發(fā)布時間：2018-03-18 15:57

  本文選題：白藜蘆醇　切入點：核轉(zhuǎn)錄因子-κB　出處：《山西醫(yī)科大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：探討不同濃度白藜蘆醇(Res)對AD大鼠學習記憶與Aβ1-42轉(zhuǎn)運的影響及對NF-κB信號通路相關蛋白表達的影響。方法:本研究分為以下三部分:第一部分:白藜蘆醇改善AD大鼠記憶功能與神經(jīng)元結構將健康成年雌性Wistar大鼠(200~220g)60只按體重隨機分為6組,分別為AD模型組;Res 20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg干預組;戊酸雌二醇組(0.8 mg/kg);假手術對照組。采用去卵巢合并D-半乳糖(D-gal,100 mg/kg)注射制備AD大鼠模型。術后一周,傷口初步愈合后開始灌胃。AD模型組:每日腹腔注射D-gal+蒸餾水灌胃;Res 20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg干預組:每日腹腔注射D-gal,并分別以劑量為20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg Res灌胃;戊酸雌二醇組:每日腹腔注射D gal+0.8 mg/kg戊酸雌二醇灌胃;假手術對照組:腹腔注射生理鹽水+蒸餾水灌胃,干預持續(xù)12周。大鼠空間記憶功能用Morris水迷宮方法檢測;心臟灌流后取海馬組織,戊二醛固定后透射電鏡觀察神經(jīng)元線粒體、突觸、細胞核超微結構的改變。第二部分:白藜蘆醇對AD大鼠中Aβ1-42轉(zhuǎn)運與聚集與血腦屏障完整性的影響大鼠分為6組:AD模型組、Res 20、40、80mg/kg組,戊酸雌二醇組及假手術對照組,頸靜脈取血后分離大鼠海馬組織,ELISA檢測大鼠血清與海馬組織中Aβ1-42含量變化,Western blot檢測大鼠海馬組織中β-APP蛋白、RAGE蛋白、MMP-9蛋白、Claudin-5蛋白表達總量,IHC檢測RAGE蛋白、Claudin-5蛋白表達分布。第三部分:白藜蘆醇通過NF-κB炎性信號通路調(diào)節(jié)AD大鼠海馬炎癥大鼠分為6組:AD模型組、Res 20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg組,戊酸雌二醇組及假手術對照組,頸靜脈取血后分離大鼠海馬組織,Western blot檢測大鼠海馬組織中NF-κB蛋白,ELISA檢測大鼠血清中TNF-α與IL-6濃度,并且檢測海馬組織中i NOS活力與NO濃度。結果:第一部分:白藜蘆醇改善AD大鼠記憶功能與神經(jīng)元結構1.Res干預組與AD模型組大鼠體重、大鼠增重、攝食量和食物利用率差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.Morris水迷宮結果中,隨著訓練天數(shù)增加,各組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短,與AD模型組比較,Res 80 mg/kg組、戊酸雌二醇組大鼠逃避潛伏期明顯縮短,穿越平臺次數(shù)明顯增加(P0.05),Res各組大鼠在目標象限內(nèi)停留時間延長(P0.05)。3.在透射電鏡下(×20000),與AD模型組比較,Res 80 mg/kg組線粒體空泡樣變面積明顯變小(P0.05);戊酸雌二醇組較AD模型組無統(tǒng)計學差異(P0.05);在電鏡下(×30000),AD模型組突觸結構減少,且突觸間隙不清晰,突觸前后成分電子密度降低,突觸小泡減少;Res 80 mg/kg劑量組突觸的數(shù)量較AD模型組增多;在電鏡下(×12000),與假手術對照組比較,AD模型組神經(jīng)元有核變形與核碎裂,Res 80 mg/kg劑量組有改善。第二部分:白藜蘆醇對AD大鼠中Aβ1-42轉(zhuǎn)運與聚集與血腦屏障完整性的影響1.Res 20、40、80 mg/kg組大鼠海馬β-APP蛋白表達水平較模型組明顯下降(P0.05);海馬組織中Res 80 mg/kg組Aβ1-42含量較AD模型組明顯降低(P0.05);且血清中Res 20 mg/kg組Aβ1-42含量較AD模型組顯著升高(P0.05);Western blot與IHC結果中,AD模型組大鼠海馬中RAGE表達總量較假手術對照組RAGE水平升高(P0.05),且RAGE表達分布在大鼠海馬組織血管處的量明顯升高(P0.05);Res 20、40、80 mg/kg組和戊酸雌二醇組大鼠海馬中RAGE表達總量AD較模型組都有明顯的下降(P0.05),且Res 80 mg/kg組及戊酸雌二醇組的海馬組織血管處的RAGE表達量AD較模型組均有顯著的下降(P0.05)。2.Western blot分析中,AD模型組大鼠海馬中MMP-9表達總量較假手術對照組升高(P0.05),Res 20、40、80 mg/kg組和戊酸雌二醇組大鼠海馬組織中MMP-9表達量較AD模型組都有明顯的下降(P0.05);Claudin-5的Western blot與IHC結果中,與AD模型組大鼠海馬中Claudin-5表達總量較假手術對照組明顯降低(P0.05),且Claudin-5表達分布在大鼠海馬組織血管處的量明顯降低(P0.05);Res 20、40、80mg/kg組和戊酸雌二醇組大鼠海馬中C laudin-5表達總量較AD較模型組都有明顯的升高(P0.05),且Res 80 mg/kg組及戊酸雌二醇組的海馬組織血管處的Claudin-5表達量AD較模型組均有顯著的下降(P0.05)。第三部分:白藜蘆醇通過NF-κB炎性信號通路調(diào)節(jié)AD大鼠海馬炎癥1.Western blot實驗中,AD模型組大鼠海馬組織中NF-κBp65相對水平為較假手術對照組升高(P0.05),Res 40、80 mg/kg組和戊酸雌二醇組大鼠海馬組織中NF-κBp65相對含量較AD模型組都有明顯的下降(P0.05)。2.在大鼠血清中,AD模型組TNF-α濃度和IL-6濃度均較假手術對照組顯著升高(P0.05),Res 20、40、80 mg/kg劑量組和戊酸雌二醇組TNF-α濃度和IL-6濃度均較AD模型組明顯降低(P0.05)。3.在大鼠海馬組織中,Res 20、40、80 mg/kg劑量組和假手術對照組iNOS活力和NO濃度較AD模型組明顯降低(P0.05),戊酸雌二醇組i NOS活力和NO濃度較AD模型組亦明顯降低(P0.05)。結論:1.Res在一定劑量時(80 mg/kg)表現(xiàn)出對AD大鼠學習記憶的保護作用,并且能顯著改善神經(jīng)元的超微結構;2.Res可以通過保護BBB完整性,抑制Aβ1-42由血液轉(zhuǎn)運入腦;3.Res可以通過抑制NF-κB炎癥通路降低腦內(nèi)炎癥發(fā)生。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

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本文編號：1630277