本文關(guān)鍵詞：Bcl-2、Caspase-3在Aβ1-42寡聚體誘導的AD模型大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)神經(jīng)元損傷中的作用

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【摘要】：目的：探討B(tài)cl-2、Caspase-3在Aβ1-42寡聚體側(cè)腦室給藥誘導的AD模型大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)神經(jīng)元損傷中的作用。方法：利用Morris水迷宮實驗篩選出逃避潛伏期少于60s的雄性SD大鼠60只隨機等分為四組（每組15只）：正常組、PBS對照組、Aβ1-42纖維組、Aβ1-42寡聚體組。參照《腦立體定位圖譜》，利用腦立體定位儀定位大鼠右側(cè)腦室，把微量給藥系統(tǒng)固定于右側(cè)腦室，通過微量給藥系統(tǒng)將Aβ1-42纖維體（濃度為1μg/μl）或Aβ1-42寡聚體（濃度為1μg/μl）注射于大鼠右側(cè)腦室，每天給藥5μg，連續(xù)給藥5天，制備AD模型；PBS對照組采用同樣的方法給予等體積的PBS；正常組不做任何處理。給藥結(jié)束后第四周，通過采用Morris水迷宮定位航行實驗對大鼠學習、記憶能力進行檢測。行為學檢測完畢后，每組隨機選取4只大鼠做心臟灌注，用玻璃分針剝離腦組織，取材、石蠟包埋，制作切片。剩余大鼠眼球摘除放血處死，冰盤上快速分離大鼠的皮質(zhì)、海馬，置于-80℃保存?zhèn)溆�。采用RT-PCR法檢測大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)的Bcl-2mRNA、Caspase-3mRNA的表達；利用Western blot法檢測大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)的Bcl-2蛋白相對表達水平以及Caspase-3蛋白活性；HE染色，利用光學顯微鏡觀察大鼠皮質(zhì)、海馬的形態(tài)學變化。采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，實驗結(jié)果以x±S表示，P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果：（1）Morris水迷宮行為學檢測：造模前，四組大鼠的逃避潛伏期無顯著性差異（P0.05）。造模后，Aβ1-42寡聚體組、Aβ1-42纖維組大鼠的逃避潛伏期與造模前相比均延長（P0.05）；而正常組、PBS對照組大鼠的逃避潛伏期造模前后比較無統(tǒng)計學意義（P0.05）；造模后的Aβ1-42寡聚體組（49.200±7.517）、Aβ1-42纖維組（37.200±5.937）大鼠的逃避潛伏期長于正常組（26.200±3.985）及PBS對照組（28.000±7.906），比較具有統(tǒng)計學意義（P0.05）；與Aβ1-42纖維組比較，Aβ1-42寡聚體組大鼠的逃避潛伏期明顯延長(P0.05)。（2）Bcl-2mRNA、Caspase-3mRNA檢測結(jié)果：與正常組以及PBS對照組比較，Aβ1-42寡聚體組及Aβ1-42纖維組的大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)的Bcl-2mRNA表達均下調(diào)（P0.05）,其中，Aβ1-42寡聚體組大鼠的皮質(zhì)、海馬區(qū)的Bcl-2mRNA表達下降得更顯著（P0.05）；與正常組相比，Caspase-3mRNA在Aβ1-42寡聚體組以及Aβ1-42纖維組大鼠的皮質(zhì)、海馬區(qū)的表達均增強（P0.05）,以Aβ1-42寡聚體組的大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)的Caspase-3mRNA上調(diào)更明顯（P0.05）；PBS對照組大鼠的皮質(zhì)、海馬區(qū)的Bcl-2mRNA、Caspase-3mRNA與正常組相比無統(tǒng)計意義（P0.05）。（3）Bcl-2、Caspase-3蛋白檢測：Western blot結(jié)果顯示，與正常組及PBS對照組比較，在Aβ1-42寡聚體組和Aβ1-42纖維組大鼠的皮質(zhì)、海馬中，Bcl-2蛋白的相對表達水平降低（P0.05），Caspase-3蛋白活性增強（P0.05），差異具有統(tǒng)計學意義，其中Aβ1-42寡聚體組的變化更顯著；PBS對照組大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)的Bcl-2蛋白表達水平以及Caspase-3蛋白活性與正常組比較無顯著差異（P0.05）。（4）由HE染色結(jié)果可知，正常組和PBS對照組大鼠的大腦皮質(zhì)神經(jīng)元細胞核呈藍色，核仁明顯，胞漿豐富；Aβ1-42纖維組大鼠的皮質(zhì)神經(jīng)元細胞核染色加深，核膜結(jié)構(gòu)不清；Aβ1-42寡聚體組大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的損傷更嚴重，細胞核染色為黑紫色，胞質(zhì)致密，核染色質(zhì)邊集，核固縮。正常組和PBS對照組大鼠的海馬神經(jīng)元數(shù)目較多，細胞核呈橢圓形或圓形，染色為淺藍色，著色均勻，核仁明顯。Aβ1-42纖維組大鼠的海馬神經(jīng)元核染色比正常組深染，，形態(tài)不規(guī)則；Aβ1-42寡聚體組大鼠的海馬神經(jīng)元排列紊亂，胞體縮小，核染色為深藍紫色，核染色質(zhì)濃縮致密濃染。結(jié)論：（1）將Aβ1-42少量多次地灌注于大鼠側(cè)腦室的造模方法，能成功地制備較為理想的AD動物模型。（2）Aβ1-42寡聚體和Aβ1-42纖維體均可導致大鼠認知功能障礙，其中，Aβ1-42寡聚體能更嚴重地影響大鼠大腦的學習記憶功能。（3）Aβ1-42寡聚體和Aβ1-42纖維體可抑制大鼠大腦皮質(zhì)、海馬區(qū)的Bcl-2表達，上調(diào)Caspase-3的表達，增強Caspase-3活性，（4）Aβ1-42寡聚體、Aβ1-42纖維體均可損傷大鼠大腦皮質(zhì)、海馬區(qū)的神經(jīng)元，其中，Aβ1-42寡聚體對神經(jīng)元的毒性更大。（5）Bcl-2、Caspase-3在Aβ1-42寡聚體誘導大鼠的神經(jīng)元損傷中發(fā)揮重要的作用，其作用機制值得進行深入研究。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 Aβ1-42寡聚體 Aβ1-42纖維體 Bcl-2 Caspase-3 細胞凋亡
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 英漢縮略詞對照表13-14
• 前言14-16
• 1 阿爾茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）的研究背景14
• 2 阿爾茨海默病的臨床表現(xiàn)及病理變化14-15
• 3 Aβ與阿爾茨海默病15-16
• 1 材料與方法16-41
• 1.1 實驗材料與儀器16-24
• 1.2 實驗方法24-41
• 1.3 統(tǒng)計學處理41
• 2 結(jié)果41-49
• 2.1 模型建立及行為學變化41-44
• 2.2 RT-PCR 結(jié)果44-46
• 2.3 Western blot 結(jié)果46-47
• 2.4 HE 染色光鏡觀察結(jié)果47-49
• 3 討論49-55
• 3.1 AD 大鼠模型的建立方法49-50
• 3.2 Aβ1-42 寡聚體神經(jīng)毒性對學習記憶能力的影響50-52
• 3.3 Bcl-2、Caspase-3 在 Aβ1-42 寡聚體誘導神經(jīng)元損傷中的作用52-55
• 4 結(jié)論55
• 參考文獻55-60
• 綜述60-70
• 參考文獻66-70
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄70-71
• 致謝71-72

本文編號：1002370