本文選題：活化素A + 可卡因　； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：毒品泛濫嚴(yán)重威脅著人們的身心健康和社會的安全。毒品成癮(drug addiction)是患者對藥物產(chǎn)生了生理上和心理上的依賴,這種依賴感會促使患者不擇手段、不計后果地強(qiáng)制獲取、使用某種毒品。一旦戒斷后,生理上和心理上的依賴感得不到滿足,就會產(chǎn)生一系列戒斷癥狀。焦慮和抑郁是毒品戒斷后容易出現(xiàn)的癥狀,其水平的高低反映了戒斷癥狀的嚴(yán)重程度以及對毒品的渴求程度。嚴(yán)重的焦慮和抑郁會促使患者不擇手段、不計后果地獲取毒品,對自身造成傷害,甚至自殺。因此,開展毒品戒斷后情感障礙的研究有重要的科學(xué)意義。活化素A(Activin A)是轉(zhuǎn)化生長因子p超家族(TGFβ superfamily)中重要的成員之一,現(xiàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其在生物體中具有許多重要的作用�；罨谹主要促進(jìn)卵泡刺激素(FSH)的生物合成和分泌,同時還參與細(xì)胞增殖、分化、代謝、免疫反應(yīng)、組織修復(fù)、神經(jīng)保護(hù)以及內(nèi)分泌功能。有趣的是,研究發(fā)現(xiàn)活化素A能夠減輕慢性電驚厥刺激以及基因敲除的動物模型的焦慮和抑郁水平,對其相關(guān)機(jī)制研究認(rèn)為是活化素A促進(jìn)海馬區(qū)神經(jīng)再生(neurogenesis)而發(fā)揮抗焦慮或抑郁的作用。大腦海馬區(qū)神經(jīng)可塑性變化與焦慮和抑郁密切相關(guān)。海馬是情緒整合和學(xué)習(xí)記憶中樞,參與調(diào)節(jié)焦慮和抑郁等情感障礙。焦慮和抑郁的發(fā)生發(fā)展,經(jīng)常伴隨著海馬神經(jīng)可塑性變化。腦部的神經(jīng)環(huán)路和神經(jīng)連接終生都處于對內(nèi)外刺激產(chǎn)生重組和修飾的適應(yīng)性變化過程,這種過程叫神經(jīng)可塑性,即腦接受信息并對相同或相似的刺激做出適應(yīng)性反應(yīng)的基本過程。具體來說為神經(jīng)元之間通過突觸進(jìn)行信息傳遞和處理的能力是可以變化的,即具有可塑性。神經(jīng)可塑性使得腦組織能夠像其它組織如皮膚、肝臟等具有自我修復(fù)功能,對于個體在不同的內(nèi)外環(huán)境中保持正常的功能非常重要。然而,神經(jīng)可塑并非在任何情況下都是有利的�？伤苄援惓䦟�(dǎo)致神經(jīng)元反應(yīng)產(chǎn)生適應(yīng)不良及出現(xiàn)異常狀態(tài)。比如,不良的或長時間的刺激會改變使神經(jīng)發(fā)生不良的可塑性變化,引起海馬樹突萎縮、興奮性突觸缺失,從而引起情感障礙。神經(jīng)再生(neurogenesis)是神經(jīng)干細(xì)胞或神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖(proliferation)、遷移(migration)、分化(differentiation)、功能整合的過程,是腦區(qū)神經(jīng)可塑性變化的表現(xiàn)形式。神經(jīng)再生被認(rèn)為部分參與了焦慮和抑郁癥狀的發(fā)生,促進(jìn)神經(jīng)再生能夠改善焦慮和抑郁癥狀,具有一定的治療作用。許多抗焦慮和抑郁作用的藥物能夠促進(jìn)海馬齒狀回(dentate gyrus, DG)神經(jīng)再生,拮抗海馬區(qū)發(fā)生的不良神經(jīng)可塑性變化,使各種刺激誘發(fā)焦慮和抑郁癥狀得到緩解絲裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase, MAPK)通路是真核生物信號傳遞中非常重要的信號通路,傳遞胞外信號到胞內(nèi)引起細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng),在多種不同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中充當(dāng)一種共同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)成份,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、遷移、存活、凋亡、應(yīng)激、炎癥等。其中ERK,JNK, P38是三條重要的MAPK信號通路,其中ERK1/2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控細(xì)胞增殖、生長和分化�？