本文關(guān)鍵詞：吡咯加合物作為慢性正己烷中毒早期神經(jīng)損傷的生物標(biāo)志物研究

  更多相關(guān)文章： 正己烷 2 5-己二酮 吡咯加合物 生物標(biāo)志物 生物接觸限值

【摘要】：研究目的 正己烷(n-hexane)是一種常用的工業(yè)溶劑,主要應(yīng)用于粘膠配制、除污、干洗、植物油提取、制鞋、印刷、油漆、制藥、家具制造及電子元件制造等行業(yè)。正己烷的急性毒性較低,但長(zhǎng)期慢性低濃度接觸可導(dǎo)致以感覺(jué)運(yùn)動(dòng)型多發(fā)性周圍神經(jīng)病為主要臨床特征的慢性中毒。 目前關(guān)于正己烷的生物標(biāo)志物的研究比較多,例如：2,5-己二酮、血影蛋白、神經(jīng)骨架蛋白、髓鞘堿性蛋白、神經(jīng)元特異烯醇化酶、神經(jīng)生長(zhǎng)因子等指標(biāo),但是,這些指標(biāo)都存在一定的缺陷。并不是正己烷最理想的生物標(biāo)志物。正己烷可在體內(nèi)代謝為2,.5-己二酮(2,5-HD),2,5-HD與氨基殘基可形成吡咯加合物。本研究以吡咯加合物為切入點(diǎn),通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)確定吡咯加合物能否成為正己烷的生物標(biāo)志物?并確定其生物接觸限值。 研究方法 1.方法建立。通過(guò)埃利希試劑建立吡咯加合物的測(cè)定方法；通過(guò)氣相色譜儀建立2,5-HD的測(cè)定方法： 2.離體研究。取大鼠的血清以及其他組織加入2,5-HD后,放入37℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行體外培養(yǎng),研究在各種條件下吡咯加合物的生成情況,以及影響吡咯加合物生成的因素； 3.毒代動(dòng)力學(xué)研究。4組大鼠,其中2組大鼠,腹腔注射2,5-HD一次,劑量分別為200,400mg/kg,在染毒后1,2,4,8,24,48,72,96和120h,經(jīng)過(guò)眼內(nèi)呲取血和壓痛取尿。另外2組大鼠,腹腔注射2,5-HD每天一次,連續(xù)5天,劑量分別為200,400mg/kg,在末次染毒后1,2,4,8,24,48,72,96,144,192,240,288,336,384h經(jīng)過(guò)眼內(nèi)呲取血和壓痛取尿,進(jìn)行尿和血清中吡咯加合物的測(cè)定。 4.吡咯加合物組織分布與2,5-HD相關(guān)性研究。4組大鼠,分別給與500,1000,2000,4000mg/kg劑量的正己烷,連續(xù)5天染毒后,在第5次染毒后24h時(shí)刻處死大鼠,取血清、尿、肝、腎、大腦、脊髓等組織,對(duì)組織中的2,5-HD和吡咯加合物的濃度進(jìn)行了測(cè)定,研究了2,5-HD和吡咯加合物的組織分布,以及在不同的組織中2.5-HD和吡咯加合物的相關(guān)性。 5.吡咯加合物作為正己烷神經(jīng)損傷生物標(biāo)志物。6組大鼠,5組分別給與500,1000,1500,2000,4000mg/kg劑量的正己烷,1組對(duì)照給與等體積的生理鹽水,每天1次,連續(xù)24周,每周一次經(jīng)過(guò)眼內(nèi)呲取血和壓痛取尿,時(shí)間為染毒后8h和24h,同時(shí)對(duì)大鼠的步態(tài)行為學(xué)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。分析吡咯加合物與神經(jīng)損傷的相關(guān)性。 研究結(jié)果 1、2,5-HD和吡咯加合物測(cè)定方法 吡咯加合物測(cè)定方法：取一定量的血清、尿、肝、腎等生物組織樣品,加入生理鹽水勻漿,取勻漿液加入鹽酸胍消化,8000g離心后,取上清液加入埃利希試劑顯色,通過(guò)酶標(biāo)儀526nm進(jìn)行測(cè)定。 2,5-HD的測(cè)定方法：取一定量的血清、尿、肝、腎等生物組織樣品,加入生理鹽水勻漿,勻漿液中加入無(wú)水碳酸鉀和鹽酸胍,加入內(nèi)標(biāo)物(環(huán)己酮),加入二氯甲烷萃取后離心,取萃取液進(jìn)氣相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。若萃取液中2,5-HD濃度較低的樣品,可使用氮?dú)獯祾?將萃取液濃縮后,進(jìn)行測(cè)定。 2、吡咯加合物體外實(shí)驗(yàn) 吡咯加合物的生成量與2,5-HD、組織的濃度具有劑量效應(yīng)關(guān)系；吡咯加合物的生成速率與環(huán)境溫度呈現(xiàn)正相關(guān)；在大腦、脊髓組織中吡咯加合物生成速度最快；人血清和大鼠血清吡咯加合物生成的速率不一樣,吡咯加合物在人血清中的生成速率約為鼠血清的3倍；2,5-HD向吡咯加合物的轉(zhuǎn)化過(guò)程并不是單方向的反應(yīng),而是一個(gè)動(dòng)態(tài)的反應(yīng),當(dāng)吡咯加合物達(dá)到濃度后,形成吡咯加合物的反應(yīng)速度越來(lái)越低,最終,2,5-HD和吡咯加合物的濃度之間達(dá)到一種平衡。 3、2,5-HD和吡咯加合物的毒代動(dòng)力學(xué) 吡咯加合物在血清中呈現(xiàn)一個(gè)時(shí)間蓄積的變化趨勢(shì),但是尿中的吡咯加合物、尿中2,5-HD、血清中2,5-HD保持一個(gè)穩(wěn)定的數(shù)值,無(wú)蓄積趨勢(shì)出現(xiàn)。血清中2,5-HD和吡咯加合物的半衰期分別為2.27±0.28h和25.3±3.34h。尿中吡咯加合物與血清(r=0.736,P0.001)和尿(r=0.730,P0.001)中2,5-HD的呈現(xiàn)相關(guān)性,血清中吡咯加合物與2,5-HD的累積暴露量呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性(r=0.965,P0.001)。 4、2,5-HD和吡咯加合物組織分布以及相關(guān)性 組織中的2,5-HD和吡咯加合物與正已烷的染毒劑量呈現(xiàn)劑量效應(yīng)反應(yīng)關(guān)系。2,5-HD在尿中含量最高,坐骨神經(jīng)中含量最低,但是,吡咯加合物在肝臟中的含量最高,血清中的含量最低。在同一組織中,游離2,5-HD、總2,5-HD和吡咯加合物具有顯著的相關(guān)性,在不同的組織中,血清中的吡咯加合物與組織中游離的2,5-HD和吡咯加合物的相關(guān)性最強(qiáng)。 5、吡咯加合物最大無(wú)作用劑量(NoAEL)的確定 尿和血清中吡咯加合物與正己烷的染毒劑量有明顯的劑量效應(yīng)反應(yīng)關(guān)系,尿和血清中的吡咯加合物的濃度在染毒后4周達(dá)到一個(gè)平臺(tái)期。尿和血清中吡咯加合物的濃度與達(dá)到癱瘓時(shí)間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān),但是尿和血清中吡咯加合物的濃度與神經(jīng)損傷的步態(tài)評(píng)分指標(biāo)成正相關(guān)。大鼠吡咯加合物的NOAEL為染毒后8h,尿和血清的接觸限值為84.6±12.1nmol/ml和7.7±1.97nmol/ml,在染毒后24h,尿和血清的接觸限值為18.2±5.14和3.9±0.88nmol/ml.體外實(shí)驗(yàn)中,人血清中吡咯加合物的生成速度為大鼠血清中的3倍,因此,人體的接觸限值為染毒后8h,尿和血清的接觸限值為253.8±36.3nmol/ml和23.1±5.91nmol/ml,吡咯加合物在染毒后24h,尿和血清的接觸限值為54.6±15.42nmol/ml和11.7±2.64nmol/ml. 結(jié)論： 1.吡咯加合物的生成不僅僅是一個(gè)簡(jiǎn)單的單向的化學(xué)反應(yīng),受到氨基酸濃度、2,5-HD、溫度等因素的影響。 2.吡咯加合物比2,5-HD半衰期長(zhǎng),并在血清中呈現(xiàn)蓄積效應(yīng),說(shuō)明血清中的吡咯加合物可能適合作為正己烷的生物標(biāo)志物。 3.組織中吡咯加合物與2,5-HD有明顯的相關(guān)性,且血清中的吡咯加合物與組織中的2,5-HD和吡咯加合物的相關(guān)最強(qiáng),說(shuō)明血清中的吡咯加合物最能有效的代表組織中的2,5-HD和吡咯加合物。 4.通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)推斷吡咯加合物在人體的接觸限值為染毒后8h,尿和血清的接觸限值為253.8±36.3nmol/ml和23.1±5.91nmol/ml,吡咯加合物在染毒后24h,尿和血清的接觸限值為54.6±15.42nmol/ml和11.7±2.64nmol/ml.
【關(guān)鍵詞】：正己烷 2 5-己二酮 吡咯加合物 生物標(biāo)志物 生物接觸限值
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.6
【目錄】：

