冠狀病毒是目前已知的最大的RNA病毒,其基因組全長為27～31Kb。冠狀病毒龐大的基因組以及攜帶其復(fù)制酶序列的質(zhì)粒在細(xì)菌中的不穩(wěn)定性長期阻礙了冠狀病毒反向遺傳學(xué)的發(fā)展,直到2000年Almazan等首次利用DI-RNA和BAC質(zhì)粒系統(tǒng)成功構(gòu)建了TGEV的全長cDNA感染性克隆。經(jīng)過幾年的發(fā)展,已經(jīng)成功開發(fā)出了三種冠狀病毒的拯救系統(tǒng),包括基于BAC的拯救系統(tǒng)、體外連接覆蓋基因組全長的cDNA策略以及基于痘苗病毒載體的拯救系統(tǒng)。HCoV-OC43屬于Ⅱ組冠狀病毒,其基因組全長約為30.7Kb,為不分節(jié)段的單股正鏈RNA,具有典型的5’帽子結(jié)構(gòu)和3’poly A尾結(jié)構(gòu)。基因組結(jié)構(gòu)為5’-polymerase-HE-S-E-M-N,另外還有兩個(gè)非結(jié)構(gòu)基因NS2和NS12.9分別位于HE之前以及S和E基因之間,其功能目前還不清楚。由于HCoV-OC43和SARS病毒一樣同屬于Ⅱ組冠狀病毒,因此可以將其作為SARS的模式病毒來研究,以克服SARS研究對(duì)P3實(shí)驗(yàn)室的依賴性。2006年,加拿大學(xué)者成功構(gòu)建基于BAC系統(tǒng)的HCoV-OC43全長cDNA感染性克隆為我們進(jìn)一步研究HCoV-OC43提供了很... 

【文章來源】：中國疾病預(yù)防控制中心北京市

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞
前言
材料和方法
結(jié)果
    第一部分 OC43-FL病毒的拯救及鑒定
        1. pBAC-OC43~(FL)質(zhì)粒的鑒定
        2. OC43-FL病毒的拯救
        3. OC43-FL病毒的鑒定
        本章小結(jié)
    第二部分 帶GFP重組pBAC-OC43質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        1. 構(gòu)建策略
        2. GFP取代NS2的重組pBAC-OC43的構(gòu)建與鑒定
            2.1 帶GFP的重組片段的構(gòu)建與克隆
            2.2 GFP取代NS2的重組pBAC-OC43質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        3. GFP取代NS12.9的重組pBAC-OC43質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
            3.1 帶GFP的重組片段的構(gòu)建與克隆
            3.2 GFP取代NS12.9的重組pBAC-OC43質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        4. GFP插入N基因后的重組pBAC-OC43質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
            4.1 帶GFP的重組片段的構(gòu)建與克隆
            4.2 GFP插入N基因后的重組pBAC-OC43質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        本章小結(jié)
    第三部分 帶GFP的重組HCoV-OC43病毒的拯救及體外鑒定
        1. GFP取代NS2的重組HCoV-OC43病毒的拯救及鑒定
            1.1 GFP表達(dá)情況的連續(xù)觀察
            1.2 免疫熒光和Western blot檢測
            1.3 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的傳代擴(kuò)增
            1.4 上清感染實(shí)驗(yàn)
            1.5 細(xì)胞凍融裂解上清感染實(shí)驗(yàn)
        2. GFP取代NS12. 9的重組HCoV-OC43病毒的拯救及鑒定
            2.1 GFP表達(dá)情況的連續(xù)觀察
            2.2 免疫熒光檢測
            2.3 上清感染實(shí)驗(yàn)
        3. GFP插入N基因后的重組HCoV-OC43病毒的拯救
        本章小結(jié)
討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    RNA病毒感染性克隆技術(shù)及其應(yīng)用
        參考文獻(xiàn)
    冠狀病毒載體研究進(jìn)展
        參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3204926