煽ㄒ蚪鋽�24小時-7天后,動物出現(xiàn)明顯的焦慮和抑郁癥狀,但相關(guān)機(jī)制與治療尚不明了�；诨罨谹在慢性電驚厥刺激以及基因敲除的焦慮和抑郁動物模型中的作用,及活化素A對海馬區(qū)神經(jīng)再生的促進(jìn)作用,本研究提出如下科學(xué)問題：1、活化素A是否降低可卡因戒斷誘導(dǎo)的焦慮和抑郁水平?2、可卡因戒斷過程中,活化素A是否促進(jìn)海馬神經(jīng)再生?3、可卡因戒斷過程中,活化素A是否通過MAPK通路促進(jìn)海馬神經(jīng)再生發(fā)揮抗焦慮和抑郁的作用?本實(shí)驗(yàn)昆明小鼠共分為四組：①Saline+PBS組：②Saline+ActivinA組；③Cocaine+PBS組：④ Cocaine+Activin A組。③④昆明小鼠連續(xù)注射可卡因(Cocaine) 20mg/kg.d,①②組昆明小鼠連續(xù)注射等量的生理鹽水(Saline),四組連續(xù)注射14天。給藥第8天時候,雙側(cè)大腦安放留置針,針孔對著海馬齒狀回(DG)。立體定位坐標(biāo)點(diǎn)是前囪后2.0mm,左右徑±1.5mm,硬膜下1.8mm。連續(xù)注射14天,戒斷48小時,檢測小鼠焦慮和抑郁指標(biāo)。進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)時,按照如下分配小鼠：①Saline+PBS組9只；②Saline+ActivinA組9只：③Cocaine+PBS組10只；④Cocaine+Activin A組10只。小鼠戒斷48小時后分別給①③組小鼠大腦雙側(cè)海馬區(qū)注射lul PBS, ②④組昆明小鼠大腦雙側(cè)海馬區(qū)注射50ug/ml的活化素A (Activin A) 1 ul。曠場實(shí)驗(yàn)(Open field test)、高架十字迷宮(Elevate plus maze)檢測焦慮水平,懸尾實(shí)驗(yàn)(Tail suspension test)、強(qiáng)迫游泳(Forced swimming test)檢測抑郁水平。曠場試驗(yàn)記錄中央路程(center-distance)、中央?yún)^(qū)域進(jìn)入次數(shù)(center-entries),中央?yún)^(qū),域停留的時間(center-time),高架十字迷宮記錄開臂進(jìn)入次數(shù)(open arm-entries),開臂停留的時間(open arm-time),懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳都記錄小鼠不動時間。(immobility-time)。進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)時,按照如下分配小鼠①Saline+PBS組5只；②Saline+ActivinA組5只；③Cocaine+PBS組 5只；④Cocaine+Activin A組5只。小鼠戒斷48小時后分別給①③昆明小鼠大腦雙側(cè)海馬區(qū)注射lul PBS,②④昆明小鼠大腦雙側(cè)海馬區(qū)注射50ug/ml的活化素A (Activin A) 1ul,-天一次,連續(xù)兩天。同時四組小鼠均腹腔注射BrdU200mg/kg,12小時一次,連續(xù)注射BrdU三天。進(jìn)行western blot實(shí)驗(yàn)時,按照如下分配小鼠①Saline+PBS組4只；②Saline+ActivinA組4只；③Cocaine+PBS組4只④Cocaine+Activin A組4只。小鼠戒斷48小時后分別給①③昆明小鼠大腦單側(cè)海馬區(qū)立體定位注射lul PBS,②④昆明小鼠大腦單側(cè)海馬區(qū)立體定位注射50ug/ml的活化素A(ActivinA)1ul。然后在30min后解剖取材。western blot實(shí)驗(yàn)檢測MAPK通路中ERK在30min的磷酸化水平。結(jié)果：1、曠場實(shí)驗(yàn)：中央?yún)^(qū)域停留時間(center-time)中,可卡因組(Cocaine+PBS組)比生理鹽水組(Saline+PBS組)在中央?yún)^(qū)域停留時間顯著降低(p0.05)。Activin A治療組(Cocaine+Activin A組)比可卡因組在中央?yún)^(qū)域停留時間顯著增加。而單獨(dú)Activin A組與生理鹽水組無顯著性差異(P0.05)。中央路程(center-distance)和中央?yún)^(qū)域進(jìn)入次數(shù)(center-entries)中,可卡因組(Cocaine+PBS組)與生理鹽水組(Saline+PBS組)、Activin A治療組(Cocaine+Activin A組)與可卡因組以及單獨(dú)Activin A組與生理鹽水組之間均無顯著性差異(p0.05)。