本文選題：具有 + 潛在　； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文

【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,以記憶力減退、認知功能障礙為主要臨床癥狀,以腦內(nèi)β-淀粉樣多肽(p-amyloid peptide, Ap)沉積形成的纖維斑塊(即老年斑),并伴有細胞內(nèi)的神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangle, NFT)為主要病理改變。Aβ多肽有39-42個氨基酸,由β淀粉樣前體蛋白(APP)經(jīng)p-分泌酶和γ-分泌酶水解后產(chǎn)生的多肽。APP的裂解過程有二種途徑：①非淀粉樣途徑：APP經(jīng)α-分泌酶水解,產(chǎn)生非淀粉樣可溶小分子蛋白sAPPa和CTFa (C端片段),CTFa經(jīng)γ-分泌酶裂解產(chǎn)生3KD的小分子P3和APP胞內(nèi)區(qū)域的羧基末端(APP intracellular cytoplasmic domain, AICD),該途徑不形成Ap。②淀粉樣途徑： APP經(jīng)p-分泌酶裂解,產(chǎn)生可溶性sAPPβ和CTFβ, CTFβ經(jīng)γ-分泌酶裂解產(chǎn)生可聚集、具有神經(jīng)毒性的Ap。研究表明,Ap聚集和沉積形成的纖維斑塊可引發(fā)腦內(nèi)氧化應(yīng)激及炎癥等反應(yīng),導(dǎo)致神經(jīng)元的壞死和凋亡,最終可引起AD。目前國內(nèi)外用于治療AD的藥物主要為化學(xué)合成類藥物如膽堿酯酶抑制劑等,但其作用局限且治標不治本。中草藥的應(yīng)用布我國有著悠久的歷史,其對一些慢性疾病有很好療效且?guī)缀鯚o副作用等特點。近年來研究表明,中藥成分天麻素、黃芪總皂苷和芍藥苷具有抗氧化、增加腦血流量、改善記憶力、神經(jīng)保護等作用。但其是否對AD的治療具有特異性及其具體作用的途徑和相關(guān)機制尚不明確。為探討以上問題,本課題主要研究內(nèi)容為三種中藥成分天麻素、黃芪總皂苷和芍藥苷對阿爾茨海默病模型小鼠的藥效學(xué)作用,同時利用雙轉(zhuǎn)基因細胞模型研究其可能的作用途徑及相關(guān)機制。本課題研究內(nèi)容主要包括二個部分：1.三種中藥成分在轉(zhuǎn)基因模型鼠體內(nèi)抑制Ap斑塊的藥效學(xué)作用；2.三種中藥成分在體外抑制Ap的作用途徑及其相關(guān)機制。第一部分：三種中藥成分對AD轉(zhuǎn)基因模型鼠體內(nèi)的藥效學(xué)作用的研究目的：研究3種中藥成分(天麻素(GAS)、黃芪總皂苷(AST)、芍藥苷(PAE))對AD轉(zhuǎn)基因模型5XFAD鼠學(xué)習(xí)認知和記憶能力的影響和抑制腦內(nèi)Aβ斑塊的效果,并觀察3種中藥成分的干預(yù)是否對小鼠的生長發(fā)育有影響。方法：選用1.5月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠,隨機分為7組,另取同窩陰性小鼠作為正常對照,每組10只。 (1)陽性對照組(Tg)：轉(zhuǎn)基因陽性小鼠給予不含藥物的生理鹽水；(2)陰性對照組(Control):同窩陰性小鼠給予不含藥物的生理鹽水； (3)天麻素高劑量組(GAS-H)轉(zhuǎn)基因陽性小鼠給予含300mg/kg/d天麻素的生理鹽水(4)天麻素低劑量組(GAS-L):轉(zhuǎn)基因陽性小鼠給予含150mg/kg/d天麻素的生理鹽水(5)黃芪總皂苷高劑量組(AST-H):轉(zhuǎn)基因陽性小鼠給予含160mg/kg/d黃芪總皂苷的生理鹽水(6)黃芪總皂苷低劑量組(AST-L):轉(zhuǎn)基因陽性小鼠給予含80mg/kg/d黃芪總皂苷的生理鹽水(7)芍藥苷高劑量組(PAE-H):轉(zhuǎn)基因陽性小鼠給予含60mg/kg/d芍藥苷的生理鹽水(8)芍藥苷低劑量組(PAE-L):轉(zhuǎn)基因陽性小鼠給予含30mg/kg/d芍藥苷的生理鹽水。每周測量各組小鼠體重及監(jiān)測小鼠的日均飲水量,按照體重及日均飲水量調(diào)整給藥劑量。給藥4個月后,通過Morris水迷宮行為學(xué)實驗檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶及認知能力的變化；免疫組織化學(xué)染色法觀察腦組織內(nèi)Aβ斑塊的變化；ELISA法檢測小鼠腦組織勻漿中Aβ含量的水平；另外為評價藥物對小鼠的是否具有肝腎毒副作用,ELISA法檢測小鼠血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酐的變化及小鼠腦組織勻漿中IFN-γ和IL-4水平的變化。結(jié)果：1Morris水迷宮結(jié)果顯示,與陽性對照組(Tg)組相比,用藥各組小鼠平臺尋找時間明顯縮短,在原平臺象限停留時間明顯延長：第5天時,天麻素高劑量組(GAS-H)和低劑量組(GAS-L)平臺尋找時間分別縮短83.66%和46.72%(P0.01)；,黃芪總皂苷高劑量組(AST-H)和低劑量組(AST-L)平臺尋找時間分別縮短41.60%和23.78%(P0.01)；芍藥苷高劑量組(PAE-H)和低劑量組(PAE-L)平臺尋找時間分別縮短48.23%和29.31%(P0.01)；天麻素高劑量組(GAS-H)和低劑量組(GAS-L)在原目標象限停留時間分別延長2.28倍和1.83倍；黃芪總皂苷高劑量組(AST-H)和低劑量組(AST-L)在原目標象限停留時間分別延長1.88倍和1.38倍(P0.01)；芍藥苷高劑量組(PAE-H)和低劑量組(PAE-L)在原目標象限停留時間分別延長1.83倍和1.62倍(P0.01)。2.免疫組化結(jié)果顯示：5XFAD鼠的Tg組腦內(nèi)海馬和皮質(zhì)區(qū)可見明顯的大小不一、棕黃色的Ap斑塊沉積,呈彌漫分布。GAS和AST及PAE各組與№組相比,腦內(nèi)海馬和皮質(zhì)區(qū)Ap斑塊呈散在分布,斑塊體積和數(shù)目顯著減少、染色變淺。