本文關(guān)鍵詞：GPR50通過(guò)誘導(dǎo)自噬途徑降解BACE1分子機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： GPR50 BACE1 自噬 阿爾茨海默病 CREB

【摘要】：目的:研究G蛋白偶聯(lián)受體家族(G protein coupled receptor,GPCR)成員GPR50促進(jìn)β-分泌酶(β-site APP cleaving enzyme 1,BACE1)降解的作用及機(jī)制,從而確定GPR50在阿爾茨海默病病理發(fā)展的作用,為治療阿爾茨海默病尋找到新的藥物靶點(diǎn)。方法:1)在HEK-293T細(xì)胞系上過(guò)表達(dá)BACE-HA,然后轉(zhuǎn)染不同濃度的GPR50-FLAG,分析GPR50對(duì)BACE1蛋白的調(diào)控作用。2)在HEK-293T細(xì)胞系和MEF細(xì)胞系上分別加入自噬激活劑Trehalose和Rapamycin,作用不同的時(shí)間段,檢測(cè)BACE1和LC3 II蛋白水平的變化;在HEK-293T細(xì)胞系上使用自噬抑制劑3-MA作用不同時(shí)間段,檢測(cè)BACE1蛋白水平的變化,分析BACE1是否經(jīng)自噬途徑降解。3)在野生型MEF細(xì)胞和MEF ATG5 KO細(xì)胞上過(guò)表達(dá)GPR50,檢測(cè)BACE1的蛋白水平變化;在CHO細(xì)胞上轉(zhuǎn)染GPR50-FLAG,用自噬抑制劑3-MA處理細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48小時(shí)后利用蛋白印跡檢測(cè)BACE1和FLAG的蛋白表達(dá)水平,分析GPR50是否經(jīng)自噬降解BACE1。4)在HEK-293T細(xì)胞上過(guò)表達(dá)GPR50-FLAG或siRNA,利用蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LC3-II的蛋白表達(dá)水平;在HEK-293T細(xì)胞上過(guò)表達(dá)GPR50-FLAG和LC3-GFP,使用免疫熒光染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,利用激光共聚焦顯微鏡觀察GPR50對(duì)LC3形態(tài)變化的影響;從而分析GPR50對(duì)自噬的激活作用。5)在HEK-293T細(xì)胞上過(guò)表達(dá)GPR50-FLAG,檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3、ATG5、ATG7、CREB、mTOR等蛋白水平的變化;取三個(gè)月大的GPR50 KO小鼠,提取腦組織蛋白,檢測(cè)BACE1、ATG5、ATG7、CREB、LC3蛋白水平的變化,并且提取腦組織mRNA,通過(guò)q-PCR的檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)自噬相關(guān)基因ATG5、ATG7的mRNA表達(dá)水平;在HEK-293T細(xì)胞系上分別干擾GPR50和CREB,檢測(cè)BACE1、LC3的蛋白水平變化,分析GPR50激活自噬,調(diào)控BACE1降解的分子機(jī)制。結(jié)論:1:蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明BACE1能夠通過(guò)自噬途徑降解;2:GPR50能夠激活自噬以及自噬相關(guān)蛋白,并促進(jìn)BACE1的降解;3:q-PCR結(jié)果顯示GPR50對(duì)自噬相關(guān)基因ATG5、ATG7的mRNA水平有上調(diào)作用�？偨Y(jié):通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明GPR50通過(guò)激活P-CREB從而激活自噬,并且促進(jìn)BACE1通過(guò)自噬途徑降解,從而可能為治療阿爾茨海默病提供新的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 葉青;鄭民華;;自噬的分子機(jī)制與病理生理意義[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

2 何韜;王海杰;譚玉珍;;自噬在細(xì)胞存活和死亡中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2008年01期

3 張志才;邵增務(wù);;自噬分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年01期

4 趙勇;師長(zhǎng)宏;伍靜;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控機(jī)制[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

5 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

6 伍靜;趙勇;師長(zhǎng)宏;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年20期

7 王雄;譚璐;;自噬研究進(jìn)展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

8 卞龍艷;;運(yùn)動(dòng)與自噬的關(guān)系進(jìn)展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年07期

9 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過(guò)程中自噬與凋亡關(guān)系的研究[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報(bào);2011年06期

10 王光輝;;自噬與疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機(jī)制[A];中國(guó)活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（第一冊(cè)）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽(yáng);黃強(qiáng);劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細(xì)胞生存與死亡中的作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細(xì)胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國(guó)生化與分子藥理學(xué)藥物靶點(diǎn)研討會(huì)論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關(guān)蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過(guò)不同途徑誘導(dǎo)自噬的化合物對(duì)Atg9的依賴性不同[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2013年全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)·武漢論文摘要集[C];2013年

7 陳涓涓;敬靜;蔡元博;張俊龍;;針對(duì)活體細(xì)胞自噬行為的發(fā)光金屬配合物的設(shè)計(jì)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第8分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞自噬[A];2013中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動(dòng)力改變參與了LRRK2突變導(dǎo)致的自噬[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機(jī)制[N];新清華;2012年

2 周飛 張粹蘭;花櫚木“自噬”可抗癌[N];廣東科技報(bào);2011年

3 張明永;水稻自噬基因研究取得新進(jìn)展[N];廣東科技報(bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 賈盛楠;轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 皮會(huì)豐;DNM1L蛋白介導(dǎo)的線粒體自噬在鎘致肝臟毒性中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李倩;miRNAs介導(dǎo)的自噬抑制在類鼻疽桿菌感染免疫逃逸中的作用機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 黎炳護(hù);激活TRPV1誘導(dǎo)自噬在血管平滑肌細(xì)胞泡沫化中作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳江偉;自噬在椎間盤退變中的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王維;NF-κB信號(hào)通路參與介導(dǎo)的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

8 劉春朋;日糧硒缺乏對(duì)雞肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)及自噬變化的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 梁蓓蓓;P53凋亡刺激蛋白ASPP2調(diào)控細(xì)胞自噬的研究[D];上海交通大學(xué);2012年

10 李少瑩;自噬在LPS誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞死亡中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李寧;自噬在嗎啡心肌保護(hù)中的作用及機(jī)制研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 劉冰;腦缺血預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后自噬及凋亡的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

3 王存凱;microRNA-30a-5p通過(guò)抑制自噬阻止肝星狀細(xì)胞激活[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 張宇程;泛素連接酶HOIL-1L在線粒體自噬中的功能與機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

5 唐芙蓉;自噬對(duì)奶山羊雄性生殖干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 陳軍童;腎損傷分子1對(duì)高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞自噬作用的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

7 包勇;Kap1在LBH589誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

8 王彬彬;模擬高原缺氧大鼠腸上皮細(xì)胞損傷自噬調(diào)控機(jī)制的研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 張君莉;NIX在CCCP誘導(dǎo)PC12細(xì)胞線粒體自噬調(diào)控作用的研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

10 校鑫;九節(jié)龍?jiān)碥闸駥?duì)多種人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系自噬活性增強(qiáng)作用的體外研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：1269156