本文關(guān)鍵詞：α-干擾素對(duì)神經(jīng)細(xì)胞中p11、5-HTR1b和5-HTR4表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： p11 5-HTR1b/4 α-干擾素 抑郁癥

【摘要】：背景抑郁癥是應(yīng)用α-干擾素的一種重要副作用,但α-干擾素誘導(dǎo)抑郁癥的分子機(jī)制還不清楚。一些研究表明5-HTR1b(5-羥色胺受體1b)和5-HTR4(5-羥色胺受體4)在p11(S100鈣結(jié)合蛋白A10,S100A10)相關(guān)抗抑郁效應(yīng)中發(fā)揮著重要作用,而且我們的前期研究發(fā)現(xiàn)α-干擾素能夠下調(diào)p11水平。所以我們猜想α-干擾素誘導(dǎo)的抑郁可能是由p11和5-羥色胺受體介導(dǎo)的。為了發(fā)現(xiàn)這些分子在α-干擾素誘導(dǎo)抑郁中的功能,我們研究了α-干擾素(IFN-α)對(duì)人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-sy5y)中5-HTR1b和5-HTR4表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)Balb/c小鼠腹腔注射IFN-α能夠延長(zhǎng)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間。IFN-α處理能夠顯著下調(diào)SH-sy5y細(xì)胞中5-HTR1b和5-HTR4的蛋白水平,而且這種改變呈現(xiàn)出時(shí)間和劑量依賴。通過過表達(dá)和沉默實(shí)驗(yàn),我們揭示了5-HTR1b和5-HTR4是p11的下游效應(yīng)蛋白。過表達(dá)p11有效逆轉(zhuǎn)了IFN-α對(duì)5-HTR1b和5-HTR4的下調(diào)作用。這些結(jié)果表明IFN-α能夠下調(diào)p11,進(jìn)而下調(diào)5-HTR1b和5-HTR4。p11被認(rèn)為是5-HTR1b和5-HTR4的一個(gè)有效調(diào)控因子,因此,p11可能作為IFN-α誘導(dǎo)抑郁癥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和療效監(jiān)測(cè)的一個(gè)潛在靶標(biāo)。目的通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和小鼠行為實(shí)驗(yàn),研究IFN-α對(duì)p11、5-HTR1b和5-HTR4表達(dá)的影響,以及p11對(duì)5-HTR1b、5-HTR4表達(dá)的影響,從而闡述5-HTR1b、5-HTR4和p11參與IFN-α誘導(dǎo)抑郁的機(jī)制。方法1.動(dòng)物和藥物作用:實(shí)驗(yàn)用小鼠是成年雄性野生型Balb/c鼠。連續(xù)十天注射hIFN-α-2b(1000 IU/g/天,腹腔注射,總體積0.2 m L),對(duì)照組小鼠是腹腔注射同等體積的PBS。小鼠注射時(shí)間是每天上午九點(diǎn)。2.小鼠行為實(shí)驗(yàn):把小鼠逐個(gè)輕柔放入一個(gè)玻璃缸中(高30cm,直徑10cm),玻璃缸中盛有溫度為24-26℃的水,水深18 cm,游泳6分鐘。累計(jì)第2-6分鐘內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間以分析行為。通過遠(yuǎn)端尾部(1-1.5 cm)將小鼠懸掛在一個(gè)平坦的金屬表面上,使其懸掛點(diǎn)距離地面40cm。記錄第2-6min的不動(dòng)時(shí)間,作為抑郁樣行為的一個(gè)指標(biāo)。3.細(xì)胞培養(yǎng):人神經(jīng)母瘤細(xì)胞系培養(yǎng)在含有10%胎牛血清的DMEM中,并含有50 U/m L青霉素,50 mg/m L鏈霉素,37°C,含有5%CO2。所有實(shí)驗(yàn)都是在細(xì)胞融合率達(dá)到80%-90%時(shí)進(jìn)行的。4.hIFN-a-2b處理:細(xì)胞劑量依賴實(shí)驗(yàn),用一系列濃度(0,50,500,1000,2000,and3000 IU/m L)的hIFN-α-2b處理。細(xì)胞時(shí)間依賴實(shí)驗(yàn),作用時(shí)間依次為0,6,12,24,36,和48小時(shí),用單一濃度即1000 IU/m L的hIFN-α-2b處理。5.質(zhì)粒構(gòu)建:構(gòu)建過表達(dá)p11的質(zhì)粒p11 c DNA 3.0和使p11沉默的質(zhì)粒p11-Si RNA。6.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染:用轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體2000(Invitrogen,USA)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒包括p11-pc DNA3.0,pc DNA3.0(對(duì)照),p11-Si RNA,and Si RNA-control(對(duì)照)。在轉(zhuǎn)染后的第5小時(shí),用PBS清洗細(xì)胞,然后繼續(xù)用完全DMEM培養(yǎng)。7.胞膜(cytomembrane)蛋白抽提:用Mem-PER真核生物膜蛋白提取試劑盒(Thermo Fisher Scientific,美國(guó))。用抗管蛋白(Tublin)抗體(Abcam,USA)檢測(cè)胞膜蛋白的純凈度。8.Western blot:Tricine-SDS-PAGE凝膠電泳檢測(cè)p11、5-HTR1b、5-HTR4的蛋白水平9.RNA抽提:用RNA提取試劑盒(Minico,USA)提取總RNA。10.RT-PCR.使用SuperscriptⅢ逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Invitrogen,USA).通過RT-PCR檢測(cè)c DNA。11.統(tǒng)計(jì)分析所有實(shí)驗(yàn)非參數(shù)未配對(duì)T檢驗(yàn)的P值都是由Prism軟件計(jì)算的(Graph Pad Software Inc.)。。F檢驗(yàn)用來比較差異。我們認(rèn)為P值0.05具有顯著性:*,P0.05;**,P0.01。結(jié)果1.應(yīng)用IFN-α使小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)。2.IFN-α能夠顯著下調(diào)SH-sy5y細(xì)胞中5-HT1Rb、5-HTR4的蛋白水平,且呈時(shí)間和劑量依賴。3.IFN-α能夠下調(diào)SH-sy5y細(xì)胞胞膜上p11、5-HTR1b和5-HTR4的蛋白水平。4.過表達(dá)p11有效逆轉(zhuǎn)了IFN-α引起的5-HTR1b和5-HTR4下調(diào)。結(jié)論p11通過影響5-HTR1b/4的蛋白水平參與α-干擾素誘導(dǎo)的精神抑郁。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.4

