本文選題：鞘氨醇激酶-1　切入點(diǎn)：阿爾茨海默病　出處：《華中科技大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：目的：探討鞘氨醇激酶-1（sphingosine kinase-1，SPK1）對(duì)β淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的阿爾茨海默病細(xì)胞模型是否具有保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。 方法：（1）以β-淀粉樣肽片段25-35（amyloid β-peptide fragment25-35，Aβ25-35）處理已分化的小鼠神經(jīng)瘤細(xì)胞（mouse Neuro-2a，N2a）作為阿爾茨海默病的細(xì)胞模型，將不同濃度的Aβ25-35加入培養(yǎng)的N2a細(xì)胞24h后通過(guò)四甲基偶氮唑（MTT）法檢測(cè)細(xì)胞活性；Hoechst33258染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；透射電鏡觀察細(xì)胞核的超微結(jié)構(gòu)。比較各組的差異。（2）將20μM的Aβ25-35加入培養(yǎng)的N2a細(xì)胞24h，應(yīng)用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)SPK1蛋白水平的表達(dá)變化。然后構(gòu)建腺病毒載體感染細(xì)胞干預(yù)SPK1的表達(dá)，通過(guò)MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性；Hoechst33258染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；透射電鏡觀察細(xì)胞核的超微結(jié)構(gòu)。比較各組的差異，用以觀察調(diào)節(jié)SPK1水平對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性的影響。（3）應(yīng)用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)上述各組凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)；應(yīng)用透射電鏡觀察上述各組線粒體超微結(jié)構(gòu)。比較各組的差異。 結(jié)果：（1）隨Aβ25-35濃度增加，，細(xì)胞活性下降，細(xì)胞凋亡率增加，20μM的Aβ25-35處理分化的N2a細(xì)胞24h符合阿爾茨海默病細(xì)胞模型。（2）Aβ組與對(duì)照組相比，SPK1蛋白水平下降；Ad-SPK1+Aβ組與Aβ組相比，細(xì)胞活性增高，凋亡率下降；SPK1-siRNA+Aβ組與Aβ組相比，細(xì)胞活性下降，凋亡率增高。（3）Aβ組與對(duì)照組相比，Bax/Bcl-2比例明顯增加，出現(xiàn)結(jié)構(gòu)損壞的線粒體；Ad-SPK1+Aβ組與Aβ組相比，Bax/Bcl-2的比例下降，線粒體結(jié)構(gòu)明顯改善； SPK1-siRNA組與Vector組相比，Bax/Bcl-2的比例增高，出現(xiàn)結(jié)構(gòu)損壞的線粒體。 結(jié)論：Aβ25-35誘導(dǎo)N2a細(xì)胞SPK1表達(dá)下降，上調(diào)SPK1的表達(dá)可以減輕Aβ25-35對(duì)N2a細(xì)胞的毒性損傷，其保護(hù)作用可能與調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白Bax與Bcl-2的表達(dá)及保護(hù)線粒體結(jié)構(gòu)有關(guān)。SPK1可作為對(duì)抗Aβ25-35神經(jīng)毒性作用這一個(gè)靶點(diǎn)，達(dá)到預(yù)防和治療阿爾茨海默病的目的。
[Abstract]:Aim: to investigate the protective effect of sphingosine kinase-1 SPK1 (sphingosine kinase-1) on Alzheimer's disease cell model induced by 尾 -amyloid protein and its possible mechanism.Methods 25-35(amyloid 尾 -peptide fragment of 尾 -amyloid peptide fragment 25-35 A 尾 25-35) was used to treat differentiated mouse neuro-2a N2a cells as a cell model of Alzheimer's disease.Different concentrations of A 尾 25-35 were added to cultured N2a cells for 24 hours. The apoptosis rate of N2a cells was detected by Hoechst33258 staining and the ultrastructure of the cell nucleus was observed by transmission electron microscope (TEM).The difference of each group was compared. (2) A 尾 25-35 (20 渭 M) was added to N2a cells for 24 h, and the expression of SPK1 protein was detected by Western blotting.Then the adenovirus vector infected cells were constructed to interfere with the expression of SPK1, the apoptosis rate was detected by MTT assay and the ultrastructure of the nucleus was observed by transmission electron microscope.To observe the effect of regulating the level of SPK1 on the neurotoxicity induced by A 尾 25-35. The expression of apoptosis-related protein was detected by Western blot and the ultrastructure of mitochondria was observed by transmission electron microscope.The differences of each group were compared.Results with the increase of A 尾 25-35 concentration, the cell activity decreased, and the apoptosis rate increased. The differentiated N2a cells treated with A 尾 25-35 at 20 渭 M for 24 h were in accordance with the Alzheimer's disease cell model. The protein level of SPK1 in Ad-SPK1 A 尾 group was lower than that in the control group, and that in Ad-SPK1 A 尾 group was higher than that in A 尾 group, and that in Ad-SPK1 A 尾 group was higher than that in A 尾 group.Compared with A 尾 group, the cell activity of SPK1-siRNA A 尾 group decreased, and the ratio of Bax-Bax / Bcl 2 in A 尾 group was significantly higher than that in A 尾 group, and the ratio of Bax-Bax / Bcl-2 in Ad-SPK1A 尾 group with structural damage was lower than that in A 尾 group.Compared with Vector group, the ratio of Bax-Bcl-2 in SPK1-siRNA group was higher than that in Vector group, resulting in structural damage of mitochondria.Conclusion the expression of SPK1 in N2a cells was induced by 1: a 尾 25-35, and up-regulation of SPK1 could attenuate the toxicity of A 尾 25-35 to N2a cells.Its protective effect may be related to the regulation of the expression of apoptosis-related protein Bax and Bcl-2 and the protection of mitochondrial structure. SPK1 may serve as a target to antagonize the neurotoxicity of A 尾 25-35 and to prevent and treat Alzheimer's disease.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R749.16

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1716982