本文關(guān)鍵詞：抑郁癥大鼠學(xué)習(xí)記憶缺損以及海馬GAP-43表達(dá)的變化

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【摘要】：目的建立慢性抑郁癥Sprague-Dawley大鼠模型,通過(guò)避暗試驗(yàn)觀察抑郁癥模型大鼠不同時(shí)間段學(xué)習(xí)記憶功能,檢測(cè)神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43(neuronal growth associated protein, GAP-43)在慢性抑郁癥模型大鼠海馬組織中表達(dá),探討GAP-43與學(xué)習(xí)記憶之間的關(guān)系。方法1.健康雄性SD大鼠96只,隨機(jī)分為慢性應(yīng)激抑郁癥組、正常對(duì)照組,抑郁癥組分21 d,42 d,60 d,3個(gè)亞組,每組匹配相對(duì)數(shù)量的正常大鼠做對(duì)照。通過(guò)認(rèn)知功能試驗(yàn)觀察大鼠學(xué)習(xí)記憶改變,通過(guò)認(rèn)知功能試驗(yàn)觀測(cè)指標(biāo),研究大鼠各個(gè)時(shí)間段學(xué)習(xí)記憶的變化。2.實(shí)驗(yàn)組大鼠均采用單籠飼養(yǎng),飼養(yǎng)環(huán)境相同,避暗試驗(yàn)檢測(cè)后,無(wú)痛處死抑郁癥模型組及空白對(duì)照組大鼠8只,剩余大鼠進(jìn)入下一亞組。慢性郁癥模型組每亞組于21d,42 d,60d時(shí)行避暗實(shí)驗(yàn)后無(wú)痛處死大鼠,模型組每亞組取大鼠24只,空白對(duì)照組取8只；檢測(cè)GAP-43mRNA及蛋白表達(dá)表達(dá)。每模型實(shí)驗(yàn)組大鼠16只用乙醚麻醉斷頭,無(wú)RNA酶試驗(yàn)臺(tái)內(nèi)快速取出海馬,并液氮冷藏后迅速移至-80℃冰箱備用,另8只經(jīng)吸入乙醚后用4%多聚甲醛灌注、蔗糖梯度脫水后,應(yīng)用OTC (Sakura, USA)包埋固定,-80℃冰箱保存以備組織切片用。應(yīng)用免疫組化、RT-PCR和western blot等技術(shù)方法研究慢性應(yīng)激抑郁癥模型大鼠海馬GAP-43mRNA及相關(guān)蛋白的表達(dá)并探討與學(xué)習(xí)及空間記憶的關(guān)系。結(jié)果1.慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠制作成功后大鼠有抑郁癥表現(xiàn),參照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),確定大鼠抑郁癥模型試驗(yàn)建立,模型制作成功率為94.9%。模型制作成功后,大鼠需不斷進(jìn)行刺激,以防大鼠可能有自愈可能,不再有抑郁癥表現(xiàn),使實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差�？瞻捉M避暗試驗(yàn)結(jié)果潛伏期(LT)為(56.00±2.71s)、穿梭次數(shù)(EN)為(3.29+1.14次),抑郁癥模型組：模型成功后21d(即模型當(dāng)天至成功第21 d)避暗試驗(yàn)結(jié)果的LT為(47.81±3.31s)、EN為(2.760.92次)；慢性抑郁癥模型組42 d避暗試驗(yàn)結(jié)果為L(zhǎng)T(38.51±1.28s)、EN為(5.15±1.21次)；慢性抑郁癥模型組60 d避暗試驗(yàn)結(jié)果(46.73±2.61s)、EN為(2.35士1.01次),慢性應(yīng)激性抑郁癥大鼠模型組與對(duì)照組比學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降(P0.05),實(shí)驗(yàn)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能有所改變。2.分子生物學(xué)檢測(cè)(1)免疫組織化學(xué)結(jié)果：結(jié)果顯示GAP-43在海馬細(xì)胞中有表達(dá),屬于胞漿蛋白,顯微鏡下觀測(cè)呈橙黃色。慢性應(yīng)激抑郁癥模型組與空白對(duì)照組陽(yáng)性細(xì)胞百分率表達(dá)有明顯差異性,統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示P0.05,有統(tǒng)計(jì)意義,對(duì)照組高于模型組,抑郁癥模型組間比較,陽(yáng)性細(xì)胞百分率42 d明顯低于21d組、60 d組,42 d組最低(P0.05)。(2)RT-PCR反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試驗(yàn)結(jié)果：紫光燈下觀察,結(jié)果顯示GAP-43在海馬細(xì)胞中有表達(dá),在marker的對(duì)照下目的條帶清晰可見(jiàn),測(cè)定各條帶OD值,與GADPH管家基因比值進(jìn)行校對(duì),慢性應(yīng)激抑郁癥模型組與空白對(duì)照組有明顯差異,統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算結(jié)果,P0.05,為有統(tǒng)計(jì)意義,對(duì)照組高于模型組。模型組內(nèi)比較,光密度校對(duì)值點(diǎn)燃21 d、60 d組時(shí)明顯高于42 d組,42 d組最低(P0.05)。(3) Western blot結(jié)果：免疫發(fā)光曝光后,結(jié)果顯示GAP-43在海馬細(xì)胞中有表達(dá),在marker的對(duì)照下目的條帶清晰可見(jiàn),測(cè)定各條帶OD值,與GADPH管家基因比值進(jìn)行校對(duì),統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算結(jié)果,P0.05,為有統(tǒng)計(jì)意義,對(duì)照組高于模型組。模型組內(nèi)比較,光密度校對(duì)值點(diǎn)燃21 d、60 d組時(shí)明顯高于42d組,42 d組最低,P0.05,有統(tǒng)計(jì)意義。結(jié)論1.慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能有一定缺損,而且學(xué)習(xí)記憶能力的降低隨時(shí)間推移不斷變化,初期和末期明顯下降,中期下降更為明顯。2.GAP-43與慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能有關(guān),其表達(dá)呈明顯下降趨勢(shì),且以中期下降尤為明顯,提示：GAP-43下降程度與學(xué)習(xí)記憶下降的程度相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R749.4
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本文編號(hào)：1248727