Control組腦內(nèi)未見Aβ斑塊。IPP軟件分析結(jié)果顯示：與陽性對照組相比,3種中藥成分均能夠降低模型小鼠腦部海馬區(qū)和皮層區(qū)Aβ斑塊陽性面積。在海馬區(qū),天麻素高劑量組(GAS-H)陽性面積降低最為顯著達70.13%；天麻素低劑量組(GAS-L)降低達39.25%(P0.01)；黃芪高劑量組(AST-H)和黃芪低劑量組(AST-L) Aβ斑塊陽性面積分別降低62.39%和31.51%(P0.05)；芍藥苷高劑量組(PAE-H)和芍藥苷低劑量組(PAE-L) Aβ斑塊陽性面積分別降低57.58%和30.52%(P0.05)。在皮層區(qū),天麻素高劑量組(GAS-H)降低最為顯著達80.96%；天麻素低劑量組(GAS-L)降低達36.67%；黃芪高劑量組(AST-H)和黃芪低劑量組(AST-L) Aβ斑塊陽性面積分別降低69.57%和37.90%(P0.01)；芍藥苷高劑量組(PAE-H)和芍藥苷低劑量組(PAE-L) Aβ斑塊陽性面積分別降低66.62%不口27.62%(P0.05)。3. ELISA檢測小鼠腦勻漿中Aβ含量的結(jié)果顯示,與Tg組腦勻漿Aβ的平均OD值相比,AST、GAS和PAE各組均有不同程度降低。其中,天麻素高劑量組(GAS-H)降低效果最為顯著達62.18%；天麻素低劑量組(GAS-L)降低達35.94%；黃芪高劑量組(AST-H)和黃芪低劑量組(AST-L)小鼠腦勻漿中Aβ分別降低51.58%和24.07%(P0.01)；芍藥苷高劑量組(PAE-H)和芍藥苷低劑量組(PAE-L)小鼠腦勻漿中Aβ分別降低51.02%和14.16%(P0.05)。4. ELISA法檢測小鼠腦組織勻漿中細胞因子水平的變化的結(jié)果顯示,用藥各組小鼠(天麻組小鼠、黃芪總皂苷組小鼠及芍藥苷組小鼠)與陽性對照組小鼠相比,其腦組織勻漿中IFN-γ和IL-4的含量均無明顯變化(P0.05)。5. ELISA法檢測小鼠血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酐的結(jié)果顯示,用藥各組小鼠(天麻組小鼠、黃芪總皂苷組小鼠及芍藥苷小鼠)與陽性對照組小鼠相比,其血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酐的含量均無明顯變化(P0.05)。6.測量各組小鼠的體重變化的結(jié)果顯示,在不同的時間點(1,2,3,4月),陰性對照小鼠,陽性對照小鼠及用藥各組小鼠的體重?zé)o明顯變化(P0.05)。第二部分：三種中藥成分抑制模型細胞中Ap的作用途徑及相關(guān)機制的研究目的：利用雙基因轉(zhuǎn)染細胞模型117細胞(過表達Ap和p-分泌酶)和146細胞(過表達Ap和γ-分泌酶),研究三種中藥成分天麻素、黃芪總皂苷和芍藥苷抑制Ap的作用機制。方法：天麻素、黃芪總皂苷和芍藥苷以不同的濃度(10、25、50、100μmol·L-1)作用于117模型細胞和146細胞,ELISA雙抗夾心法分別檢測細胞內(nèi)外Ap含量變化,Q-PCR法檢測117細胞BACE mRNA和146細胞PS1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平,Wsetern-blot法檢測p-分泌酶和γ-分泌酶蛋白水平的變化。同時,CCK-8試劑盒檢測三種中藥成分對細胞活力的影響,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況。結(jié)果：1. ELISA法檢測結(jié)果顯示,與未干預(yù)對照組相比,三種中藥成分天麻素、黃芪總皂苷、芍藥苷對117細胞模型和146細胞模型內(nèi)外Aβ水平均有降低,且降低效果呈藥物濃度依賴性。天麻素、黃芪總皂苷、芍藥苷抑制117細胞內(nèi)Ap最高分別達69.2%、64.8%和47.9%(P0.01),抑制117細胞外Ap最高分別達65.8%、67.8%和25.2%(P0.05)；天麻素、黃芪總皂苷、芍藥苷抑制146細胞內(nèi)Aβ最高分別達67.9%、82.6%和49.9%(P0.01),天麻素、黃芪總皂苷、芍藥苷抑制146細胞外Aβ最高分別達67.1%、65.4%和50.9%(P0.01)。2. Q-PCR檢測實驗結(jié)果顯示,天麻素對117細胞p-分泌酶轉(zhuǎn)錄水平有降低作用。與天麻素未干預(yù)對照組相比,經(jīng)天麻素處理24 h的117細胞,BACE mRNA轉(zhuǎn)錄水平降低,且降低效果呈濃度依賴性。其中,25μmol·L-1天麻素劑量組降低22.8%,50和100μmol·L-1天麻素劑量組分別降低30.7%和32.9%(P0.01)。未觀察到芍藥苷、黃芪總皂苷對117細胞BACE mRNA轉(zhuǎn)錄水平有影響；天麻素、黃芪總皂苷、芍藥苷三種中藥成分對146細胞內(nèi)γ-分泌酶轉(zhuǎn)錄水平均無影響。3. Western Blotting檢測實驗結(jié)果顯示,天麻素在25、50、100μmol·L-1濃度均可降低β-分泌酶蛋白的表達,且在50μmol·L-1時降低最明顯為47.9%(P0.01)。黃芪總皂苷、芍藥苷均對β-分泌酶蛋白的表達無影響。天麻素、黃芪總皂苷、芍藥苷均對γ-分泌酶蛋白表達均無影響。4.CCK-8法測定結(jié)果均顯示,天麻素、黃芪總皂苷和芍藥苷各自干預(yù)117細胞和146細胞24h后,各藥物干預(yù)組細胞活性相對于未干預(yù)對照組無明顯變化；且流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,天麻素、黃芪總皂苷和芍藥苷干預(yù)117細胞24h后,各干預(yù)組的凋亡率與未干預(yù)組相比,未有差異變化�？偨Y(jié)：長期以來對中藥治療AD是否具有特異性或特效性,如有特異性其作用途徑和作用機制是什么,一直都不清楚。本課題在這方面做了探索研究,初步結(jié)果顯示天麻素、黃芪總皂苷和芍藥苷對AD的治療均具有特異性,其作用途徑是通過抑制Ap產(chǎn)生并減少Ap斑塊形成,進而減少老年斑對神經(jīng)細胞的毒性作用,抑制AD的病程發(fā)展。其中天麻素的作用最顯著,其作用機制可能與抑制β-分泌酶的表達有關(guān)。
