本文關(guān)鍵詞：在血管性癡呆發(fā)生過(guò)程中tau蛋白影響囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)體亞型的相關(guān)性分析

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【摘要】：研究背景和目的血管性Vascular dementia (VaD)癡呆,是一種與年齡相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病,其特征主要表現(xiàn)在由于慢性腦血流降低(CBF)而導(dǎo)致的認(rèn)知功能的障礙,是僅次于阿爾茨海默病的Alzheimer's disease (AD)的第二大疾病,發(fā)生于約20%的癡呆患者中,到2050年,預(yù)計(jì)這些數(shù)字還會(huì)增長(zhǎng)3倍。因此,血管性癡呆嚴(yán)重威脅著世界。然而,給予血管性癡呆一個(gè)明確的,易接受的,統(tǒng)一的診斷和治療的標(biāo)準(zhǔn)目前任然十分困難。主要的原因是因?yàn)樵趶?fù)雜的腦血管病理?xiàng)l件,風(fēng)險(xiǎn)因素,進(jìn)程及嚴(yán)重程度下,血管性癡呆可以表現(xiàn)為多樣性及復(fù)雜性。為了更好地理解血管性癡呆,動(dòng)物模型常常作為研究血管性癡呆發(fā)病機(jī)制和治療的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。我們的研究是通過(guò)腹腔注射硝普鈉及間斷大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎(BCCAO)建立慢性缺血狀態(tài)下的血管性癡呆模型,探討tau蛋白,PSD-95, vGluTs, vAChT, vGAT與血管癡呆發(fā)病的可能機(jī)制。實(shí)驗(yàn)一、慢性缺血致血管癡呆性大鼠模型的制備一.研究目的觀察慢性腦缺血致血管癡呆性大鼠行為學(xué)變化的特點(diǎn)。二.研究方法2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：選取Sprague-Dawley大鼠32只。實(shí)驗(yàn)前,將大鼠置于水迷宮內(nèi)自由游泳30s,排除有游泳障礙的大鼠。隨機(jī)將大鼠分成正常組,假手術(shù)組及VaD模型組(模型組為術(shù)后12周,BCCAO)。VaD模型組：模型組在夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈之前腹腔注射硝普鈉(2.0mg/kg),逐層鈍性分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈(Commo Carotid Artery, CCA)。用無(wú)創(chuàng)性動(dòng)脈夾可逆性?shī)A閉雙側(cè)CCA10min,再通5min,再夾閉10min,再通,連續(xù)3次。假手術(shù)組：步驟同上,僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈,但不阻斷血流。正常組：不做任何處理。去除死亡大鼠。2.2行為學(xué)檢測(cè)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)：正常組,假手術(shù)組及VaD模型組均在術(shù)后三個(gè)月(93天到98天)進(jìn)行Morris水迷宮檢測(cè)空間學(xué)習(xí)記憶的能力。記錄各組大鼠游行過(guò)程中的游行距離和時(shí)間(逃避潛伏期)。T迷宮實(shí)驗(yàn)：水迷宮實(shí)驗(yàn)后3天,進(jìn)行T迷宮延遲交替實(shí)驗(yàn)。將大鼠去對(duì)側(cè)1次記為正確1次,去同側(cè)1次記為錯(cuò)誤1次,正確率的計(jì)算結(jié)果等于正確次數(shù)/(正確次數(shù)+錯(cuò)誤次數(shù))。連續(xù)記錄兩天的正確率,達(dá)到85%時(shí)開(kāi)始進(jìn)行全腦缺血實(shí)驗(yàn),缺血后第7天處死前再進(jìn)行T迷宮測(cè)試實(shí)驗(yàn),記錄大鼠的正確率。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。并認(rèn)為p0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.01差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三.結(jié)果：1.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)：Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：各組大鼠隨著訓(xùn)練次數(shù)的增多,逃避潛伏期明顯縮短。隨著測(cè)試時(shí)間的增加,癡呆性大鼠的逃避潛伏期較正常組及假手術(shù)較明顯延長(zhǎng)(p0.05)。測(cè)試前三天,隨著測(cè)試時(shí)間的增加,各組大鼠與自身相比,逃避潛伏期明顯縮短(p0.05)。