本文選題：CD200-CD200R + 小膠質(zhì)細(xì)胞��； 參考：《蘇州大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：小膠質(zhì)細(xì)胞（microglia，MI）是腦內(nèi)的免疫細(xì)胞，其功能狀態(tài)與微環(huán)境相關(guān)。CD200-CD200R途徑被認(rèn)為是維持小膠質(zhì)細(xì)胞靜息狀態(tài)的重要機(jī)制之一。在老齡腦中，神經(jīng)元跨膜糖蛋白CD200表達(dá)減少，由于CD200-CD200R途徑免疫抑制信號(hào)的減弱，在β-淀粉樣蛋白（amyloid β-peptide，Aβ）異常聚集時(shí)，MI易于過(guò)度激活而產(chǎn)生多種炎性因子、趨化因子，產(chǎn)生慢性炎癥反應(yīng)，促進(jìn)神經(jīng)元的丟失。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Mesenchymal Stem Cells, BMSCs)是具有多向分化潛能的干細(xì)胞，移植BMSCs是阿爾茨海默病的潛在治療途徑之一。CD200被證實(shí)表達(dá)在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜上。由此設(shè)想，抑制性免疫調(diào)控分子CD200是BMSCs治療AD的作用機(jī)制之一。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)原代培養(yǎng)得到人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，觀察BMSCs上的CD200及MI的CD200R表達(dá)，以及加入抗CD200抗體能否逆轉(zhuǎn)BMSCs對(duì)Aβ激活的MI的抑制，以期探討B(tài)MSCs對(duì)于體外Aβ作用的小膠質(zhì)細(xì)胞活性調(diào)控可能的新機(jī)制。 方法：原代分離培養(yǎng)、純化小膠質(zhì)細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，，觀察其形態(tài)，免疫熒光鑒定BMSCs上CD200、MI上CD200R的表達(dá)，用Aβ激活小膠質(zhì)細(xì)胞，進(jìn)行BMSCs和MI的體外共培養(yǎng)，分為MI組、BMSCs組、MI+Aβ組、MI+BMSCs組、MI+Aβ+BMSCs組、MI+Aβ+BMSCs+抗CD200抗體組，用ELISA法檢測(cè)各組培養(yǎng)48小時(shí)后上清液中炎性因子腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量。所有統(tǒng)計(jì)分析均用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，P0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：培養(yǎng)的MI表達(dá)CD200R，BMSCs表達(dá)CD200。Aβ作用后的小膠質(zhì)細(xì)胞呈阿米巴樣，產(chǎn)生的TNF-α、IL-6、NO量較靜息狀態(tài)時(shí)增加（P0.05），說(shuō)明體外Aβ作用后小膠質(zhì)細(xì)胞活化，BMSCs與活化的MI組共培養(yǎng)后TNF-α、IL-6、NO減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）,加入抗CD200抗體組后小膠質(zhì)細(xì)胞活化形態(tài)、炎性因子含量有所改變，較Aβ活化的MI組低，但較BMSCs和活化的MI組高，差別兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。 結(jié)論：BMSCs可通過(guò)CD200-CD200R接觸抑制體外培養(yǎng)的Aβ激活的小膠質(zhì)細(xì)胞的過(guò)度活化。
[Abstract]:Aim: microglia Mi) is an immune cell in the brain. Its functional state is related to microenvironment. CD200-CD200R pathway is considered to be one of the important mechanisms to maintain the resting state of microglia cells. In the aged brain, the expression of transmembrane glycoprotein (CD200) in neurons decreased. Due to the decrease of CD200-CD200R pathway immunosuppressive signal, MI was prone to over-activate during the abnormal aggregation of amyloid 尾 -peptideA 尾 in 尾 -amyloid, resulting in a variety of inflammatory factors, chemokines, and chemokines. Chronic inflammatory response is produced to promote the loss of neurons. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) are stem cells with multiple differentiation potential. Transplantation of BMSCs is one of the potential therapeutic pathways for Alzheimer's disease. CD200 has been confirmed to be expressed on the membrane of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). It is assumed that the inhibitory immunomodulatory molecule CD200 is one of the mechanisms of BMSCs in the treatment of AD. In this study, human bone marrow mesenchymal stem cells and microglial cells were obtained by primary culture to observe the CD200R expression of CD200 and MI on BMSCs, and whether the addition of anti-CD200 antibody could reverse the inhibition of A 尾 -activated MI induced by BMSCs. The aim of this study was to explore the possible mechanism of microglial activity regulation by BMSCs on A 尾 in vitro. Methods: microglial cells and bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured in primary culture, and their morphology was observed. The expression of CD200R on CD200mMI on BMSCs was identified by immunofluorescence. Microglia were activated by A 尾 and co-cultured with BMSCs and MI in vitro. BMSCs group was divided into MI A 尾 group and MI A 尾 BMSCs group. The contents of TNF- 偽 Tumor Necrosis Factor- 偽 TNF- 偽, interleukin-6 interleukin-6IL-6, nitric oxide (no) in the supernatant of each group were detected by ELISA method. All the statistical analyses were analyzed by SPSS16.0 statistical software. The difference was statistically significant (P 0.05). Results: the expression of CD200.A 尾 in microglial cells of cultured MI expressed CD200R- BMSCs was amoeba like, and the amount of TNF- 偽 IL-6 no produced was higher than that of P0.05in resting state, which indicated that the level of TNF- 偽 IL-6no decreased after microglial activation of BMSCs and activated MI co-cultured in vitro. The difference was statistically significant (P 0.05). The activation morphology of microglia and the content of inflammatory factors were changed after adding anti CD200 antibody, which was lower than that in MI group activated by A 尾, but higher than that in BMSCs group and activated MI group. The difference was statistically significant compared with that of BMSCs group and activated MI group (P 0.05). ConclusionBMSCs can inhibit the overexpression of A 尾 -activated microglia by CD200-CD200R contact.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.16

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1936508