[Abstract]:In recent years , it has been shown that there are two ways to treat AD : ( 1 ) the effect of three traditional Chinese medicinal components gastrodin , total saponins of astragalus root and peony glycoside on Alzheimer ' s disease model mice .
2 . The effect of three traditional Chinese medicine components on learning cognition and memory ability of AD transgenic model mice was studied . The effects of three traditional Chinese medicine components ( gastrodin ( GAS ) , total saponin ( AST ) , and penonitin ( PAE ) on learning cognition and memory ability of AD transgenic mice were studied .
( 2 ) negative control group ( control ) : the same socket - negative mice were given no drug - containing physiological saline ;
( 3 ) Normal saline ( 4 ) gastrodin low - dose group ( GAS - L ) containing 300 mg / kg / day gastrodin was administered to transgenic male mice .
Immunohistochemical staining was used to observe the changes of A尾 plaque in brain tissue .
The level of A尾in brain homogenate was determined by ELISA .
The results were as follows : Compared with the positive control group ( Tg ) group , the results showed that the time of finding the platform was significantly shortened compared with that of the positive control group ( Tg ) group , and the residence time of the mice in the original platform was obviously prolonged : the time of finding time of the GAS - H and GAS - L platforms was shortened by 83.66 % and 46.72 % ( P0.01 ) .
The finding time of AST - H and AST - L was 41.60 % and 23.78 % respectively ( P0.01 ) .
The finding time of high - dose group ( PAE - H ) and low - dose group ( PAE - L ) was 48.23 % and 29.31 % ( P0.01 ) .
The residence time of GAS - H and GAS - L was 2.28 - fold and 1.83 - fold longer than those in low - dose group ( GAS - L ) .
In the high dose group ( AST - H ) and low - dose group ( AST - L ) , the retention time of AST - H and AST - L in the original target quadrant increased by 1 . 88 - fold and 1.38 - fold respectively ( P0.01 ) .
Compared with the positive control group , there was a significant decrease in the size and the number of plaques in the hippocampus and cortex of the brain , and the positive area of A尾plaques in the hippocampus and cortex area of the model mice was reduced .
The level of GAS - L decreased by 39.25 % ( P0.01 ) .
The positive rates of AST - H and AST - L were 62.39 % and 31.51 % , respectively ( P0.05 ) .
The positive area of PAE - H and PAE - L was 57.58 % and 30.52 % , respectively ( P0.05 ) .
The level of GAS - L decreased by 36.67 % .