在探索試驗(yàn)中,圓形平臺(tái)被放置對(duì)側(cè)象限時(shí),癡呆組大鼠與正常組及假手術(shù)組相比,穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少,差異有顯著性(p0.05)。同樣,癡呆大鼠與正常組及假手術(shù)組相比,大鼠在象限中游行距離的百分比明顯縮短(p0.01)�？梢暺脚_(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示三組大鼠潛伏期(p0.05)和游泳速度(p0.05)之間均無(wú)明顯差異。2.T迷宮延遲交替實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在無(wú)延遲條件下(-1days), VaD模型組大鼠與正常組及對(duì)照組大鼠之間無(wú)明顯差異(p0.05)。而在延遲條件下(7-day), VaD模型組大鼠延緩交替作業(yè)較正常組及對(duì)照組的正確率明顯下降(p0.001)。四.研究結(jié)論：1.水迷宮試驗(yàn)中,VaD模型組大鼠的逃避潛伏期較正常組及假手術(shù)組明顯延長(zhǎng)(p0.05)。說(shuō)明VaD模型組大鼠存在著明顯的認(rèn)知功能障礙。說(shuō)明慢性全腦缺血致血管癡呆性大鼠無(wú)明顯視覺(jué)損害,但卻存在明顯的運(yùn)動(dòng)功能障礙或動(dòng)機(jī)缺失。2.T迷宮實(shí)驗(yàn)中,與正常及假手術(shù)組大鼠相比,VaD模型組大鼠延緩交替作業(yè)的錯(cuò)誤率明顯增加,說(shuō)明VaD模型組大鼠存在著明顯的空間工作記憶障礙。實(shí)驗(yàn)二、Tau, PSD-95, vGluT.,vAChT及vGAT在血管癡呆性大鼠海馬中表達(dá)的研究一.研究目的慢性缺血致血管癡呆性大鼠海馬tau, PSD-95, vGluTs, vAChT及vGAT蛋白在海馬中表達(dá)的研究二.研究方法2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：選取Sprague-Dawley。隨機(jī)將大鼠分成正常組,假手術(shù)組及VaD模型組共計(jì)3組(模型組為12周,BCCAO).VaD模型組：模型組在夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈之前腹腔注射硝普鈉(2. 0mg/kg),逐層鈍性分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈(Commo Carotid Artery, CCA)。用無(wú)創(chuàng)性動(dòng)脈夾可逆性?shī)A閉雙側(cè)CCA10min,再通5min,再夾閉10min,再通,連續(xù)3次。假手術(shù)組：步驟同上,僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈,但不阻斷血流。正常組：不做任何處理。去除死亡大鼠。2.2 Western blotting檢測(cè)大鼠慢性缺血12周后,tau, PSD-95, vGluTs, vAChT及vGAT蛋白在海馬中的表達(dá)。2.3免疫組化：分析vGluTs,vAChT及vGAT蛋白在血管癡呆大鼠海馬CA1-3中的表達(dá)。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)為p0.05,p0.01被認(rèn)為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.結(jié)果3.1磷酸化的tau蛋白在血管癡呆大鼠海馬中的表達(dá)研究中,我們發(fā)現(xiàn)與正常及假手術(shù)組大鼠相比,磷酸化的tau蛋白在缺血大鼠海馬中表達(dá)明顯增加,尤其在位點(diǎn)ser404/396。3.2 PSD-95在血管癡呆大鼠海馬中的表達(dá)與正常及假手術(shù)組相比,PSD-95蛋白在缺血組大鼠海馬內(nèi)表達(dá)明顯下降。3.3觀察vGluT1, vGluT3和vAChT在VaD大鼠海馬中的表達(dá)變化Western Blotting結(jié)果顯示：與正常組與對(duì)照組相比,癡呆組大鼠海馬vGluT,水平較正常組及對(duì)照組(設(shè)作100%)明顯下降(p0.01)。癡呆組大鼠vGluT3水平與正常及對(duì)照組相比明顯下降(p0.01)。vGluT2的表達(dá),正常組,對(duì)照組及癡呆組大鼠三者之間無(wú)明顯差異(p0.05)。癡呆組大鼠海馬中vAChT的水平與正常組及對(duì)照組相比明顯下降(p0.01)。而vGAT的水平：三者之間無(wú)明顯差異(p0.05)。3.4觀察vGluT1及vGluT3的陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目在VaD大鼠海馬CA1-3區(qū)表達(dá)的變化免疫組化結(jié)果顯示：與正常組及對(duì)照組相比,癡呆組大鼠海馬CAl區(qū)vGluT1陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量明顯下降(p0.01)。與正常組及對(duì)照組相比,癡呆大鼠海馬CA2區(qū)和CA3區(qū)中vGluT1陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量明顯下降(p0.01)。