• 摘要8-11
• Abstract11-16
• 符號(hào)說(shuō)明16-17
• 概述17-25
• 參考文獻(xiàn)22-25
• 第一章 吡咯加合物和2,5-HD測(cè)定方法的研究25-52
• 第一節(jié) 吡咯加合物含量測(cè)定方法的研究25-42
• 1 材料與方法25-27
• 2 結(jié)果與分析27-38
• 3 結(jié)論38-39
• 4 參考文獻(xiàn)39-42
• 第二節(jié) 組織中2,5-己二酮測(cè)定方法的研究42-52
• 1 材料與方法43-44
• 2 結(jié)果與分析44-49
• 3 結(jié)論49
• 4 參考文獻(xiàn)49-52
• 第二章 吡咯加合物體外實(shí)驗(yàn)研究52-68
• 1 材料與方法52-53
• 2 結(jié)果與分析53-65
• 3 討論65-66
• 4 參考文獻(xiàn)66-68
• 第三章 吡咯加合物作為正己烷生物標(biāo)志物的研究68-117
• 第一節(jié) 吡咯加合物在大鼠體內(nèi)毒代動(dòng)力學(xué)68-85
• 1 材料與方法68-70
• 2 結(jié)果與分析70-78
• 3 討論78-80
• 4 參考文獻(xiàn)80-85
• 第二節(jié) 大鼠連續(xù)染毒5天組織中2,5-HD和吡咯加合物的相關(guān)性85-100
• 1 材料與方法86-87
• 2 結(jié)果與分析87-94
• 3 討論94-95
• 4 參考文獻(xiàn)95-100
• 第三節(jié) 吡咯加合物的生物接觸限值的研究100-117
• 1 材料與方法100-102
• 2 結(jié)果與分析102-109
• 3 討論109-110
• 4 參考文獻(xiàn)110-117
• 致謝117-118
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文118-119
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表119-120
• 發(fā)表論文120-144

【共引文獻(xiàn)】

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4 姜育q，

本文編號(hào)：1015972