本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)保護(hù)素D1通過抑制GSK-3β活性在AD中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用

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【摘要】：目的:阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是癡呆的最常見類型,為一種神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病。糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)與AD的主要病理特征---老年斑沉積、神經(jīng)纖維纏結(jié)及線粒體功能障礙等密切相關(guān)。有研究表明,神經(jīng)保護(hù)素D1(Neuroprotectin D1,NPD1)在AD中能發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,但其作用機(jī)制不明確。本課題以AD的細(xì)胞模型N2a/APP695swe細(xì)胞為研究對象,觀察NPD1對N2a/APP695swe細(xì)胞Aβ42的生成、Tau蛋白磷酸化水平、細(xì)胞凋亡、自噬活性以及GSK-3β活性的影響,并初步探討其作用機(jī)制,以期為NPD1防治AD提供新的理論依據(jù)。方法:將細(xì)胞分為6組:WT組(N2a/WT細(xì)胞)、APP組(N2a/APP695swe細(xì)胞)、對照組(經(jīng)2μM的DMSO處理24h的N2a/APP695swe細(xì)胞)、NPD1組(經(jīng)100n M的NPD1處理24h的N2a/APP695swe細(xì)胞)、SB216763組(經(jīng)5μM的SB216763處理24h的N2a/APP695swe細(xì)胞)及wortmannin組(經(jīng)1μM的wortmannin處理24h的N2a/APP695swe細(xì)胞)。透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬體的變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;ELISA檢測細(xì)胞外Aβ42的含量;Western blot方法檢測細(xì)胞內(nèi)Tau-Ser404、Tau、GSK-3β-Tyr216、GSK-3β、Beclin1、P62、LC3II/LC3I的蛋白表達(dá)水平變化;Real-time q PCR檢測細(xì)胞內(nèi)Beclin1、GSK-3β的m RNA水平變化。結(jié)果:與WT組相比,APP組的Aβ42明顯上升(p0.001),Tau-Ser404/Tau水平明顯上升(p0.01),細(xì)胞凋亡率明顯升高(p0.001),電鏡下觀察到較多包含著胞漿成分的雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體或單層膜結(jié)構(gòu)的自噬溶酶體,細(xì)胞器也發(fā)生不同程度的腫脹,GSK-3β-Tyr216/GSK-3β水平明顯上升(p0.001),Beclin1的m RNA水平及蛋白表達(dá)水平均明顯降低(p0.01,p0.01),LC3II/LC3I的水平明顯降低(p0.01),P62的蛋白表達(dá)水平明顯上升(p0.01);經(jīng)NPD1處理后,與對照組相比,Aβ42明顯降低(p0.001),Tau-Ser404/Tau水平降低(p0.01),細(xì)胞凋亡率明顯降低(p0.001),電鏡下觀察到部分包含著胞漿成分的雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體或單層膜結(jié)構(gòu)的自噬溶酶體,細(xì)胞器形態(tài)正常,GSK-3β-Tyr216/GSK-3β水平降低(p0.01),Beclin1的m RNA及蛋白表達(dá)水平升高(p0.001),LC3II/LC3I的水平升高(p0.001),P62的蛋白表達(dá)水平降低(p0.001);經(jīng)GSK-3β抑制劑SB216763處理后,與對照組相比,Aβ42明顯降低(p0.001),Tau-Ser404/Tau水平降低(p0.01),細(xì)胞凋亡率明顯降低(p0.001),GSK-3β-Tyr216/GSK-3β水平降低(p0.01),Beclin1的m RNA水平及蛋白表達(dá)水平升高(p0.01),LC3II/LC3I的水平升高(p0.01),P62的蛋白表達(dá)水平降低(p0.01);經(jīng)GSK-3β激活劑wortmannin處理后,與對照組相比,Aβ42明顯升高(p0.01),Tau-Ser404/Tau水平升高(p0.05),細(xì)胞凋亡率升高(p0.001),GSK-3β-Tyr216/GSK-3β水平升高(p0.01),Beclin1的m RNA表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平降低(p0.01),LC3II/LC3I的水平降低(p0.01),P62的蛋白表達(dá)水平升高(p0.01)。結(jié)論:NPD1可明顯降低AD細(xì)胞模型N2a/APP695swe細(xì)胞的凋亡率、Aβ42的產(chǎn)生、Tau蛋白的過度異常磷酸化以及增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)自噬的活性,其機(jī)制可能是通過抑制GSK-3β的活性進(jìn)而發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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1 鄧敏貞;黃麗平;方永奇;;石菖蒲揮發(fā)油聯(lián)合人參總皂苷對D-半乳糖聯(lián)合氯化鋁致阿爾茨海默病模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦組織細(xì)胞凋亡的影響[J];中藥材;2015年05期

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本文編號：1258253