本文關(guān)鍵詞：GPR50通過誘導(dǎo)自噬途徑降解BACE1分子機制的研究

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【摘要】：目的:研究G蛋白偶聯(lián)受體家族(G protein coupled receptor,GPCR)成員GPR50促進β-分泌酶(β-site APP cleaving enzyme 1,BACE1)降解的作用及機制,從而確定GPR50在阿爾茨海默病病理發(fā)展的作用,為治療阿爾茨海默病尋找到新的藥物靶點。方法:1)在HEK-293T細胞系上過表達BACE-HA,然后轉(zhuǎn)染不同濃度的GPR50-FLAG,分析GPR50對BACE1蛋白的調(diào)控作用。2)在HEK-293T細胞系和MEF細胞系上分別加入自噬激活劑Trehalose和Rapamycin,作用不同的時間段,檢測BACE1和LC3 II蛋白水平的變化;在HEK-293T細胞系上使用自噬抑制劑3-MA作用不同時間段,檢測BACE1蛋白水平的變化,分析BACE1是否經(jīng)自噬途徑降解。3)在野生型MEF細胞和MEF ATG5 KO細胞上過表達GPR50,檢測BACE1的蛋白水平變化;在CHO細胞上轉(zhuǎn)染GPR50-FLAG,用自噬抑制劑3-MA處理細胞,轉(zhuǎn)染48小時后利用蛋白印跡檢測BACE1和FLAG的蛋白表達水平,分析GPR50是否經(jīng)自噬降解BACE1。4)在HEK-293T細胞上過表達GPR50-FLAG或siRNA,利用蛋白印跡實驗檢測LC3-II的蛋白表達水平;在HEK-293T細胞上過表達GPR50-FLAG和LC3-GFP,使用免疫熒光染色技術(shù)對細胞進行染色,利用激光共聚焦顯微鏡觀察GPR50對LC3形態(tài)變化的影響;從而分析GPR50對自噬的激活作用。5)在HEK-293T細胞上過表達GPR50-FLAG,檢測自噬相關(guān)蛋白LC3、ATG5、ATG7、CREB、mTOR等蛋白水平的變化;取三個月大的GPR50 KO小鼠,提取腦組織蛋白,檢測BACE1、ATG5、ATG7、CREB、LC3蛋白水平的變化,并且提取腦組織mRNA,通過q-PCR的檢測方法來檢測自噬相關(guān)基因ATG5、ATG7的mRNA表達水平;在HEK-293T細胞系上分別干擾GPR50和CREB,檢測BACE1、LC3的蛋白水平變化,分析GPR50激活自噬,調(diào)控BACE1降解的分子機制。結(jié)論:1:蛋白印跡實驗結(jié)果證明BACE1能夠通過自噬途徑降解;2:GPR50能夠激活自噬以及自噬相關(guān)蛋白,并促進BACE1的降解;3:q-PCR結(jié)果顯示GPR50對自噬相關(guān)基因ATG5、ATG7的mRNA水平有上調(diào)作用。總結(jié):通過以上實驗結(jié)果證明GPR50通過激活P-CREB從而激活自噬,并且促進BACE1通過自噬途徑降解,從而可能為治療阿爾茨海默病提供新的治療靶點。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16

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1 葉青;鄭民華;;自噬的分子機制與病理生理意義[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

2 何韜;王海杰;譚玉珍;;自噬在細胞存活和死亡中的作用[J];生理科學(xué)進展;2008年01期

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4 趙勇;師長宏;伍靜;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控機制[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

5 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

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7 王雄;譚璐;;自噬研究進展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

8 卞龍艷;;運動與自噬的關(guān)系進展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年07期

9 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過程中自噬與凋亡關(guān)系的研究[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報;2011年06期

10 王光輝;;自噬與疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2012年03期

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1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機制[A];中國活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強;劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學(xué)藥物靶點研討會論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關(guān)蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2009年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過不同途徑誘導(dǎo)自噬的化合物對Atg9的依賴性不同[A];細胞—生命的基礎(chǔ)——中國細胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

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8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導(dǎo)小鼠肝細胞自噬[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動力改變參與了LRRK2突變導(dǎo)致的自噬[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

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1 賈盛楠;轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

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4 黎炳護;激活TRPV1誘導(dǎo)自噬在血管平滑肌細胞泡沫化中作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳江偉;自噬在椎間盤退變中的作用及機制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王維;NF-κB信號通路參與介導(dǎo)的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

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1 李寧;自噬在嗎啡心肌保護中的作用及機制研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 劉冰;腦缺血預(yù)處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注后自噬及凋亡的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

3 王存凱;microRNA-30a-5p通過抑制自噬阻止肝星狀細胞激活[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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5 唐芙蓉;自噬對奶山羊雄性生殖干細胞生物學(xué)特性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 陳軍童;腎損傷分子1對高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細胞自噬作用的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

7 包勇;Kap1在LBH589誘導(dǎo)的乳腺癌細胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

8 王彬彬;模擬高原缺氧大鼠腸上皮細胞損傷自噬調(diào)控機制的研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 張君莉;NIX在CCCP誘導(dǎo)PC12細胞線粒體自噬調(diào)控作用的研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

10 校鑫;九節(jié)龍皂苷Ⅰ對多種人腦膠質(zhì)瘤細胞系自噬活性增強作用的體外研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

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