【摘要】：背景抑郁癥是一種嚴(yán)重的具有高發(fā)病率和死亡率的復(fù)雜性精神障礙,世界衛(wèi)生組織發(fā)文稱(chēng)全球抑郁癥患者數(shù)已達(dá)3.22億。到目前為止,已被報(bào)道的發(fā)病機(jī)制包括HPA軸障礙,單胺能和GABA能神經(jīng)遞質(zhì)紊亂,以及BDNF異常表達(dá)等學(xué)說(shuō)。盡管如此,抑郁癥的發(fā)病機(jī)制仍然是復(fù)雜和未知的。因此,積極尋找抑郁癥的發(fā)病機(jī)制至關(guān)重要。過(guò)去研究發(fā)現(xiàn)谷氨酸能遞質(zhì)在神經(jīng)精神疾病的研究方面具有重要的作用,值得考慮成為揭示新的抑郁癥發(fā)病機(jī)制和用藥靶點(diǎn)的新方向。前額葉是一個(gè)調(diào)節(jié)情緒,記憶和認(rèn)知的關(guān)鍵神經(jīng)腦區(qū),已參與抑郁癥發(fā)病機(jī)理研究數(shù)十年。雖然既往有研究采用普篩代謝物在抑郁癥中測(cè)量神經(jīng)遞質(zhì)的改變,但是上述非定量分析方法不能準(zhǔn)確量化代謝過(guò)程中的變化。為了克服這個(gè)問(wèn)題,我們采用LC-MS/MS方法定量檢測(cè)了三條與抑郁癥高度相關(guān)的代謝通路中的25個(gè)關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì)。目的基于小鼠社會(huì)挫敗模型模擬抑郁癥表型,采用LC-MS/MS方法,在前額葉皮質(zhì)中定量檢測(cè)色氨酸通路,GABA通路和兒茶酚胺通路三條通路的關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì)。并進(jìn)一步對(duì)差異的代謝物質(zhì)進(jìn)行相關(guān)機(jī)制驗(yàn)證和探討。方法1.構(gòu)建小鼠社會(huì)挫敗抑郁模型,對(duì)其行為學(xué)進(jìn)行評(píng)估,根據(jù)社會(huì)交互比值將挫敗造模后的老鼠分為抑郁組,抵抗組和對(duì)照組。2.取抑郁組,抵抗組和對(duì)照組三組小鼠各10只的前額葉組織進(jìn)行LC-MS/MS檢測(cè)分析,分析物質(zhì)為色氨酸通路,GABA通路和兒茶酚胺通路三條通路的關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì)。3.根據(jù)LC-MS/MS結(jié)果選取差異性遞質(zhì)谷氨酸進(jìn)行該遞質(zhì)的關(guān)鍵酶,轉(zhuǎn)運(yùn)體和受體進(jìn)行RT-q PCR和Western Blotting的驗(yàn)證。結(jié)果1.應(yīng)用社會(huì)交互試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)挫敗小鼠的抑郁和抵抗表型。13只(46.4%)小鼠表現(xiàn)為抑郁抵抗表型。抑郁小鼠的SI值低于對(duì)照組和抵抗組,抵抗組的SI值顯著地高于對(duì)照組和抑郁組。2.在抑郁和抵抗組中谷氨酸水平顯著降低,L-DOPA和VMA顯示抑郁組比對(duì)照組和抵抗組顯著增加。3.谷氨酸代謝通路驗(yàn)證,在基因表達(dá)水平Glul,Gad1,Gad2和m Glu R1的m RNA表達(dá)在CSDS組中與對(duì)照組相比顯著改變。在蛋白質(zhì)水平,與對(duì)照組相比在CSDS小鼠中Glu A1有改變,而在EAAT2和Glu1中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著的改變。結(jié)論研究結(jié)果表明興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的代謝途徑對(duì)社會(huì)挫敗模型具有重要的影響。本實(shí)驗(yàn)中的定量代謝組學(xué)檢測(cè)揭示了在不同表型中谷氨酸,L-DOPA和VMA水平的顯著變化。其檢測(cè)結(jié)果中谷氨酸的改變與該蛋白代謝通路中基因和蛋白質(zhì)的分子水平相關(guān)。雖然需要進(jìn)一步的研究確認(rèn)這些發(fā)現(xiàn),關(guān)鍵谷氨酸能遞質(zhì)的調(diào)控可能揭示產(chǎn)生抑郁障礙的藥理應(yīng)用,并且可以幫助找到更多幫助這種疾病的診斷工具及治療藥物靶點(diǎn)。
[Abstract]:Background Depression is a serious complex mental disorder with high morbidity and mortality. The World Health Organization (WHO) reports that the number of depression patients in the world has reached 322 million. So far, the pathogenesis has been reported including HPA axis disorders, monoaminergic and GABA neurotransmitter disorders, and BDNF abnormal expression theory. Nevertheless, the pathogenesis of depression remains complex and unknown. Therefore, it is very important to actively search for the pathogenesis of depression. Previous studies have found that glutaminergic transmitters play an important role in the study of neuropsychiatric disorders, which is worthy of consideration as a new direction to reveal the pathogenesis of depression and drug targets. The prefrontal lobe, a key neurobrain region that regulates mood, memory and cognition, has been involved in the pathogenesis of depression for decades. Although previous studies have used screening metabolites to measure neurotransmitter changes in depression, the above non-quantitative methods cannot accurately quantify the changes in metabolic processes. To overcome this problem, we used the LC-MS / MS method to quantitatively detect 25 key neurotransmitters in three highly related metabolic pathways for depression. Objective based on the social frustration model of mice, the key neurotransmitters of the tryptophan pathway, GABA pathway and catecholamine pathway, were quantitatively detected by LC-MS / MS method in the prefrontal cortex. Furthermore, the related mechanism of different metabolites was verified and discussed. Method 1. The model of social frustration depression in mice was established, and its behavior was evaluated. The mice were divided into depression group, resistance group and control group according to the social interaction ratio. 2. The prefrontal lobe tissues of 10 mice in depression group, resistance group and control group were detected by LC-MS / MS. The results showed that the substance was the key neurotransmitter of the three pathways of tryptophan pathway, GABA pathway and catecholamine pathway. According to the LC-MS / MS results, the differential transporter glutamate was selected to perform the key enzyme, transporter and receptor for RT-Q PCR and Western blotting. Result 1. Social interaction test was used to evaluate the depression and resistance phenotype of thwarted mice. 13 (46.4%) mice showed depression resistance phenotype. The SI value of depression mice was lower than that of control group and resistance group, and the SI value of resistance group was significantly higher than that of control group and depression group. The levels of glutamate in depression and resistance group were significantly lower than those in control group and resistance group. The levels of L-DOPA and VMA in depression group were significantly higher than those in control group and resistance group. Glutamate metabolic pathway confirmed that the mRNA expression of Glulus Gad1Cad 2 and mGlu R1 in CSDS group was significantly different from that in the control group at the gene expression level. At protein level Glu A1 was changed in CSDS mice compared with control group but no significant change was found in EAAT2 and Glu1. Conclusion the results suggest that the metabolic pathway of excitatory neurotransmitter glutamate plays an important role in social frustration model. Quantitative metabonomics in this study revealed significant changes in L-DOPA and VMA levels in different phenotypes. The changes of glutamate were related to the molecular level of gene and protein in the protein metabolic pathway. While further research is needed to confirm these findings, the regulation of key glutamate transmitters may reveal the pharmacological application of depressive disorders and may help to identify more diagnostic tools and therapeutic targets for the disease.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R749.4

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本文編號(hào)：2125617