本文關(guān)鍵詞：NEDD4單核苷黢多態(tài)性與中國漢族精神分裂癥的關(guān)聯(lián)研究

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【摘要】：目的精神分裂癥是一種遺傳度為80%的復(fù)雜疾病,目前認(rèn)為精神分裂癥的發(fā)生是早期神經(jīng)發(fā)育異常的基礎(chǔ)上,受多個微效基因調(diào)控及環(huán)境因素影響。泛素蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin proteasome system, UPS)是翻譯后修飾機制之一,與神經(jīng)系統(tǒng)的功能聯(lián)系密切,目前已有研究認(rèn)為精神分裂癥患者腦內(nèi)存在涉及UPS的蛋白功能或基因表達異常。神經(jīng)前體細(xì)胞表達發(fā)育進行性下調(diào)基因4 (neural precursor cell expressed developmentally down-regulated 4, NEDD4)是一種泛素連接酶,可調(diào)節(jié)谷氨酸受體(glutamate receptor 1, GluR1)的周轉(zhuǎn),并參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的分化過程。近年來,國外已通過動物模型及尸檢研究證實NEDD4蛋白參與神經(jīng)退行性疾病的病理過程,但國內(nèi)外尚缺乏探討NEDD4基因與精神分裂癥相關(guān)性的研究。為此,本研究首先通過病例對照關(guān)聯(lián)研究方法,檢測NEDD4基因5個單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)位點與精神分裂癥及其臨床癥狀的相關(guān)性,然后通過陽性關(guān)聯(lián)SNPs位點的初步功能研究,以期解釋Nedd4蛋白參與精神分裂癥發(fā)病的可能機制。方法本研究為病例對照研究,利用國際人類基因組單體型圖計劃中中國漢族人群NEDD4基因的SNPs數(shù)據(jù)信息與軟件選擇標(biāo)簽SNPs的方法相結(jié)合,選擇了位于3’非翻譯區(qū)(3'untranslated region,3'UTR)或外顯子的共5個SNPs位點(rs3088077、rs11550869、rs7162435、rs2303579和rs62043855)。通過Taqman探針法,對464例中國漢族精神分裂癥患者及487名正常對照進行5個SNPs位點的等位基因分型,探討NEDD4基因5個SNPs位點與精神分裂癥的相關(guān)性。另外,使用自制的一般資料調(diào)查表收集一般人口學(xué)資料,以陽性與陰性癥狀量表(Positive and Negative Syndrome Scale, PANSS)評估患者精神病性癥狀的特點及嚴(yán)重程度,探索NEDD4基因多態(tài)性與精神分裂癥臨床癥狀的相關(guān)性。最后,根據(jù)其在基因上位置的不同,分別利用不同的分子生物學(xué)技術(shù)初步探討陽性關(guān)聯(lián)SNPs位點堿基變異對NEDD4基因功能的影響。對于3'UTR的SNPs位點,利用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng),構(gòu)建NEDD4基因3'UTR的野生型,利用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain reaction, PCR)介導(dǎo)的定點突變對野生型3'UTR點突變,構(gòu)造突變型重組質(zhì)粒,將野生型及突變型質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞后檢測熒光素酶報告基因的活性,通過比較熒光素酶活性的差異檢測SNPs點突變對基因表達的影響；對于位于外顯子的SNPs位點,分別構(gòu)建NEDD4基因編碼序列的野生型與突變型重組質(zhì)粒,利用免疫印跡及免疫沉淀的方法檢測NEDD4蛋白對底物蛋白GluR1的泛素化水平。