本文關(guān)鍵詞： GSK-3β 氯胺酮 復(fù)吸 尾殼核 海馬 伏隔核 前額皮層 腹側(cè)被蓋區(qū)　出處：《寧波大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：糖原合成酶激酶3（Glycogen synthase kinase-3，GSK-3）是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，參與了細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)及凋亡，調(diào)節(jié)神經(jīng)極性和神經(jīng)穩(wěn)態(tài)，并在神經(jīng)炎癥過(guò)程中起重要作用。其亞型GSK-3β已被證實(shí)與成癮藥物的行為學(xué)效應(yīng)存在一定的關(guān)聯(lián)，應(yīng)用GSK-3β抑制劑能夠降低氯胺酮的神經(jīng)毒性及類精神失常作用。但GSK-3β是否參與氯胺酮獎(jiǎng)賞和成癮及其具體作用機(jī)制目前仍不明確。本研究通過(guò)使用特異性及非特異性的GSK-3β抑制劑對(duì)氯胺酮的自身給藥及復(fù)吸行為進(jìn)行干預(yù)，從而明確GSK-3β在氯胺酮獎(jiǎng)賞、獎(jiǎng)賞動(dòng)機(jī)以及復(fù)吸行為中所起的作用。 實(shí)驗(yàn)一：氯胺酮自身給藥對(duì)腦區(qū)GSK-3β表達(dá)的影響 方法：成年雄性SD大鼠（n=16）進(jìn)行頸靜脈插管手術(shù)，恢復(fù)后隨機(jī)平均分為兩組：自身給藥組和對(duì)照組。自身給藥組大鼠用FR1程序進(jìn)行氯胺酮自身給藥的訓(xùn)練及維持，對(duì)照組大鼠每天置于自身給藥裝置中相同的時(shí)間但不獲得氯胺酮。維持期的最后一天給藥結(jié)束后兩小時(shí)對(duì)大鼠進(jìn)行斷頭取腦，Western Blot檢測(cè)尾殼核（CPu）、海馬（Hip）、伏隔核（NAc）、前額皮層（PFC）及腹側(cè)被蓋區(qū)（VTA）中磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）及總GSK-3β（t-GSK-3β）的表達(dá)。另選兩組成年SD大鼠作為氯胺酮急性處理的對(duì)照，腹腔注射生理鹽水（n=3）或40mg/kg的氯胺酮（n=3）后兩小時(shí)進(jìn)行斷頭取腦，用Western Blot的方法檢測(cè)CPu、Hip、NAc、PFC及VTA中p-GSK-3β及t-GSK-3β的表達(dá)。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示動(dòng)物在氯胺酮0.5mg/kg/針的劑量下能夠維持穩(wěn)定的自身給藥行為。Western Blot結(jié)果顯示大鼠氯胺酮自身給藥后， CPu (F(2,5)=15.804, p0.05)、NAc(F(2,5)=6.467,p0.05)和VTA(F(2,5)=7.804, p0.05)中磷酸化GSK-3β占總GSK-3β的比例與對(duì)照組和急性處理組相比明顯降低（p0.05），而Hip和PFC則無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。氯胺酮急性處理對(duì)各部位的磷酸化GSK-3β占總GSK-3β的比例沒(méi)有影響。 實(shí)驗(yàn)二：GSK-3β抑制劑處理對(duì)氯胺酮自身給藥行為的影響 方法：成年雄性SD大鼠(n=16)進(jìn)行頸靜脈插管手術(shù)，恢復(fù)良好后進(jìn)行每天4h自身給藥訓(xùn)練，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成功獲得自身給藥行為后將動(dòng)物隨機(jī)平均分為兩組，在維持期內(nèi)對(duì)動(dòng)物自身給藥行為進(jìn)行藥物干預(yù)，一組使用特異性的GSK-3β抑制劑SB216763進(jìn)行干預(yù)，另一組使用非特異性的GSK-3β抑制劑LiCl進(jìn)行干預(yù)，給藥方式均為腹腔注射，SB216763的劑量分別為2mg/kg和4mg/kg，均在自身給藥前5min進(jìn)行注射，LiCl的劑量為100mg/kg，于自身給藥前30min注射。為了觀察MK-801預(yù)處理是否影響SB216763處理后對(duì)自身給藥的影響，MK-801劑量選擇為0.1mg/kg，于給藥前30min腹腔注射。所有測(cè)定均在固定頻率（FR）和累進(jìn)頻率（PR）下完成。給藥前均給予藥物相應(yīng)溶媒進(jìn)行FR和PR測(cè)定，作為自身對(duì)照。 結(jié)果：重復(fù)測(cè)量方差分析顯示，SB216763兩個(gè)劑量均不影響固定頻率下氯胺酮的給藥次數(shù)（F(2,21)=2.055, p＞0.05），但均顯著減少累進(jìn)頻率中氯胺酮的給藥次數(shù)（2mg/kg:F(3,28)=5.054,p0.01;4mg/kg: F(3,28)=9.274,p0.01）。