發(fā)布時間：2021-06-05 05:27

　　目的:探討自噬流與脂多糖（LPS）誘導腎小管上皮細胞（HK-2細胞）炎癥反應的關系,檢測Toll樣受體（TLR4）是否參與其中。方法:實驗分為以下5組:陰性對照組、LPS（100μg/mL）組、LPS（100μg/mL）+雷帕霉素（RAP）（10μmol/L）組、LPS（100μg/mL）+氯喹（CQ）（10μmol/L）組、LPS（100μg/mL）+TAK242（TLR4拮抗劑）（2μmol/L）組,刺激HK-2細胞,通過實時熒光定量聚合酶鏈反應（qPCR）檢測白細胞介素-1β（IL-1β）、TLR4、選擇性自噬接頭蛋白（P62）和自噬微管相關蛋白1輕鏈3（LC3）mRNA表達和Western blotting檢測IL-1β、TLR4、P62和LC3蛋白表達;采用自噬雙標腺病毒（mRFP-GFP-LC3）轉(zhuǎn)染HK-2細胞檢測自噬流,在共聚焦顯微鏡下觀察自噬體與自噬溶酶體數(shù)量變化以判斷自噬流表達情況。結果:與陰性對照組比較,LPS可誘導HK-2細胞IL-1β、TLR4和P62 mRNA和蛋白表達上調(diào)（P<0.05）,LC3 mRNA和LC3-Ⅱ蛋白表達上調(diào)（P<0.05）... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學學報. 2020,37(05)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

qPCR檢測RAP、CQ、TAK242對LPS刺激HK-2細胞IL-1β、TLR4、LC3、P62基因表達的影響

圖1 qPCR檢測RAP、CQ、TAK242對LPS刺激HK-2細胞IL-1β、TLR4、LC3、P62基因表達的影響2.3.2 mRFP-GFP-LC3檢測自噬流結果

與陰性對照組比較，LPS組黃色斑點數(shù)量明顯增多，紅色斑點很少，表明自噬體明顯增多，自噬溶酶體很少，說明LPS可誘導自噬流障礙；與LPS組比較，LPS+RAP組紅色斑點數(shù)量明顯增多，表明自噬溶酶體明顯增多，說明RAP改善自噬流障礙；LPS+CQ組黃色斑點數(shù)量增多，基本無紅色斑點，表明自噬體增多，自噬溶酶體基本不存在，說明CQ使自噬流受阻；LPS+TAK242組紅色斑點數(shù)量明顯增多，表明自噬溶酶體明顯增多，與RAP組的結果相似，說明TAK242也可逆轉(zhuǎn)LPS誘導的自噬流障礙，TLR4可調(diào)控自噬流，見圖3。3 討論


本文編號：3211530