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 詹寶豐;黃翠娟;;α-干擾素治療丙肝的臨床效果觀察與評(píng)估[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2011年27期

2 馬蓮榮,段建平,桑麗平,趙建平,霍克強(qiáng);用人脾塊制備α-干擾素的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;1987年02期

3 李春元;;α-干擾素治療原發(fā)性血小板增多癥[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);1989年02期

4 楊淑麗,孫鐵流;α-干擾素在慢性丙型病毒性肝炎治療中的應(yīng)用[J];山東醫(yī)藥;1997年06期

5 楊鳳娥,陳道純,黃淑樺;α-干擾素治療原發(fā)性血小板增多癥5例報(bào)告[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年03期

6 王雷;α-干擾素滴鼻治療病毒性上呼吸道感染療效觀察[J];職業(yè)與健康;2000年12期

7 楊靜,郝繼亭;α-干擾素致血小板減少1例[J];藥物流行病學(xué)雜志;2001年04期

8 杜桂彬;α-干擾素治療小兒難治性血小板減少性紫癜的效果觀察[J];南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年04期

9 魏民 ,侯欽麗 ,胡偉 ,張正福 ,王力群 ,付聰;α-干擾素引起聽力下降及頑固性耳鳴一例[J];中國(guó)藥物與臨床;2002年04期

10 王謙,胡理明;α-干擾素治療特發(fā)性血小板減少性紫癜21例療效分析[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2004年12期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐翠華;;α-干擾素治療原發(fā)性干燥綜合征的臨床觀察[A];全國(guó)自身免疫性疾病專題研討會(huì)暨第十一次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 智宏民;李超斌;;α-干擾素的臨床應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)感染病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

3 邱賢文;刁飛宇;蘇薇薇;;α-干擾素質(zhì)粒DNA-脂質(zhì)體制劑藥效及安全性評(píng)價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

4 楊梅;程安春;汪銘書;龔永強(qiáng);陳斌;;重組鴨α-干擾素抗鴨乙型肝炎病毒人工感染鴨的實(shí)驗(yàn)研究[A];第四屆第九次全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

5 徐玉琴;馬桂云;于新江;徐建國(guó);;腺肽α1聯(lián)合α-干擾素治療慢性乙型肝炎療效觀察[A];第五屆全國(guó)肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

6 崔速南;汪明明;李新立;楊公煒;;α-干擾素對(duì)肝內(nèi)結(jié)締組織生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[A];第五屆全國(guó)肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 劉穎;劉華蘭;楊利國(guó);陳煥春;郭愛珍;;奶牛α-干擾素克隆表達(dá)和生物學(xué)活性分析[A];中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)第24次繁殖學(xué)術(shù)年會(huì)暨國(guó)家奶牛/肉牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系第一屆全國(guó)牛病防治學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

8 謝龍騰;盛吉芳;;慢乙肝與肝炎肝硬化患者的α-干擾素及其抗體水平比較分析[A];第二屆傳染病診治高峰論壇暨2009年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

9 謝敏;譚行華;高倩;;α-干擾素治療病毒性肝炎致白細(xì)胞減少的中西醫(yī)治療研究進(jìn)展[A];全國(guó)第3屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)傳染病專業(yè)委員會(huì)第2屆委員會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 曹婕;龔國(guó)忠;;HCV NS5A對(duì)α-干擾素信號(hào)傳遞途經(jīng)的影響[A];第一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 萬同己;抗乙肝病毒的聯(lián)合用藥[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 丁華夏;α-干擾素對(duì)神經(jīng)細(xì)胞中p11、5-HTR1b和5-HTR4表達(dá)的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2016年

2 韓森;豬α-干擾素基因的原核表達(dá)及活性分析[D];浙江大學(xué);2006年

3 趙娜;家蠶高效表達(dá)犬α-干擾素的研究[D];浙江大學(xué);2007年

4 楊梅;重組鴨α-干擾素抗鴨乙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)感染研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

5 賈自文;豬α-干擾素的原核表達(dá)及其活性測(cè)定[D];揚(yáng)州大學(xué);2009年

6 樊興冬;犬α-干擾素基因的克隆、原核表達(dá)及生物學(xué)活性鑒定[D];齊齊哈爾大學(xué);2013年

7 陸憲忠;慢性乙肝患者血清一氧化氮的表達(dá)與α-干擾素抗病毒應(yīng)答的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2008年

8 徐美琴;三氧化二砷對(duì)SLE患者Toll樣受體9、干擾素調(diào)節(jié)因子5基因表達(dá)及α-干擾素分泌的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

9 戶國(guó)達(dá);新型重組豬α-干擾素的制備及其活性分析[D];重慶理工大學(xué);2013年

10 鄧成鋼;犬IFN-α基因的克隆、表達(dá)及其生物學(xué)活性的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：1225895