用MK-801處理能逆轉(zhuǎn)SB216763對(duì)累進(jìn)頻率下氯胺酮給藥次數(shù)的抑制作用（p＜0.01)，但單獨(dú)給予MK-801處理對(duì)氯胺酮自身給藥行為沒(méi)有影響，結(jié)果提示SB216763能顯著降低氯胺酮的給藥動(dòng)機(jī)，而NMDA受體拮抗劑能阻斷SB216763的動(dòng)機(jī)抑制作用。LiCl（100mg/kg）對(duì)固定頻率下氯胺酮自身給藥行為也沒(méi)有影響（p0.05），但同樣降低了累進(jìn)頻率中氯胺酮的給藥次數(shù)（p0.05）。 實(shí)驗(yàn)三：GSK-3β抑制劑處理對(duì)線索或氯胺酮誘導(dǎo)的復(fù)吸行為的影響 方法：成年雄性SD大鼠進(jìn)行頸靜脈插管手術(shù)（n=40），恢復(fù)后進(jìn)行氯胺酮自身給藥的訓(xùn)練及為期14天的維持，維持結(jié)束后進(jìn)行10天的戒斷，戒斷完成后將大鼠隨機(jī)平均分成5組，進(jìn)行線索誘導(dǎo)的氯胺酮覓藥行為測(cè)試，測(cè)試前分別對(duì)各組動(dòng)物注射100mg/kg的LiCl，生理鹽水，2mg/kg的SB216763，4mg/kg的SB216763及DMSO，SB216763及DMSO的注射時(shí)間為測(cè)試前5min，LiCl及生理鹽水的注射時(shí)間為測(cè)試前30min，所有藥物均采用腹腔注射的方式。測(cè)試結(jié)束后再將動(dòng)物進(jìn)行為期7天的戒斷，戒斷結(jié)束后進(jìn)行氯胺酮引燃的氯胺酮覓藥行為測(cè)試，測(cè)試前分別對(duì)動(dòng)物注射相應(yīng)藥物。氯胺酮引燃的氯胺酮覓藥行為測(cè)試結(jié)束兩小時(shí)后對(duì)動(dòng)物進(jìn)行斷頭取腦，用Western Blot的方法檢測(cè)NAc中p-GSK-3β及t-GSK-3β的表達(dá)變化。 結(jié)果：線索誘導(dǎo)的氯胺酮覓藥行為測(cè)試結(jié)果顯示使用LiCl和2mg/kg的SB216763均沒(méi)有減少氯胺酮的覓藥行為，，而4mg/kg的SB216763則可以顯著抑制線索誘導(dǎo)的氯胺酮覓藥行為（p0.05）。氯胺酮引燃的氯胺酮覓藥行為測(cè)試結(jié)果顯示使用LiCl后可以顯著降低氯胺酮引燃的覓藥行為（p0.05），但其無(wú)效鼻觸反應(yīng)也顯著減少（p0.05）。2mg/kg和4mg/kg的SB216763均降低了氯胺酮引燃的覓藥行為（p0.05），且對(duì)無(wú)效鼻觸沒(méi)有影響。Western Blot的結(jié)果顯示LiCl或SB216763處理后，NAc中的p-GSK-3β/t-GSK-3β比值升高（p0.05）。 結(jié)論：本研究證實(shí)氯胺酮具有精神依賴潛力；氯胺酮自身給藥后GSK-3β磷酸化表達(dá)減少，活性增加；抑制GSK-3β的活性可以降低氯胺酮的給藥動(dòng)機(jī)，但不降低氯胺酮的獎(jiǎng)賞作用；同時(shí)，抑制GSK-3β活性可抑制線索或氯胺酮引燃的氯胺酮覓藥行為。這些結(jié)果提示伏隔核GSK-3β可能參與了氯胺酮依賴過(guò)程，它的抑制劑可能是治療氯胺酮成癮的新藥靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective : Glycogen synthase kinase - 3 ( gsk - 3 ) is a highly conserved serine / threonine protein kinase involved in cell proliferation , growth and apoptosis . It plays an important role in the process of neuroinflammation . Effects of ketamine on the expression of gsk - 3beta in the brain region Methods : Adult male SD rats ( n = 16 ) were randomly divided into two groups : self - administration group and control group . Results : The results showed that the animals were able to maintain stable self - administration behavior at the dose of 0.5 mg / kg / kg of ketamine . Western Blot showed that CPu ( F ( 2,5 ) = 15.804 , p0.05 ) , nac ( F ( 2,5 ) = 6.467 , p0.05 ) and VTA ( F ( 2,5 ) = 7.804 , p0.05 ) decreased significantly ( p > 0.05 ) compared with the control group and the acute treatment group ( p > 0.05 ) . Experimental study on the effect of the treatment on ketamine ' s self - administration behavior by the use of inhibitors of gsk - 3 beta Methods : Male Sprague - Dawley rats ( n = 16 ) were operated on the jugular vein for 4 hours . After successful administration , the animals were randomly divided into two groups . Results : The results showed that SB216763 could significantly decrease the frequency of ketamine administration ( 2 mg / kg : F ( 3 , 28 ) = 5.054 , p0.01 ; 4mg / kg : F ( 3,28 ) = 9.274 , p0.01 ) . Experimental study on the effects of the treatment of inhibitors of gsk - 3 beta on the induced relapse behavior of cue or ketamine Methods : Adult male Sprague - Dawley rats were operated by jugular vein intubation ( n = 40 ) . After the recovery , the rats were divided into 5 groups . After withdrawal , the rats were randomly divided into 5 groups . After withdrawal , the rats were randomly divided into 5 groups . The animals were injected with ketamine 100mg / kg , physiological saline , 2 mg / kg SB216763 , 4mg / kg SB216763 and DMSO , SB216763 and DMSO respectively . RESULTS : The results showed that none of SB216763 , 4mg / kg and 4mg / kg SB216763 , could significantly decrease the drug - seeking behavior of ketamine ( p . 05 ) . CONCLUSION : The study confirms that ketamine has the potential of mental dependence , and the expression of the phosphorylation and activity is increased after the administration of ketamine itself . The inhibition of the activity of gsk - 3.beta . can reduce the administration motivation of ketamine , but does not reduce the reward effect of ketamine ; meanwhile , the inhibition of the activity of gsk - 3.beta . may inhibit the ketamine - induced behavior of the clue or ketamine . These results suggest that the nucleus accumuxin - 3 beta may be involved in the ketamine - dependent process , and its inhibitor may be a new drug target for the treatment of ketamine addiction .

【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.64

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1510996