目的：研究多器官功能障礙綜合征（multiple organs dysfunction syndrome，MODS）病程中脾臟樹突狀細胞（dendritic cells，DC）的變化及MHC-Ⅱ蛋白的泛素依賴性作用，證實泛素-蛋白酶體途徑在MODS病程中對脾臟DC MHC-Ⅱ變化及DC功能的影響，探討E3泛素連接酶MARCH1在MODS第一次打擊期對脾臟DC MHC-Ⅱ泛素化調(diào)節(jié)的作用機制，并觀察干預MARCH1對MODS第一次打擊期脾臟DC免疫功能的影響，進而為MODS的免疫調(diào)節(jié)與防治尋找新的靶點。方法：采用腹腔注射酵母多糖復制MODS小鼠模型。120只小鼠隨機分為正常對照組和MODS1d、3d、5d、7d和10d組。各組實驗小鼠分別分離脾臟和胸腺組織，一部分脾臟應用免疫熒光方法檢測CD11c+DC數(shù)量的變化，剩余組織應用MiniMACS免疫磁珠分別分離DC和T細胞用于體外細胞學實驗。運用流式細胞術、Real-Time PCR、Western Blot和MTT法等檢測DC對CD86、MHC-Ⅱ、泛素、E3泛素連接酶（MARCH1-8）的表達，DC分泌IL-12、TNF-α的水平以及誘... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
    一、實驗材料
        1、實驗試劑與藥品
        2、實驗儀器
    二、實驗動物模型與分組
        1、實驗動物模型
        2、實驗分組
    三、標本采集與處理
    四、實驗方法
        1、脾臟組織 HE 染色光鏡觀察
        2、脾臟組織免疫熒光染色標記 CD11c+DC 數(shù)量
        3、小鼠脾臟 DC 的分離與提取
        4、小鼠胸腺 T 淋巴細胞的分離與提取
        5、流式細胞術檢測分離細胞純度及 DC 凋亡率和表面 CD86、MHC-Ⅱ
        6、Real-Time PCR 檢測各種因子 mRNA 水平的表達
        7、Western Blot 檢測 MHC-Ⅱ和 MARCH1 蛋白的表達
        8、免疫共沉淀檢測 MHC-Ⅱ蛋白的泛素化水平
        9、pMB-HA-MARCH1 真核表達載體的構建
        10、pMB-HA-MARCH1 真核表達載體和 SiRNA 的脂質(zhì)體轉染進 DC
        11、Annexin-V/PI 雙標記染色法檢測 DC 凋亡率
        12、MTT 法檢測 T 細胞增殖活性
    五、統(tǒng)計學分析
結果
    第一部分：小鼠 MODS 病程中脾臟 DC MHC-Ⅱ蛋白的泛素相關性研究
        一、MODS 病程中小鼠生理體征的變化
        二、MODS 病程中小鼠脾臟 DC 的變化
            1、MODS 病程中小鼠脾臟組織病理學的變化
            2、MODS 病程中小鼠脾臟 CD11c+DC 數(shù)量的變化
            3、MODS 病程中小鼠脾臟 DC 表面分子和分泌因子的變化
            4、MODS 病程中小鼠脾臟 DC 對 T 細胞功能影響的變化
        三、MODS 病程中小鼠脾臟 DC 泛素和 E3 泛素連接酶表達的變化
            1、MODS 病程中小鼠脾臟 DC 泛素 mRNA 表達的變化
            2、MODS 病程中小鼠脾臟 DC E3 泛素連接酶（MARCH1-8）mRNA 表達的變化
            3、MODS 病程中小鼠脾臟 DC MARCH1 蛋白表達的變化
            4、MODS 病程中 MARCH1 與 MHC-Ⅱ蛋白表達的比較
    第二部分：脾臟 DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化的分子機制及干預研究
        一、MODS 1d 組 DC MHC-Ⅱ蛋白水平變化的泛素依賴性
            1、MODS 1d 組 DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化水平的變化
