本文關(guān)鍵詞：NMDA受體NR1功能亞基對精神分裂癥海馬神經(jīng)發(fā)生調(diào)控的研究

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【摘要】：目的本研究通過在體實驗，探討精神分裂癥（Schizophrenia，SP）C57/BL小鼠側(cè)腦室注射NMDA （N-甲基-D-天門冬氨酸）受體激動劑后，海馬（HIP）齒狀回（DG）顆粒細(xì)胞層NR1、BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）和Ki67（細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原）陽性細(xì)胞數(shù)量的改變。在離體水平，培養(yǎng)海馬神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs），用MTS法及流式細(xì)胞檢測MK-801（地卓西平馬來酸鹽）及NMDA對海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖及凋亡的影響；免疫細(xì)胞法檢測NR1與BrdU的表達(dá)情況。探討其可能的作用機(jī)制，旨在闡述NR1在精神分裂癥發(fā)病機(jī)制中可能的潛在價值，以期為下一步研究提供實驗依據(jù)。 方法1免疫熒光法檢測C57/BL小鼠海馬DG顆粒細(xì)胞下層NR1、BrdU及Ki67的改變；2海馬NSCs原代培養(yǎng)及鑒定；3MTS法摸索MK-801及NMDA對海馬NSCs作用時間及濃度；4MTS法檢測MK-801及NMDA對海馬NSCs增殖的影響；5流式細(xì)胞技術(shù)檢測MK-801及NMDA對NSCs細(xì)胞凋亡的影響；6細(xì)胞免疫熒光法檢測NR1及BrdU的表達(dá)情況。 結(jié)果1免疫熒光法檢測海馬DG區(qū)NR1、BrdU及Ki67的改變：1）NMDA組和空白組的NR1陽性細(xì)胞數(shù)分別低于SP組20.50%和33.79%（P0.05），，低于生理鹽水（NS）組21.12%和34.48%（P0.05）；NMDA組較空白組無明顯差異（P0.05）。2）BrdU與Ki67陽性細(xì)胞數(shù)改變趨勢大體一致。NMDA組和空白組的BrdU陽性細(xì)胞數(shù)分別高于SP組34.62%和35.85%（P0.05），高于NS組32.69%和33.96%（P0.05）；NMDA組較空白組無明顯差異（P0.05）。Ki67陽性細(xì)胞變化主要表現(xiàn)為NMDA組顯著升高，分別高于SP組和NS組64.41%和41.85%（P0.001），較空白組下降11.09%（P0.01）。 2MTS法摸索MK-801及NMDA對海馬NSCs作用時間及濃度：MK-801確定作用時間為24h，終濃度為200μM；NMDA的作用時間為2h，終濃度為100μM。 3MTS法檢測MK-801及NMDA對海馬NSCs增殖的影響：其他各組較空白組的OD值均有所降低，且有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）；MK-801組較NMDA組及M+N組的OD值均降低，其細(xì)胞存活率較NMDA組降低43.83%（P0.001），較M+N組降低42.25%（P0.01）；NMDA組較M+N組的OD值無明顯差異（P0.05）。 4流式細(xì)胞儀檢測NMDA及MK-801對NSCs細(xì)胞凋亡的影響：1）細(xì)胞存活率：M+N組與Control組較NMDA組、MK-801組均增高，且兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。2）總凋亡率：M+N組與空白組較NMDA組、MK-801組均降低，且M+N組的總凋亡率分別較MK-801組和NMDA組降低26.89%和19.79%（P0.05），M+N組較空白組無顯著性差異（P0.05）。3）早期凋亡率：M+N組與空白組較NMDA組、MK-801組有所降低，且M+N組的早期凋亡率分別較MK-801組和NMDA組降低55.68%和50.45%（P0.001），M+N組較空白組無顯著性差異（P0.05）。4）晚期凋亡率：M+N組與空白組的細(xì)胞較NMDA組、MK-801組有所升高，且M+N組的晚期凋亡率分別較MK-801組和NMDA組降低41.21%和51.07%（P0.01），M+N組較空白組無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 5細(xì)胞免疫熒光法檢測NR1及BrdU的表達(dá)情況：各組間NR1及BrdU的平均光密度值無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 結(jié)論：SP小鼠側(cè)腦室注射NMDA受體激動劑后，可引起DG區(qū)顆粒層NR1陽性細(xì)胞數(shù)降低和BrdU及Ki67陽性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)的升高。MK-801及NMDA均對海馬NSCs產(chǎn)生抑制增殖作用，隨著藥物作用時間的延長和濃度的增加，MK-801及NMDA對細(xì)胞增殖的抑制作用亦逐漸加強(qiáng)。MK-801作用于海馬NSCs的終濃度及作用時間為200μM24h，NMDA的終濃度及作用時間為100μM2h。NMDA可抑制MK-801所產(chǎn)生的神經(jīng)細(xì)胞毒性，具有神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：精神分裂癥 海馬 NMDA NR1 MK-801
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R749.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 中英文縮略詞表9-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-31
• 1 動物實驗14-20
• 1.1 材料14-18
• 1.2 實驗方法和步驟18-20
• 2 細(xì)胞實驗20-30
• 2.1 材料20-24
• 2.2 實驗方法和步驟24-30
• 3 統(tǒng)計學(xué)處理30-31
• 結(jié)果31-50
• 1 側(cè)腦室注射 NMDA 后 SP 小鼠海馬 DG 區(qū) NR1、BrdU 及 Ki67 的改變31-36
• 2 在細(xì)胞水平檢測 MK-801 及 NMDA 對海馬 NSCs 的影響36-50
• 討論50-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 綜述59-68
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 致謝68-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文69-70
• 個人簡歷70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李忠杰;王保捷;丁梅;龐灝;孫雪菲;楊俊;;谷氨酸受體基因單核苷酸多態(tài)性與精神分裂癥的關(guān)聯(lián)[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2008年05期

2 唐勁松,陳曉崗;谷氨酸與精神分裂癥:尋找新的抗精神病藥物[J];國外醫(yī)學(xué)(精神病學(xué)分冊);2004年02期

3 孫大偉;金孝\

本文編號：1026223