本文關鍵詞： GSK-3β 氯胺酮 復吸 尾殼核 海馬 伏隔核 前額皮層 腹側被蓋區(qū)　出處：《寧波大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：糖原合成酶激酶3（Glycogen synthase kinase-3，GSK-3）是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，參與了細胞增殖、生長及凋亡，調節(jié)神經極性和神經穩(wěn)態(tài)，并在神經炎癥過程中起重要作用。其亞型GSK-3β已被證實與成癮藥物的行為學效應存在一定的關聯，應用GSK-3β抑制劑能夠降低氯胺酮的神經毒性及類精神失常作用。但GSK-3β是否參與氯胺酮獎賞和成癮及其具體作用機制目前仍不明確。本研究通過使用特異性及非特異性的GSK-3β抑制劑對氯胺酮的自身給藥及復吸行為進行干預，從而明確GSK-3β在氯胺酮獎賞、獎賞動機以及復吸行為中所起的作用。 實驗一：氯胺酮自身給藥對腦區(qū)GSK-3β表達的影響 方法：成年雄性SD大鼠（n=16）進行頸靜脈插管手術，恢復后隨機平均分為兩組：自身給藥組和對照組。自身給藥組大鼠用FR1程序進行氯胺酮自身給藥的訓練及維持，對照組大鼠每天置于自身給藥裝置中相同的時間但不獲得氯胺酮。維持期的最后一天給藥結束后兩小時對大鼠進行斷頭取腦，Western Blot檢測尾殼核（CPu）、海馬（Hip）、伏隔核（NAc）、前額皮層（PFC）及腹側被蓋區(qū)（VTA）中磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）及總GSK-3β（t-GSK-3β）的表達。另選兩組成年SD大鼠作為氯胺酮急性處理的對照，腹腔注射生理鹽水（n=3）或40mg/kg的氯胺酮（n=3）后兩小時進行斷頭取腦，用Western Blot的方法檢測CPu、Hip、NAc、PFC及VTA中p-GSK-3β及t-GSK-3β的表達。 結果：實驗結果顯示動物在氯胺酮0.5mg/kg/針的劑量下能夠維持穩(wěn)定的自身給藥行為。Western Blot結果顯示大鼠氯胺酮自身給藥后， CPu (F(2,5)=15.804, p0.05)、NAc(F(2,5)=6.467,p0.05)和VTA(F(2,5)=7.804, p0.05)中磷酸化GSK-3β占總GSK-3β的比例與對照組和急性處理組相比明顯降低（p0.05），而Hip和PFC則無顯著性差異（p＞0.05）。氯胺酮急性處理對各部位的磷酸化GSK-3β占總GSK-3β的比例沒有影響。 實驗二：GSK-3β抑制劑處理對氯胺酮自身給藥行為的影響 方法：成年雄性SD大鼠(n=16)進行頸靜脈插管手術，恢復良好后進行每天4h自身給藥訓練，實驗動物成功獲得自身給藥行為后將動物隨機平均分為兩組，在維持期內對動物自身給藥行為進行藥物干預，一組使用特異性的GSK-3β抑制劑SB216763進行干預，另一組使用非特異性的GSK-3β抑制劑LiCl進行干預，給藥方式均為腹腔注射，SB216763的劑量分別為2mg/kg和4mg/kg，均在自身給藥前5min進行注射，LiCl的劑量為100mg/kg，于自身給藥前30min注射。為了觀察MK-801預處理是否影響SB216763處理后對自身給藥的影響，MK-801劑量選擇為0.1mg/kg，于給藥前30min腹腔注射。所有測定均在固定頻率（FR）和累進頻率（PR）下完成。給藥前均給予藥物相應溶媒進行FR和PR測定，作為自身對照。 結果：重復測量方差分析顯示，SB216763兩個劑量均不影響固定頻率下氯胺酮的給藥次數（F(2,21)=2.055, p＞0.05），但均顯著減少累進頻率中氯胺酮的給藥次數（2mg/kg:F(3,28)=5.054,p0.01;4mg/kg: F(3,28)=9.274,p0.01）。用MK-801處理能逆轉SB216763對累進頻率下氯胺酮給藥次數的抑制作用（p＜0.01)，但單獨給予MK-801處理對氯胺酮自身給藥行為沒有影響，結果提示SB216763能顯著降低氯胺酮的給藥動機，而NMDA受體拮抗劑能阻斷SB216763的動機抑制作用。LiCl（100mg/kg）對固定頻率下氯胺酮自身給藥行為也沒有影響（p0.05），但同樣降低了累進頻率中氯胺酮的給藥次數（p0.05）。 實驗三：GSK-3β抑制劑處理對線索或氯胺酮誘導的復吸行為的影響 方法：成年雄性SD大鼠進行頸靜脈插管手術（n=40），恢復后進行氯胺酮自身給藥的訓練及為期14天的維持，維持結束后進行10天的戒斷，戒斷完成后將大鼠隨機平均分成5組，進行線索誘導的氯胺酮覓藥行為測試，測試前分別對各組動物注射100mg/kg的LiCl，生理鹽水，2mg/kg的SB216763，4mg/kg的SB216763及DMSO，SB216763及DMSO的注射時間為測試前5min，LiCl及生理鹽水的注射時間為測試前30min，所有藥物均采用腹腔注射的方式。測試結束后再將動物進行為期7天的戒斷，戒斷結束后進行氯胺酮引燃的氯胺酮覓藥行為測試，測試前分別對動物注射相應藥物。氯胺酮引燃的氯胺酮覓藥行為測試結束兩小時后對動物進行斷頭取腦，用Western Blot的方法檢測NAc中p-GSK-3β及t-GSK-3β的表達變化。 結果：線索誘導的氯胺酮覓藥行為測試結果顯示使用LiCl和2mg/kg的SB216763均沒有減少氯胺酮的覓藥行為，，而4mg/kg的SB216763則可以顯著抑制線索誘導的氯胺酮覓藥行為（p0.05）。氯胺酮引燃的氯胺酮覓藥行為測試結果顯示使用LiCl后可以顯著降低氯胺酮引燃的覓藥行為（p0.05），但其無效鼻觸反應也顯著減少（p0.05）。2mg/kg和4mg/kg的SB216763均降低了氯胺酮引燃的覓藥行為（p0.05），且對無效鼻觸沒有影響。Western Blot的結果顯示LiCl或SB216763處理后，NAc中的p-GSK-3β/t-GSK-3β比值升高（p0.05）。 結論：本研究證實氯胺酮具有精神依賴潛力；氯胺酮自身給藥后GSK-3β磷酸化表達減少，活性增加；抑制GSK-3β的活性可以降低氯胺酮的給藥動機，但不降低氯胺酮的獎賞作用；同時，抑制GSK-3β活性可抑制線索或氯胺酮引燃的氯胺酮覓藥行為。這些結果提示伏隔核GSK-3β可能參與了氯胺酮依賴過程，它的抑制劑可能是治療氯胺酮成癮的新藥靶點。