The positive rates of AST - H and AST - L were 69.57 % and 37.90 % , respectively ( P0.01 ) .
The positive rates of PAE - H and PAE - L were 66.62 % and 27.62 % respectively ( P0.05 ) . The results showed that the levels of A尾in brain homogenate of mice showed that AST , GAS and PAE decreased in different degrees compared with the average OD value of the rat brain homogenate A 尾 . The results showed that the decrease of GAS - H in the high dose group ( GAS - H ) was the most significant ( 62 . 18 % ) .
The level of GAS - L decreased by 35.94 % .
In high dose group ( AST - H ) and low dose of Astragalus membranaceus ( AST - L ) , the levels of A尾 in brain homogenate decreased by 51.58 % and 24.07 % ( P0.01 ) .
In the high dose group ( PAE - H ) and low dose group ( PAE - L ) , the concentration of A尾 in brain homogenate decreased by 51.02 % and 14.16 % ( P0.05 ) . The results showed that the levels of IFN - 緯 and IL - 4 in brain homogenate of mice were not significantly higher than those in control group ( P0.05 ) . The results showed that there were no significant changes in the contents of glutamic oxalacetic transaminase , alanine aminotransferase and creatinine in serum of mice ( P0.05 ) . The results showed that , compared with the control group , the levels of A尾in 117 cell models and 146 cell models were significantly lower than those of untreated control group , and the results showed drug concentration - dependent . The maximum of Ap in 117 cells was 69.2 % , 64.8 % and 47.9 % ( P0.01 ) .
The highest levels of A尾in 146 cells were 67.9 % , 82.6 % and 49.9 % ( P0.01 ) , gastrodin , astragalus root total saponin , and paeonia were up to 67.1 % , 65.4 % and 50.9 % ( P0.01 ) respectively . Compared with the control group , the level of BACE mRNA transcription was decreased by 30 . 7 % and 32.9 % ( P0.01 ) .
There were no significant effects on the levels of 緯 - secreted enzymes in 146 cells . The results of Western Blotting test showed that the expression of 尾 - secreted enzyme was decreased at 25 , 50 and 100 渭mol 路 L - 1 , and the most obvious decrease was 47.9 % at 50 渭mol 路 L - 1 ( P0.01 ) .
The results showed that the effect of gastrodin , astragalus root saponins and penonidatin on AD treatment was not clear . The results showed that the effect of gastrodin , astragalus root total saponin and penonidatin on AD was not clear . The effect of gastrodin was most significant by inhibiting Ap production and reducing Ap plaque formation , and the mechanism of action of gastrodin could be related to the inhibition of 尾 - secretion .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄒衛(wèi)寧,鐘桂英;炮制對中藥成分的影響[J];黑龍江醫(yī)學(xué);1998年02期

