本文關(guān)鍵詞：BACE1基因啟動子核心區(qū)域的研究

  更多相關(guān)文章： BACE1 啟動子 基因轉(zhuǎn)錄 順式作用元件

【摘要】：目的：確定BACE1基因啟動子的核心區(qū)域，尋找對于BACE1基因的轉(zhuǎn)錄起著關(guān)鍵作用的順式作用元件和最小啟動子區(qū)域，揭示BACE1基因核心啟動子的結(jié)構(gòu)并研究相應的功能。 方法：在前期研究的基礎(chǔ)上繼續(xù)構(gòu)建含有不同區(qū)域的BACE1基因啟動子-熒光素酶報告基因載體。用常規(guī)方法培養(yǎng)人胚腎細胞HEK293，用Invitrogen公司的轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000將構(gòu)建的含有不同區(qū)域的BACE1基因啟動子-熒光素酶報告基因載體轉(zhuǎn)染HEK293并使其在細胞內(nèi)表達熒光素酶。用Promega公司的雙熒光素酶檢測試劑測定細胞裂解液熒光素酶的活性并用內(nèi)參照載體的活性進行校準，最終活性比值反映BACE1基因啟動子的活性，然后比較其活性在不同載體之間的差異，確定具有啟動子活性的最小區(qū)域的5’端邊界和3’端邊界。在此基礎(chǔ)上，，以p3BU-1149/-400或p3BU-583/-400為模板，通過基因定點突變確定BACE1候選順式作用元件的核心序列，通過構(gòu)建相應的反向突變質(zhì)粒來驗證順式作用元件的功能，并研究各順式作用元件間的相互作用。 結(jié)果：成功構(gòu)建一系列含有不同區(qū)域的BACE1基因啟動子-熒光素酶報告基因載體，最長的插入片段為874bp，包含BACE1的翻譯起始位點上游1273到400的序列，即B1U-1273/-400，繼續(xù)刪切并轉(zhuǎn)染，5’刪切分析發(fā)現(xiàn)-583/-574和-560/-540這兩個區(qū)域有可能含有啟動子功能發(fā)揮所需的元件。3’刪切分析發(fā)現(xiàn)-480可能是BACE1啟動子活性所必需的。-510/-480對于BACE1的啟動子活性起著關(guān)鍵作用。-550/-480可能是BACE1基因的啟動子核心區(qū)域。通過基因定點突變發(fā)現(xiàn)578G/A，510A/C附近各存在一個功能性的順式作用元件區(qū)域而且各順式作用元件在影響B(tài)ACE1啟動子活性方面具有協(xié)同作用，將這兩個順式作用元件序列分別命名為TCE1，TCE2，TCE1是一個高度保守的近端激活因子，TCE1與核心啟動子之間間隔的堿基個數(shù)而不是堿基的種類對基因的轉(zhuǎn)錄有重要作用，TCE2與BACE1的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)。通過查詢數(shù)據(jù)庫及5’RACE的結(jié)果發(fā)現(xiàn)BACE1的核心啟動子區(qū)域不含有任何已知的經(jīng)典核心啟動子元件。 結(jié)論：通過實驗已經(jīng)成功找到了BACE1基因啟動子的核心區(qū)域，而且確定了兩個控制BACE1轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵元件TCE1，TCE2，這兩個元件可以相互作用，其中TCE1是一個高度保守的近端激活因子，TCE2與BACE1的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)。最終發(fā)現(xiàn)BACE1的核心啟動子區(qū)域不含有任何已知的經(jīng)典核心啟動子元件，這提示還需更深入的研究來揭秘其核心啟動子區(qū)域的結(jié)構(gòu)和功能。
【關(guān)鍵詞】：BACE1 啟動子 基因轉(zhuǎn)錄 順式作用元件
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10-12
• 1 材料和方法12-26
• 1.1 材料12-13
• 1.2 方法13-26
• 2 結(jié)果26-44
• 2.1 確定具有啟動子活性的最小區(qū)域的 5’端邊界26-29
• 2.2 確定具有啟動子活性的最小區(qū)域的 3’端邊界29-31
• 2.3 確定順式作用元件區(qū)域31-34
• 2.4 兩個順式作用元件在影響 BACE1 啟動子活性方面具有協(xié)同作用34-37
• 2.5 確定上述兩個順式作用元件的堿基構(gòu)成37-39
• 2.6 TCE1 是一個高度保守的近端激活因子39-42
• 2.7 BACE1 核心啟動子不包含經(jīng)典的核心啟動子元件42-44
• 3 討論44-46
• 參考文獻46-50
• 全文總結(jié)50-51
• 文獻綜述51-58
• 參考文獻55-58
• 致謝58-59
• 攻讀學位期間的研究成果及發(fā)表的學術(shù)論文題目59-60

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1 何文s

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