除此之外,與正常組及對(duì)照組相比,癡呆大鼠CA1區(qū),vGluT3陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量也明顯下降(p0.001)。另外,癡呆大鼠CA2區(qū)及CA3區(qū)中,vGluT3陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量明顯下降(p0.01)。而癡呆大鼠海馬CA1-3區(qū)域中vGluT2陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量：正常組,對(duì)照組及癡呆組大鼠三者之間無(wú)明顯差異(p0.05)。3.5觀察vAChT陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目在MaD大鼠海馬CA1-3區(qū)表達(dá)的變化免疫組化結(jié)果顯示：與正常組及對(duì)照組相比,癡呆組大鼠海馬CA1-3區(qū)vAChT陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量表達(dá)如下：海馬CA1區(qū)：vAChT陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量明顯下降(p0.001)。海馬CA2區(qū)：vAChT陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量的表達(dá)下降(p0.01)。海馬CA3區(qū)：vAChT陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量的表達(dá)下降(p0.01)。海馬CA1-3區(qū)vGAT陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量：正常組,對(duì)照組及癡呆組大鼠之間三者無(wú)明顯差異(p0.05)。四、研究結(jié)論1.tau蛋白在突觸后膜上的過(guò)度磷酸化,PSD-95蛋白水平下降,突觸密度的減少,囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)體水平(尤其vGluT1, vGluT3及vAChT的)的變化是血管性癡呆發(fā)生的可能機(jī)制。2.除此之外,海馬CA1,CA2以及CA3環(huán)路的損壞在慢性全腦缺血大鼠致認(rèn)知功能障礙的發(fā)生發(fā)展中也扮演著重要的角色
【關(guān)鍵詞】：血管性癡呆 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) T水迷宮實(shí)驗(yàn) tau PSD-95 vAChT vGluT_1.vGluT_3 血管性癡呆
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R749.13
【目錄】：

• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-17
• 綜述17-20
• 符號(hào)說(shuō)明20-21
• 前言21-23
• 實(shí)驗(yàn)一 慢性缺血致血管癡呆性模型的制備及其行為學(xué)表達(dá)的研究23-27
• 材料和方法23-24
• 結(jié)果24-26
• 討論26-27
• 實(shí)驗(yàn)二 Tau,vGluT.,vAChT及vGAT在血管癡呆性大鼠海馬中表達(dá)的研究27-45
• 實(shí)驗(yàn)材料與儀器27-29
• 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• Western blotting檢測(cè)31
• 免疫組化檢測(cè)vGluTs、vAGhT及vGAT在VaD大鼠海馬CA1-3的表達(dá)31-33
• 結(jié)果33-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44-45
• 附加實(shí)驗(yàn)一：黃芩莖葉黃酮對(duì)血管癡呆性大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響45-60
• 前言45
• 資料和方法45-47
• 結(jié)果47-57
• 討論57-59
• 結(jié)論59-60
• Part three The effects of Scutellaria baicalensis Stem-leaf flavonoids on spatial learningand memory in chronic cerebral ischemia-induced vascular dementia of rats60-65
• 參考文獻(xiàn)65-72
• 致謝72-73
• 攻讀博士學(xué)位期間參與的課題及發(fā)表的論文73-74
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況74-75
• 英文論文175-88
• 英文論文288-106
• 英文論文3106-113

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：1058245