多發(fā)生在老年人群,但也有早發(fā)性AD,與遺傳因素有關(guān)。其主要病理特征是β-淀粉樣蛋白(amyloid-βprotein,Aβ)堆積形成的老年斑和神經(jīng)纖維狀纏結(jié),造成神經(jīng)元損傷。其中,Aβ的形成與三種分泌酶相關(guān),γ-分泌酶被認(rèn)為是其限速酶,β-淀粉樣前體蛋白(amyloid-βprecursor protein,APP)經(jīng)過γ-分泌酶剪切生成Aβ40/Aβ42。所以,研究γ-分泌酶的結(jié)構(gòu)對于揭示γ-分泌酶的工作機(jī)制和治療AD藥物分子設(shè)計(jì)具有重要意義。γ-分泌酶是一個(gè)具有19次跨膜區(qū)域的膜內(nèi)切割蛋白酶,由四個(gè)亞基presenilin(PS),nicastrin(NCT),PEN2和Aph1a在空間極為嚴(yán)密復(fù)雜排列組成。本研究中,利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)等成功表達(dá)四種組分和全酶復(fù)合物。由于膜蛋白疏水性,篩選合適的去垢劑溶解膜組分也是本研究中的重點(diǎn),經(jīng)過篩選,選擇最佳的去垢劑,進(jìn)行膜蛋白的提取和純化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果,得到了純度較高的nicastrin蛋白,并進(jìn)行體外去糖基化實(shí)驗(yàn),其他組分和全酶復(fù)合物經(jīng)過分步純化后含量較低。這些結(jié)果為下一步各亞基間相互作用研究,全酶復(fù)合物的結(jié)構(gòu)研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Alzheimer's disease (Alzheimer's disease,AD) is a chronic and fatal neurodegenerative disease, which mostly occurs in the elderly, but early onset AD, is also associated with genetic factors. The main pathological features of amyloid- 尾 -amyloid protein (amyloid- 尾 protein,A 尾) are senile plaques and neurofibrillar tangles, resulting in neuronal damage. The formation of A 尾 is related to three secretory enzymes, 緯 -secretase is considered to be its rate-limiting enzyme, and 尾 -amyloid precursor protein (amyloid- 尾 precursor protein,APP) is shredded by 緯 -secretase to produce A 尾 40 / A 尾 42. Therefore, it is important to study the structure of 緯 -secretase, which is an intramembrane cleavage protease with 19 transmembrane regions, to reveal the working mechanism of 緯 -secretase and to design drug molecules for AD. It consists of four subunits, presenilin (PS) nicastrin (NCT), PEN2 and Aph1a. In this study, the insect baculovirus expression system and mammalian expression system were used to express the four components and the whole enzyme complex. Because of the hydrophobicity of membrane protein, it is also the key point of this study to select suitable dissolving membrane components of scale removal agent. After screening, the best scale removal agent is selected to extract and purify membrane protein. The results showed that the high purity nicastrin protein was obtained and the content of the other components and the whole enzyme complex was lower after purification in vitro. These results lay a foundation for the further study of the interaction between subunits and the structure of the whole enzyme complex.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16

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本文編號：2211840