本文選題：重度抑郁癥 + 端粒　； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文

【摘要】：一、端粒DNA長度動態(tài)改變與重度抑郁癥相關(guān)性研究研究背景重度抑郁癥(major depressive disorder, MDD)作為一種情緒相關(guān)的精神疾病,常伴隨著諸多中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性改變,如記憶力減退、獎賞功能異常等。以往大量研究表明,MDD患者外周血白細(xì)胞端粒長度顯著縮短,提示端粒長度改變與MDD的發(fā)生存在相關(guān)性。但由于抑郁癥發(fā)病主要受中樞神經(jīng)系統(tǒng)控制,外周血的端粒長度改變未必能準(zhǔn)確反映中樞的相關(guān)變化,因此直接檢測與抑郁癥發(fā)病相關(guān)的腦區(qū)、核團更為重要。然而,由于患者腦組織不易獲得,因此關(guān)于腦區(qū)端粒長度與抑郁癥之間關(guān)系的研究非常匱乏。而抑郁癥模型小鼠作為研究抑郁癥的重要工具鼠,可以有效彌補臨床樣本研究的諸多限制。研究目的探索抑郁癥相關(guān)核團、腦區(qū)的端粒長度改變,探討其端粒長度改變與抑郁癥之間的關(guān)系。研究方法：在本研究中,通過建立慢性不可預(yù)知應(yīng)激(chronic unpredictable stress, CUS)、慢性束縛(chronic restraint stress, CRS)和社會挫敗(social defeat, SD)三種抑郁癥動物模型,以qPCR定量檢測模型鼠外周血端粒長度改變。并進一步選擇與MDD發(fā)病高度相關(guān)的前額葉皮層、杏仁核、海馬體、下丘腦室旁核及伏隔核五個核團,檢測端粒在CUS模型鼠的這五個核團的動力學(xué)變化。此外,我們還檢測了重度抑郁癥患者和正常對照的外周血細(xì)胞的端粒,通過兩組之間端粒長度的差異,間接確定該檢測方法的可行性。研究結(jié)果結(jié)果顯示,CUS模型鼠外周血端粒長度(n=11,T/S=1.11±0.21)相對于正常對照(n=21,T/S=0.93±0.21)顯著縮短(p=0.0295),同時該模型鼠前額葉皮層(CTL n=12,T/S=0.72±0.12; CUS n=22 T/S=0.87±0.13, p=0.004)和杏仁核(CTL n=12,T/S=0.54± 0.05; CUS n=22, T/S=0.59±0.05, p=0.011)的端粒均顯著長于正常對照；MDD患者外周血的端粒長度(]n=48,T/S=2.21±0.90)相對于正常對照(n=50,T/S=1.12±0.50)顯著縮短(p0.0001)。結(jié)論因抑郁模型小鼠外周血與患者外周血端粒表現(xiàn)出相同的縮短趨勢,提示可用CUS模型小鼠代表MDD患者研究抑郁癥與端粒的關(guān)系。考慮到端粒DNA延長的機制主要為端粒酶和端粒選擇性延長兩種,而后者僅存在于少數(shù)腫瘤細(xì)胞中,因此推測前額葉皮層和杏仁核的端粒酶活性均上調(diào)。并進一步推測兩個核團表達(dá)的端粒酶在抑郁癥中發(fā)揮著除維持端粒長度之外的其他重要作用。二、利用鈣成像技術(shù)在體檢測神經(jīng)元活動研究背景腦作為機體最為復(fù)雜的器官,擁有紛繁的神經(jīng)聯(lián)系及激活模式,這給腦功能及腦與情緒、行為關(guān)系的精確闡述造成障礙。而通過鈣成像技術(shù)可以實時檢測并記錄神經(jīng)元活動,這對于探索控制行為所涉及的腦區(qū)神經(jīng)環(huán)路的研究具有重要意義。實驗?zāi)康脑趯嶒炇医⑩}成像技術(shù)平臺,實現(xiàn)在體檢測神經(jīng)元活動。實驗內(nèi)容包裝并純化aav-Synl-GCaMP6f-P2A-Tomato腺相關(guān)病毒,培養(yǎng)元代神經(jīng)元,體外驗證病毒；注射病毒于小鼠伏隔核,在動物清醒狀態(tài)下給予束縛刺激,實時記錄伏隔核的神經(jīng)元活動；對檢測后的鼠腦切片,進一步觀察病毒表達(dá)。實驗結(jié)果表達(dá)GCaMP6f的原代神經(jīng)元在給予谷氨酸刺激后,神經(jīng)元被活化,Ca2+內(nèi)流而產(chǎn)生的綠色熒光；通過在體實驗,給予小鼠外界刺激后,可檢測到因伏隔核神經(jīng)元活化而發(fā)出的綠色熒光信號；鼠腦切片同樣可檢測到位于胞質(zhì)的綠色熒光信號與位于細(xì)胞核的病毒紅色熒光標(biāo)記共定位于相同細(xì)胞。結(jié)論aav-Synl-GCaMP6f-P2A-Tomato腺相關(guān)病毒可成功用于在體活化神經(jīng)元的實時監(jiān)測。通過在小鼠伏隔核定點注射該病毒,給予附加刺激,實時記錄到小鼠伏隔核的活化神經(jīng)元。
[Abstract]:涓，

本文編號：1749722