本文選題：廣西巴馬小型豬 + 阿爾茨海默病�。� 參考：《廣西大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是繼心臟病、腫瘤、中風(fēng)之后,成為人類死亡的第四大死因,嚴(yán)重危害到老年人身體健康。研究發(fā)現(xiàn),載脂蛋白E(apolipoprotein E, ApoE)與AD高度相關(guān)。因此,本研究以廣西巴馬小型豬為研究對象,測定了ApoE在不同組織、不同年齡和大腦不同部位的表達模式；構(gòu)建ApoE真核表達載體并對其功能進行驗證,同時進行轉(zhuǎn)ApoE基因小鼠的生產(chǎn),為后續(xù)構(gòu)建廣西巴馬小型豬AD動物模型的研究奠定基礎(chǔ)。 根據(jù)GenBank公布的豬ApoE cDNA序列設(shè)計特異引物,利用RT-PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)分析廣西巴馬小型豬ApoE在心、脾、肝、腎、胰和腦等組織中的表達情況,并測定了ApoE在不同年齡(10,14,24,24月齡)豬腦組織中的表達模式。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ApoE在腦和胰腺中的表達最高；老年(24月齡)豬腦組織中ApoE的表達量高于其它年齡；免疫組化的結(jié)果顯示,ApoE在前腦皮質(zhì)的表達量高于海馬組織。 將ApoE cDNA序列克隆到pMD18-T載體,雙酶切并連接構(gòu)建ApoE真核表達載體pEGFP-C1-ApoE,利用PK15和PC12細胞對載體的功能進行了驗證。結(jié)果顯示,在兩種細胞中都檢測到綠色熒光,證明真核表達載體pEGFP-C1-ApoE在PK15和PC12細胞中均能正常表達目的蛋白。為了進一步驗證重組質(zhì)粒的功能,將質(zhì)粒注入小鼠睪丸,自然交配獲得57只F1代小鼠,PCR檢測獲得陽性小鼠2只,轉(zhuǎn)基因陽性率為3.5%。
[Abstract]:Alzheimer's disease (ADD) is the fourth leading cause of death after heart disease, cancer and stroke, which seriously endangers the health of the elderly. Apolipoprotein E(apolipoprotein E (ApoE) was found to be highly correlated with AD. Therefore, the expression patterns of ApoE in different tissues, different ages and different parts of brain were determined in Guangxi Bama miniature pig, and the eukaryotic expression vector of ApoE was constructed and its function was verified. At the same time, the production of transgenic mice with ApoE gene was carried out, which laid a foundation for further study on the construction of AD animal model of Guangxi Bama miniature pig. According to the porcine ApoE cDNA sequence published by GenBank, specific primers were designed to analyze the expression of ApoE in the heart, spleen, liver, kidney, pancreas and brain of Guangxi Bama mini-pig by RT-PCR reverse transcription PCR. The expression pattern of ApoE in the brain tissue of different ages (1014 ~ 24 ~ 24 months) was determined. The results showed that the expression of ApoE was the highest in the brain and pancreas, the expression of ApoE in the brain of the pig was higher than that in the other ages, and the expression of ApoE in the forebrain cortex was higher than that in the hippocampal tissue. The ApoE cDNA sequence was cloned into pMD18-T vector and ligated with two enzymes to construct ApoE eukaryotic expression vector pEGFP-C1-ApoE. The function of the vector was verified by PK15 and PC12 cells. The results showed that green fluorescence was detected in both cells, indicating that the eukaryotic expression vector pEGFP-C1-ApoE could normally express the target protein in both PK15 and PC12 cells. In order to further verify the function of the recombinant plasmid, the plasmid was injected into the testis of mice, and 57 F1 generation mice were obtained by natural mating, and 2 positive mice were obtained by PCR detection. The positive rate of transgenic gene was 3.5%.
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R749.16;Q78

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本文編號：1822588