本文選題：β位點(diǎn)裂解酶-　切入點(diǎn)：核心啟動(dòng)子　出處：《重慶醫(yī)學(xué)》2017年03期

【摘要】：目的對(duì)人β位點(diǎn)裂解酶-1(BACE1)基因核心啟動(dòng)子進(jìn)行克隆,構(gòu)建攜帶BACE1基因啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告載體,篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株并分析其轉(zhuǎn)錄活性。方法提取人胚腎HEK293細(xì)胞基因組DNA,以其為模板,PCR擴(kuò)增BACE1核心啟動(dòng)子(-691~+67)并克隆至熒光素酶報(bào)告載體pGL4.21中,構(gòu)建BACE1基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告載體pGL4.21-BACE1,將其轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞(無(wú)啟動(dòng)子的pGL4.21載體作陰性對(duì)照),利用嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達(dá)株后檢測(cè)其轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果成功擴(kuò)增到758bp的BACE1核心啟動(dòng)子,pGL4.21-BACE1載體經(jīng)雙酶切鑒定正確;HEK293細(xì)胞被該載體轉(zhuǎn)染后經(jīng)嘌呤霉素篩選得到6株穩(wěn)定表達(dá)BACE1啟動(dòng)子的細(xì)胞株,其轉(zhuǎn)錄活性分別是對(duì)照組(HEK293/pGL4.21)的(134.7±22.3)、(634.0±13.9)、(437.6±6.1)、(805.5±5.5)、(492.8±59.1)、(1 021.1±46.6)倍(P=0.001)。結(jié)論成功構(gòu)建了人BACE1基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告載體。
[Abstract]:Objective to clone the core promoter of human 尾 -locus lyase (尾 -locus) and construct a luciferase report vector carrying the promoter of BACE1 gene to screen the stable expressed cell line and analyze its transcriptional activity.Methods the genomic DNA of human embryonic kidney HEK293 cells was extracted, and the core promoter of BACE1 was amplified by PCR. It was cloned into luciferase report vector pGL4.21.BACE1 gene promoter luciferase report vector pGL4.21-BACE1 was constructed and transfected into HEK293 cells (pGL4.21 vector without promoter was used as negative control). The transcriptional activity of pGL4.21-BACE1 was detected by purine mycin screening.Conclusion the luciferase reporter vector of human BACE1 gene promoter was successfully constructed.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;重鋼總醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金國(guó)際合作重大項(xiàng)目(81220108010);國(guó)家自然科學(xué)基金(81171197) 重慶市衛(wèi)生局重點(diǎn)基金(2011-1-018)
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16

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本文編號(hào)：1691391