[Abstract]:Objective : Glycogen synthase kinase - 3 ( gsk - 3 ) is a highly conserved serine / threonine protein kinase involved in cell proliferation , growth and apoptosis . It plays an important role in the process of neuroinflammation . Effects of ketamine on the expression of gsk - 3beta in the brain region Methods : Adult male SD rats ( n = 16 ) were randomly divided into two groups : self - administration group and control group . Results : The results showed that the animals were able to maintain stable self - administration behavior at the dose of 0.5 mg / kg / kg of ketamine . Western Blot showed that CPu ( F ( 2,5 ) = 15.804 , p0.05 ) , nac ( F ( 2,5 ) = 6.467 , p0.05 ) and VTA ( F ( 2,5 ) = 7.804 , p0.05 ) decreased significantly ( p > 0.05 ) compared with the control group and the acute treatment group ( p > 0.05 ) . Experimental study on the effect of the treatment on ketamine ' s self - administration behavior by the use of inhibitors of gsk - 3 beta Methods : Male Sprague - Dawley rats ( n = 16 ) were operated on the jugular vein for 4 hours . After successful administration , the animals were randomly divided into two groups . Results : The results showed that SB216763 could significantly decrease the frequency of ketamine administration ( 2 mg / kg : F ( 3 , 28 ) = 5.054 , p0.01 ; 4mg / kg : F ( 3,28 ) = 9.274 , p0.01 ) . Experimental study on the effects of the treatment of inhibitors of gsk - 3 beta on the induced relapse behavior of cue or ketamine Methods : Adult male Sprague - Dawley rats were operated by jugular vein intubation ( n = 40 ) . After the recovery , the rats were divided into 5 groups . After withdrawal , the rats were randomly divided into 5 groups . After withdrawal , the rats were randomly divided into 5 groups . The animals were injected with ketamine 100mg / kg , physiological saline , 2 mg / kg SB216763 , 4mg / kg SB216763 and DMSO , SB216763 and DMSO respectively . RESULTS : The results showed that none of SB216763 , 4mg / kg and 4mg / kg SB216763 , could significantly decrease the drug - seeking behavior of ketamine ( p . 05 ) . CONCLUSION : The study confirms that ketamine has the potential of mental dependence , and the expression of the phosphorylation and activity is increased after the administration of ketamine itself . The inhibition of the activity of gsk - 3.beta . can reduce the administration motivation of ketamine , but does not reduce the reward effect of ketamine ; meanwhile , the inhibition of the activity of gsk - 3.beta . may inhibit the ketamine - induced behavior of the clue or ketamine . These results suggest that the nucleus accumuxin - 3 beta may be involved in the ketamine - dependent process , and its inhibitor may be a new drug target for the treatment of ketamine addiction .

【學位授予單位】：寧波大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.64

【參考文獻】

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本文編號：1510996