結(jié)果1、病例組及對照組在rs3088077(等位基因：χ2=18.024,P0.001,基因型：χ2=16.634, P0.001)、rs7162435(等位基因：χ2=6.771,P=0.009,基因型：χ 2=7.352,P=0.025)及rs2303579(等位基因：χ 2=11.253,P=0.001,基因型：χ2=12.248,P=0.002)3個SNPs位點的等位基因頻率及基因型頻率分布的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；rs11550869(等位基因：χ2=0.684,P=0.408,基因型：χ 2=0.636,P=0.728)、rs62043855(等位基因：χ 2=1.090,P=0.296,基因型：χ 2=1.156,P=0.561)2個SNPs位點的等位基因頻率及基因型頻率分布的差異均不具有統(tǒng)計學(xué)意義；2、NEDD4基因rs7162435的TT基因型在PANSS量表中的興奮敵對因子得分(14.53±3.925)明顯升高,與其他兩種基因型的得分均值相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=3.551,P=0.029)；多元回歸模型的結(jié)果顯示,rs7162435多態(tài)性參與興奮敵對因子得分的多元回歸方程,決定系數(shù)R2顯示rs7162435、起病形式及年齡可以解釋興奮敵對得分的3.5%；3、NEDD4基因全長的野生型3'UTR成功構(gòu)建入熒光素酶報告載體PGLO中,成功構(gòu)建rs3088077、rs7162435單個點突變及兩個位點雙突變的突變型重組質(zhì)粒；與空載體組相比,不論野生型還是突變型,NEDD4基因全長的3'UTR均能夠下調(diào)熒光素酶活性(P均0.001)；但熒光素酶表達并未因rs3088077及rs7162435堿基的突變而存在差異；4、NEDD4基因的編碼序列成功構(gòu)建入真核細(xì)胞表達載體pcDNA3.1,在野生型的基礎(chǔ)上成功點突變rs2303579；突變型組與野生型相比,NEDD4蛋白對底物蛋白GluR1泛素化水平的差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.476)。結(jié)論1、NEDD4基因的SNPs位點rs3088077、rs7162435及rs2303579與精神分裂癥的發(fā)生可能存在相關(guān)性,rs7162435的TT基因型可增加精神分裂癥患者興奮敵對的風(fēng)險；NEDD4基因可能是參與精神分裂癥發(fā)病機制中的一個微效基因,且該基因上的SNPs位點rs3088077、rs7162435及rs2303579可能具有遺傳標(biāo)記功能；2、NEDD4基因的全長3’UTR能夠顯著下調(diào)熒光素酶基因的表達活性,但重組質(zhì)粒中rs3088077及rs7162435堿基的突變對熒光素酶活性影響不明顯,rs2303579的突變體NEDD4蛋白對GluR1的泛素化水平與野生型NEDD4蛋白的作用一致,以上3個多態(tài)性位點對NEDD4基因功能的影響均需進一步深入研究；3、泛素蛋白酶體系統(tǒng)、谷氨酸系統(tǒng)及神經(jīng)發(fā)育三大系統(tǒng)緊密聯(lián)系、相互作用,可能共同參與到精神分裂的發(fā)病機制中。
【關(guān)鍵詞】：精神分裂癥 神經(jīng)前體細(xì)胞表達發(fā)育進行性下調(diào)基因4 單核苷酸多態(tài)性 基因表達 泛素蛋白酶體系統(tǒng)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.3
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符號說明12-13
• 前言13-19
• 第一部分 NEDD4多態(tài)性與精神分裂癥及其臨床特征的相關(guān)性19-33
• 對象與方法19-24
• 結(jié)果24-29
• 第一部分 討論29-33
• 第二部分 3個陽性關(guān)聯(lián)SNPs位點的初步功能實驗33-57
• 材料與方法33-48
• 結(jié)果48-55
• 第二部分 討論55-57
• 結(jié)論57-58
• 創(chuàng)新性與局限性58-59
• 附圖表59-68
• 參考文獻68-75
• 致謝75-76
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄76-77
• 附件77

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 畢曉姣;NEDD4單核苷黢多態(tài)性與中國漢族精神分裂癥的關(guān)聯(lián)研究[D];山東大學(xué);2015年

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本文編號：1085076