            2、正常對照組及 MODS 1d 組 DC 經(jīng) MG132 處理前后 MHC-Ⅱ的變化
            3、正常對照組及 MODS 1d 組 DC 經(jīng) MG132 處理前后對 T 細胞影響的變化
        二、pMB-HA-MARCH1 真核表達載體和 MARCH1 siRNA 的構建
            1、pMB-HA-MARCH1 真核表達載體的構建
            2、MARCH1 siRNA 的構建
        三、干預 MARCH1 對 MODS 1d 組 MHC-Ⅱ及 DC 免疫功能影響的變化
            1、干預 MARCH1 對 MODS 1d 組 DC 基本生理狀況影響的變化
            2、干預 MARCH1 對 MODS 1d 組 DC MHC-Ⅱ影響的變化
            3、干預 MARCH1 對 MODS 1d 組 DC 對 T 細胞功能影響的變化
討論
    一、小鼠 MODS 模型中脾臟 DC 的變化與意義
        1、關于小鼠 MODS 模型的應用與評價
        2、MODS 病程中脾臟 DC 分化、成熟及免疫功能的變化與意義
    二、MODS 中脾臟 DC MHC-Ⅱ的變化規(guī)律
    三、在 MODS 病程中泛素-蛋白酶體途徑對脾臟 DC MHC-Ⅱ蛋白水平變化的影響作用
        1、MODS 病程中脾臟 DC 泛素 mRNA 水平表達的變化規(guī)律
        2、MODS 病程中脾臟 DC E3 泛素連接酶 mRNA 和蛋白水平表達的變化規(guī)律
        3、MODS 病程中 MARCH1 與 MHC-Ⅱ蛋白表達的比較
    四、MODS 第一次打擊期脾臟 DC MHC-Ⅱ蛋白水平變化的分子機制探討及干預效應
        1、MODS 1d 組脾臟 DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化水平的變化
        2、MODS 1d 組脾臟 DC MHC-Ⅱ泛素化降解途徑的分子效應
        3、關于 pMB-HA-MARCH1 真核表達載體和 MARCH1 siRNA 的構建與應用
        4、干預 MARCH1 對 MODS 1d 組脾臟 DC MHC-Ⅱ蛋白水平及泛素化程度的影響
        5、干預 MARCH1 對 MODS 1d 組脾臟 DC 免疫功能的影響
結論
參考文獻
綜述
個人簡歷
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]MODS小鼠脾臟樹突細胞PD-1、PD-L1的表達變化及其意義[J]. 劉茜,陸江陽,王曉虹,曲冰杰,李韶然,康佳蕊.  解放軍醫(yī)學雜志. 2010(01)
[2]多器官功能障礙綜合征52例尸檢脾及脾樹突狀細胞的病理學觀察[J]. 陸江陽,王曉虹,劉茜,楊毅,李玲.  診斷病理學雜志. 2007(03)
[3]輔助性T細胞的研究概況及進展[J]. 王輝,游晶.  世界華人消化雜志. 2007(13)
[4]脾臟樹突狀細胞在多器官功能障礙綜合征中的變化及意義[J]. 陸江陽,李志宏,王曉虹,楊毅,李玲.  中國危重病急救醫(yī)學. 2006(01)
[5]單核細胞HLA-DR抗原在MODS中的表達及白藜蘆醇苷的保護機制[J]. 譚波,王興勇.  兒科藥學雜志. 2005(04)
[6]燒傷膿毒癥早期心肌內(nèi)泛素mRNA的表達變化及意義[J]. 申傳安,柴家科,盛志勇,蔣金珩.  解放軍醫(yī)學雜志. 2003(11)
[7]燒傷膿毒癥早期膈肌內(nèi)泛素基因和蛋白的表達變化及意義[J]. 申傳安,柴家科,姚詠明,蔣金珩.  中國危重病急救醫(yī)學. 2003(11)
[8]小鼠遲發(fā)型多器官功能障礙綜合征模型復制及病理學觀察[J]. 孫宇,陸江陽,王曉虹,胡森,楊毅,佟欣.  中國危重病急救醫(yī)學. 2003(01)
[9]MODS大鼠胸腺樹突狀細胞病理改變及作用的研究[J]. 陸江陽,王曉虹,孫宇,胡森,楊毅,李玲.  中國危重病急救醫(yī)學. 2001(11)



本文編號：3212151