本文關(guān)鍵詞：早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子EGR1在體外對(duì)Aβ40表達(dá)的影響

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【摘要】：背景早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子(Early growth response 1,EGR1)基因廣泛存在于人和動(dòng)物的細(xì)胞內(nèi),因其能快速表達(dá)而被命名,屬于即刻早期基因家族成員,家族成員多達(dá)30多種,均含有鋅指結(jié)構(gòu)編碼區(qū),基因結(jié)構(gòu)具有高度的同源性。EGR1信號(hào)通路極其復(fù)雜,涉及多種反應(yīng)因子和生化反應(yīng),具有復(fù)雜的生物學(xué)功能,既能參與細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)控,進(jìn)行細(xì)胞物質(zhì)運(yùn)輸并營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,又能對(duì)學(xué)習(xí)和記憶過程進(jìn)行精細(xì)的調(diào)節(jié)。研究表明EGR1不僅能形成長(zhǎng)時(shí)程記憶參與認(rèn)知過程,還能在p53基因的協(xié)同下加速機(jī)體的衰老,參與阿爾茲海默病的發(fā)病過程。AD的發(fā)病機(jī)制目前存有多種假說,主要包括Aβ(Amyloidβ-protein,Aβ)假說和Tau蛋白假說,此外還有神經(jīng)血管假說,膽堿能假說等。Aβ假說和Tau蛋白假說因與AD的組織病理關(guān)系密切而得到廣泛的關(guān)注和研究。Aβ蛋白的沉積是AD組織病理老年斑形成的主要原因,主要是由大小為39-43個(gè)氨基酸構(gòu)成的小分子肽類。正常情況下淀粉樣前體蛋白(Amyloid precursor protein,APP)經(jīng)過α剪切酶的作用不產(chǎn)生Aβ蛋白,而產(chǎn)生對(duì)神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作用的s APPα,當(dāng)APP在一定條件下進(jìn)入非正常代謝途徑時(shí),β-分泌酶(Beta-secretase Enzyme,BACE1)作用于APP,剪切產(chǎn)生APP-βCTF和s APPβ,APP-βCTF能進(jìn)一步被γ分泌酶作用,最后釋放Aβ蛋白。Aβ蛋白的降解有細(xì)胞內(nèi)吞噬、細(xì)胞外降解、血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)三條途徑,基于淀粉樣蛋白產(chǎn)生和清除平衡發(fā)生障礙而導(dǎo)致Aβ蛋白聚集。BACE1和γ分泌酶是APP異常剪切的關(guān)鍵酶,γ分泌酶為四聚體結(jié)構(gòu),由PS1、APH1、PSEN2、NCT四個(gè)亞基構(gòu)成,其中PS1(Presenilin-1,早老蛋白1)是其催化亞基,起著催化核心的作用。目前研究表明EGR1在AD的發(fā)病中同Aβ假說和Tau蛋白假說均有密切的聯(lián)系。目的研究早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子EGR1在體外對(duì)Aβ蛋白表達(dá)的影響。方法構(gòu)建過表達(dá)EGR1質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染U87MG細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,以轉(zhuǎn)染CMV-EGFPKanamycin空白質(zhì)粒作為對(duì)照組,6h后用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效果。用q RT-PCR法檢測(cè)兩組EGR1m RNA相對(duì)表達(dá)水平;收集細(xì)胞培養(yǎng)液用ELISA法檢測(cè)Aβ40的表達(dá);提取總蛋白用Western blot法檢測(cè)BACE1和PS1的表達(dá)。結(jié)果質(zhì)粒成功地轉(zhuǎn)染到兩組細(xì)胞內(nèi),q RT-PCR結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組EGR1m RNA表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=18.755;P0.001);ELISA結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組Aβ40平均濃度(0.365mg/L)較對(duì)照組平均濃度(0.191mg/L)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-22.839;P0.001);Western blot結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組BACE1表達(dá)較對(duì)照組增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=212.781;P0.001);兩組PS1蛋白表達(dá)無明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.91;P=0.367)。結(jié)論1.體外過表達(dá)的EGR1可以使Aβ40表達(dá)增加,這可能與BACE1的上調(diào)有關(guān)。2.體外過表達(dá)的EGR1可能不會(huì)使PS1表達(dá)增加,但不能排除其通過γ分泌酶或Tau蛋白的作用而影響Aβ40的分泌。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茲海默病 Aβ40 β分泌酶 EGR1
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文縮略詞對(duì)照表10-11
• 前言11-15
• 材料及方法15-26
• 結(jié)果26-30
• 討論30-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 綜述 EGR1對(duì)阿爾茲海默病發(fā)病機(jī)制的研究及治療40-57
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的論文57-58
• 致謝58

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