發(fā)布時(shí)間：2017-11-21 15:00

  本文關(guān)鍵詞：抗Aβ42單鏈抗體的性質(zhì)與功能分析

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【摘要】：阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease,AD）是最常見的神經(jīng)退行性疾病，平均在8.5個(gè)人中就會(huì)有一個(gè)人被診斷患有老年癡呆疾病。AD的主要病理學(xué)變化表現(xiàn)為細(xì)胞外β-淀粉樣蛋白（amyloid-beta, Aβ)沉積形成淀粉樣斑塊（senile plaques, SP）和細(xì)胞內(nèi)形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles, NFT），包括腦內(nèi)Tau蛋白的過度磷酸化。 AD病因及發(fā)病機(jī)制迄今尚不明確,淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說是過去25年中對(duì)于AD的分子理療模型中最有影響力的假說。該假說認(rèn)為APP降解產(chǎn)生過多的Aβ42是AD發(fā)病機(jī)制中的起始事件，接著引起一系列病理學(xué)變化，進(jìn)而導(dǎo)致癡呆的發(fā)生，所以Aβ42異常分泌和產(chǎn)生過多是AD發(fā)病的核心環(huán)節(jié)。 現(xiàn)有的對(duì)于AD的被動(dòng)免疫治療中多采用人源化的多克隆抗體或單克隆抗體，但是由于其分子大不易穿過血腦屏障不能快速有效清除腦內(nèi)的Aβ42，并且還會(huì)引起免疫應(yīng)答的副作用而被限制用于臨床上。因此，構(gòu)建小分子且無免疫原性的抗體片段成為研究的熱點(diǎn)。 本課題組的張媛博士從構(gòu)建的抗體庫中篩選得到能夠特異性識(shí)別Aβ42寡聚體的單鏈抗體菌株，該菌株經(jīng)過測序與Genbank比對(duì)表明其具有典型的抗體可變區(qū)。本研究對(duì)此單鏈抗體菌株進(jìn)行誘導(dǎo)，表達(dá)出該單鏈抗體蛋白。然后利用分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等方法對(duì)其性質(zhì)和功能進(jìn)行分析。首先通過Dot blot和Western blot方法證明了單鏈抗體能夠特異性識(shí)別Aβ42寡聚體。然后我們用間接ELISA方法測定單鏈抗體對(duì)Aβ42寡聚體的結(jié)合力。結(jié)果顯示兩種單鏈抗體都可以在nM級(jí)別水平發(fā)揮作用。進(jìn)一步用ELISA方法檢測了單鏈抗體的親和力，結(jié)果表明其對(duì)Aβ42寡聚體有較強(qiáng)的親和力。ThT-F方法檢測結(jié)果表明單鏈抗體能夠抑制Aβ42的聚集以及誘導(dǎo)Aβ42聚集體的解聚。最后我們用MTT方法在細(xì)胞學(xué)水平檢測了單鏈抗體對(duì)于Aβ42引起的細(xì)胞毒性作用，，結(jié)果表明單鏈抗體可以提高細(xì)胞的存活率，并且其對(duì)于毒性的抑制作用呈現(xiàn)濃度的依賴性。 上述結(jié)果為設(shè)計(jì)和研制免疫預(yù)防與治療AD的新型小分子抗體藥物提供了依據(jù)并奠定了基礎(chǔ)，作為臨床診斷和AD治療的免疫制劑具有廣闊的應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R749.16

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