發(fā)布時間：2018-05-27 02:00

  本文選題：血管性癡呆 + 慢性腦低灌注　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:血管性癡呆(Vascular dementia,VD)是指由一系列腦血管因素引起腦組織損害而導(dǎo)致的以認知功能減退為特征的一組臨床綜合征。統(tǒng)計資料顯示,VD已成為繼阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)后第二大常見的癡呆類型。而慢性腦低灌注(Chronic cerebral hypoperfusion,CCH)為VD的主要病因之一,其發(fā)病機制尚未完全明確,缺乏有效的治療策略。同時,最近的研究發(fā)現(xiàn),在CCH過程中存在鐵代謝功能的紊亂。依達拉奉作為一種自由基清除劑,具有抑制CCH所致的氧化應(yīng)激損傷的作用,但是對于其是否可以改善大鼠的認知功能和鐵代謝紊亂還不十分清楚,其在鐵代謝功能紊亂中的作用機制尚未闡明。本實驗旨在觀察依達拉奉對VD大鼠認知功能和氧化應(yīng)激損傷的改善作用,并進一步探討其對鐵含量及鐵轉(zhuǎn)運相關(guān)因子的影響。方法:選取3月齡雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠為研究對象,體重在250-300g。采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎(Bilateral common carotid arteries occlusion,BCCAO)的方法建立CCH致VD大鼠模型。將SD大鼠隨機分為4組,即假手術(shù)組(Sham組),模型組(Vehicle組),依達拉奉低劑量組(Edaravone3.0組),依達拉奉高劑量組(Edaravone6.0組)。假手術(shù)組和模型組給予3.0mg/kg的生理鹽水日二次腹腔注射,依達拉奉低劑量組和依達拉奉高劑量組分別給予3.0mg/kg和6.0mg/kg依達拉奉日二次腹腔注射,術(shù)后連續(xù)應(yīng)用28天。28天后通過Morris水迷宮(Morris water maze,MWM)進行行為學(xué)測試,包含定位航行實驗(Place navigation test)和空間探索實驗(Spatial probe test),測定4組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。測試結(jié)束后,應(yīng)用尼氏染色(Nissl’s staining)觀察4組大鼠海馬組織的形態(tài)學(xué)變化;使用生物化學(xué)的方法檢測4組大鼠海馬組織的活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)的變化;采用電感耦合等離子質(zhì)譜(Inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)法檢測鐵含量的變化;應(yīng)用免疫印跡(Western blot)法觀察二價金屬轉(zhuǎn)運蛋白1(Divalent metal transport 1,DMT1)和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1(Transferrin receptor 1,Tf R1)的改變;應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白1(Ferroportin 1,Fpn1)的變化;采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法觀察Fpn1 m RNA和鐵調(diào)素(Hepcidin)m RNA的變化。結(jié)果:1行為學(xué)測試結(jié)果1.1定位航行實驗:4組大鼠的逃避潛伏期均隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加而逐漸縮短(F(4,144)=306.60,P0.01);從訓(xùn)練的第二天開始,與Sham組大鼠相比,Vehicle組大鼠的逃避潛伏期明顯延長(P0.01);與Vehicle組大鼠相比,依達拉奉治療組大鼠的逃避潛伏期明顯縮短(P0.05)。1.2空間探索實驗:與Sham組大鼠相比,Vehicle組大鼠在目標象限停留時間百分比明顯減少(P0.01);與Vehicle組大鼠相比,Edaravone3.0和Edaravone6.0組大鼠在目標象限停留時間百分比明顯延長(P0.05,P0.01)。2尼氏染色結(jié)果尼氏染色結(jié)果顯示Sham組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列緊密,神經(jīng)細胞形態(tài)正常,結(jié)構(gòu)完整,核仁飽滿、清晰。與Sham組大鼠相比,Vehicle組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷明顯,神經(jīng)細胞排列疏松,可見部分丟失,胞核固縮,胞漿染色較淺。經(jīng)過依達拉奉治療后,這些形態(tài)學(xué)改變被抑制。3 ROS含量檢測結(jié)果與Sham組大鼠相比,Vehicle組大鼠海馬組織ROS含量明顯增加(P0.01);經(jīng)依達拉奉干預(yù)后,與Vehicle組大鼠相比,治療組大鼠ROS含量明顯降低(P0.01)。4鐵含量檢測結(jié)果Vehicle組大鼠海馬鐵含量與Sham組大鼠相比明顯升高(P0.01)。與Vehicle組大鼠相比,Edaravone3.0組大鼠海馬鐵含量雖然有所降低,但是兩組之間沒有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。Edaravone6.0組與Vehicle相比,海馬鐵含量明顯降低(P0.01)。Edaravone3.0和Edaravone6.0組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。5 Western blot檢測結(jié)果5.1 VD大鼠海馬組織DMT1+IRE、DMT1-IRE、Tf R1蛋白的表達與Sham組大鼠相比,Vehicle組大鼠海馬組織DMT1+IRE的表達明顯升高(P0.05)。但是,四組DMT1-IRE的表達無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。除此之外,與Sham組相比,CCH損傷明顯增加了Tf R1的表達水平(P0.01)。5.2不同劑量的依達拉奉治療對VD大鼠海馬組織DMT1+IRE、DMT1-IRE、Tf R1蛋白表達的影響與Vehicle組大鼠相比,依達拉奉治療組大鼠海馬組織DMT1+IRE的表達明顯降低(低劑量組P0.01,高劑量組P0.05)。同時,Edaravone3.0和Edaravone6.0治療明顯逆轉(zhuǎn)了Vehicle組大鼠Tf R1蛋白的升高(P0.05)。但是,對于上述幾種蛋白的表達,依達拉奉治療組與Vehicle組之間沒有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。6 ELISA檢測結(jié)果統(tǒng)計分析顯示四組大鼠海馬組織Fpn1的表達存在明顯統(tǒng)計學(xué)差異。與Sham組大鼠相比,Vehicle組大鼠海馬組織Fpn1的表達明顯降低(P0.05)。Edaravone6.0組明顯抑制了Fpn1的降低(P0.05)。但是,Edaravone3.0和Edaravone6.0組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。7 RT-PCR檢測結(jié)果Vehicle組大鼠海馬組織hepcidin m RNA的表達比Sham組大鼠明顯升高(P0.05)。Edaravone6.0組治療顯著抑制BCCAO后hepcidin m RNA水平的上調(diào)(P0.05)。但是,四組大鼠Fpn1 m RNA的表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1 BCCAO是一種理想的大鼠VD模型。2依達拉奉作為抗氧化劑,可以抑制VD大鼠海馬組織氧化損傷以及改善大鼠認知功能的作用。3依達拉奉可有效改善VD大鼠的鐵代謝紊亂,其作用機制可能與其調(diào)節(jié)鐵轉(zhuǎn)運相關(guān)因子有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R749.13

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本文編號：1939904