2.高架十字迷宮：開臂進(jìn)入次數(shù)(open arm-entries)指標(biāo)顯示,開臂進(jìn)入次數(shù)(open arm-entries)指標(biāo)顯示,可卡因組(Cocaine+PBS組)比生理鹽水組(Saline+PBS組)開臂進(jìn)入次數(shù)顯著降低(p0.05)。Activin A治療組(Cocaine+Activin A組)比可卡因組開臂進(jìn)入次數(shù)顯著增加。而單獨(dú)Activin A組與生理鹽水組無顯著性差異(P0.05)。開臂停留的時間(open arm-time)顯示,可卡因組(Cocaine+PBS組)比生理鹽水組(Saline+PBS組)開臂停留的時間顯著減少(p0.05)。Activin A治療組(Cocaine+Activin A組)比可卡因組開臂停留的時間顯著延長。而單獨(dú)Activin A組與生理鹽水組無顯著性差異(P0.05)。3.懸尾實(shí)驗(yàn)：不動時間(immobility-time)顯示,可卡因組(Cocaine+PBS組)比生理鹽水組(Saline+PBS組)不動時間顯著增高(p0.05)。Activin A治療組(Cocaine+Activin A組)比可卡因組不動時間顯著減少。而單獨(dú)Activin A組與生理鹽水組無顯著性差異(P0.05)。4.強(qiáng)迫游泳：不動時間(immobility-time)顯示可卡因組(Cocaine+PBS組)比生理鹽水組(Saline+PBS組)不動時間顯著增高(p0.05)。Activin A治療組(Cocaine+Activin A組)比可卡因組不動時間顯著減少。而單獨(dú)Activin A組與生理鹽水組無顯著性差異(P0.05)。5.BrdU標(biāo)記的免疫組化：結(jié)果顯示,與生理鹽水組(Saline+PBS組)相比,可卡因組(Cocaine+PBS組)海馬DG區(qū)BrdU陽性細(xì)胞總數(shù)明顯減少(P0.05)。Activin A治療組(Cocaine+Activin A組)比可卡因組海馬DG區(qū)BrdU陽性細(xì)胞總數(shù)顯著增加。而單獨(dú)Activin A組與生理鹽水組無顯著性差異(P0.05)。6. BrdU/Dcx雙標(biāo)免疫熒光：結(jié)果顯示與生理鹽水組(Saline+PBS組)相比,可卡因組(Cocaine+PBS組)海馬DG區(qū)BrdU/Dcx P日性細(xì)胞總數(shù)明顯減少(P0.05)。Activin A治療組(Cocaine+Activin A組)比可卡因組海馬DG區(qū)BrdU/Dcx陽性細(xì)胞總數(shù)顯著增加。而單獨(dú)Activin A組與生理鹽水組無顯著性差異(P0.05)。7. Western blot:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ERK通路中,給予活化素A30min后,Activin A治療組(Cocaine+Activin A組)比可卡因組ERK磷酸化水平顯著增高(P0.05)�？煽ㄒ蚪M(Cocaine+PBS組)與生理鹽水組(Saline+PBS組)、 單獨(dú)Activin A組與生理鹽水組無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論：1、活化素A能夠降低昆明小鼠可卡因戒斷誘導(dǎo)的焦慮和抑郁水平；2、可卡因戒斷能夠抑制小鼠海馬齒狀回的神經(jīng)再生,活化素A能夠阻斷可卡因戒斷對小鼠海馬齒狀回神經(jīng)再生的抑制作用,降低可卡因戒斷誘導(dǎo)的焦慮和抑郁水平；3、活化素A能通過提高海馬齒狀回區(qū)ERK磷酸化水平促進(jìn)可卡因戒斷后小鼠海馬齒狀回神經(jīng)再生。
[Abstract]:Drug addiction is one of the most important factors in the regulation of neurogenesis in the hippocampus . It is found that activin A is an important role in the regulation of neurogenesis in the hippocampus . In this study , the effects of activin A on cell proliferation , differentiation , migration , survival , apoptosis , stress , inflammation , etc .
( 3 ) Cocaine + PBS group : ( 4 ) Cocaine + Activin A group . 鈶，

本文編號：2077392