2 任麗娟;王麗;文仲書;羅小祥;;抗結(jié)核中藥成分的研究[J];藥學(xué)實踐雜志;2009年01期

3 壽洲芳;炮制對中藥成分影響的研究概況[J];中草藥;2002年06期

4 趙宇新,李曼玲;蒸發(fā)光散射檢測器在中藥成分分析中的應(yīng)用[J];中國中藥雜志;2003年10期

5 葉明;樊永平;;中藥成分與復(fù)方防治實驗性自身免疫性腦脊髓炎的研究進展[J];北京中醫(yī)藥;2009年01期

6 楊黎青;;中藥成分與炮制更新的思考[J];光明中醫(yī);2007年10期

7 邱峰;;淺談中藥成分體內(nèi)代謝研究[J];國際藥學(xué)研究雜志;2010年05期

8 紀學(xué)慧;張華;;酶技術(shù)在中藥成分提取分離中的應(yīng)用[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2011年10期

9 劉春葉;苗延青;衛(wèi)引茂;楊轉(zhuǎn)轉(zhuǎn);;含羧基中藥成分熒光標記方法的建立及優(yōu)化[J];化學(xué)研究與應(yīng)用;2012年07期

10 張惠,李如廉;中藥成分在一些方劑煎制后的變化[J];中藥通報;1982年02期

相關(guān)會議論文 前6條

1 崔浩;曲建華;;中藥成分通過血-眼屏障能力值得探討[A];第五次全國創(chuàng)傷康復(fù)暨第七次全國運動療法學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

2 羅蓓;蒲小平;;具有神經(jīng)營養(yǎng)活性的中藥成分研究[A];第六次全國中西醫(yī)結(jié)合實驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會會議論文集[C];2002年

3 王德云;李祥瑞;徐立新;王玉英;胡元亮;;復(fù)方中藥成分與IL-2的免疫協(xié)同作用及對雞細胞因子表達的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2006學(xué)術(shù)年會論文集（上冊）[C];2006年

4 陳玉庫;邢玉娟;王德云;胡元亮;郭振環(huán);王軍敏;趙曉娜;蔡丙嚴;;中藥成分復(fù)方及其組分藥對新城疫苗免疫應(yīng)答的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(上冊)[C];2010年

5 盧超;徐列明;;抑制內(nèi)皮素誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細胞收縮的中藥成分篩選[A];第二十次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

6 梁僑麗;;中藥成分SsnB,一個具有強抗炎活性的選擇性TLR2和TLR4拮抗劑[A];中藥與天然藥高峰論壇暨第十二屆全國中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 日聞;日本回收含中藥成分的藥品[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

2 華迪康;哪種香皂適合你[N];中國老年報;2002年

3 王劍;糠尿病患者：別挑花了眼[N];保健時報;2006年

4 王先龍;洗藥浴好處多[N];中國醫(yī)藥報;2003年

5 朱玉;雞尾酒減肥法不是藥物堆砌[N];保健時報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 陳玉庫;幾種中藥成分及其復(fù)方抗病毒和增強免疫活性的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 周楠楠;具有潛在治療阿爾茨海默病作用的3種中藥成分的藥效學(xué)觀察及其機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

2 孔祥峰;中藥成分對細胞增殖、病毒感染和抗體生成的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

3 李海云;常用中藥成分對藥物代謝酶CYP3A4活性的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

4 胡立煒;中藥常用成分對藥物代謝酶CYP1A2活性的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 高薪;三種中藥成分的提取及其抗結(jié)核作用的初步研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 張英;六種中藥成分對細菌作用的微量量熱法研究[D];曲阜師范大學(xué);2006年

7 朱燃;對阿爾茨海默病有抑制作用的中藥成分篩選和相關(guān)機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

8 胡梅;幾種不同中藥成分體外抗病毒作用的活性研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

9 張軍哲;中藥成分CDP逆轉(zhuǎn)高甲基化狀態(tài)的GSTP1基因啟動子低轉(zhuǎn)錄活性的研究[D];四川大學(xué);2007年

10 吳明慧;幽門螺桿菌多重耐藥株的檢測和黃連素等中藥成分對其抑菌作用的體外實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

，

本文編號：1889941